肺癌腫瘤抑制物－1基因在腎腺癌伴骨轉(zhuǎn)移組織的表達(dá)及臨床意義

陳劍鋒，陳安民，郭風(fēng)勁，趙文斌，袁雪峰，王茂朋，張 帆

肺癌腫瘤抑制物－1基因在腎腺癌伴骨轉(zhuǎn)移組織的表達(dá)及臨床意義

陳劍鋒，陳安民，郭風(fēng)勁，趙文斌，袁雪峰，王茂朋，張 帆

目的 探討肺癌腫瘤抑制物－1(TSLC1)基因在腎腺癌伴骨轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué) (SP)法檢測TSLC1在54例腎腺癌無骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織標(biāo)本，10例腎腺癌伴骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織標(biāo)本及10例正常腎組織中的表達(dá)。結(jié)果 TSLC1蛋白在腎腺癌無骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中陽性表達(dá)率為53.7%(29/54)，在腎腺癌伴骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中陽性表達(dá)率為2/10，在正常腎組織中的陽性表達(dá)率為10/10，三組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)。TSLC1蛋白在腎腺癌病理分級Ⅰ～Ⅱ級中陽性表達(dá)率為54.0%，在Ⅲ級中陽性表達(dá)率為21.4%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05);在腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中陽性表達(dá)率為20.0%，在無骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中陽性表達(dá)率為61.1%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)。結(jié)論 TSLC1基因可能與腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，可能對腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的早期診斷及預(yù)后評估具有重要意義。

腎腺癌;肺癌腫瘤抑制物－1;免疫組織化學(xué);骨轉(zhuǎn)移

腎細(xì)胞癌 (renal adenocarcinoma，RA)亦稱腎腺癌，占所有成人腫瘤的3%。RA是成年人中最常見的一種腎臟腫瘤，同時也是泌尿系腫瘤中最致命的惡性腫瘤，常伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移［1］。研究新的抑癌基因?qū)A伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的作用及其生物學(xué)特性的改變，對于闡明腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的發(fā)病機(jī)制，并指導(dǎo)臨床治療具有重要意義。抑癌基因肺癌腫瘤抑制物－1(tumor suppresser in lung cancer 1，TSLC1)屬于免疫球蛋白超家族，位于人染色體11q23.2［2］。TSLC1編碼的蛋白質(zhì)參與細(xì)胞間黏附、細(xì)胞運(yùn)動、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及免疫調(diào)節(jié)［3］。目前關(guān)于TSLC1基因在腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的報道很少，本研究旨在觀測TSLC1基因在腎腺癌及伴骨轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)情況，為腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的早期診斷和治療提供臨床依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 為2008年8月—2009年10月華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院泌尿外科手術(shù)治療患者手術(shù)切除的病理組織，其中腎腺癌無骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織標(biāo)本54例，腎腺癌伴骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織標(biāo)本10例。按照2004年WHO腎腺癌的病理分級標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ～Ⅱ級50例，Ⅲ級14例。患者均經(jīng)臨床、實(shí)驗室檢查及病理檢查確診。64例患者中男38例，女26例，年齡28～72歲，平均54.7歲。對照組為正常腎組織標(biāo)本 (來源于因腎腺癌行擴(kuò)大切除術(shù)的標(biāo)本，所取組織肉眼觀察距腫瘤邊界至少1 cm以上)，共10例。

1.2 主要試劑和儀器 鼠抗人TSLC1單克隆抗體及SP試劑盒 (北京中山生物技術(shù)公司產(chǎn)品)，雙目顯微鏡及BH－2顯微照相系統(tǒng)，HPIAS－1000高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)(武漢千屏影像技術(shù)有限公司)。

1.3 實(shí)驗方法 對所選的標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué) (SP)法染色，將標(biāo)本經(jīng)甲醛溶液固定，脫水，石蠟包埋。4 μm厚連續(xù)切片，石蠟切片65℃烘烤、脫蠟。3%的過氧化氫封閉10 min，0.1%的檸檬酸微波修復(fù)抗原，室溫孵育30 min，滴加一抗，于4℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗3×5 min(用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照);滴加生物素標(biāo)記二抗，37℃孵育30 min，PBS沖洗3×5 min;滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30 min，PBS沖洗3×5 min;DAB/H2O2反應(yīng)染色，自來水充分沖洗后，蘇木精復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片，光鏡下觀察。

1.4 結(jié)果判定 TSLC1蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)中，以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒為陽性。根據(jù)切片中陽性細(xì)胞率及陽性細(xì)胞質(zhì)中顆粒數(shù)及顆粒大小分為如下級別:細(xì)胞不著色或陽性染色細(xì)胞＜25%為陰性 (－)，25% ～50%為弱陽性 (+)，51% ～75%為陽性(++)，＞75%為強(qiáng)陽性 (+++)，采用半定量法進(jìn)行評分。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 實(shí)驗數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS 12.0統(tǒng)計軟件分析，TSLC1蛋白陽性率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TSLC1蛋白在腎腺癌及伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移組織和正常腎組織的表達(dá) TSLC1蛋白陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色顆粒狀或斑片狀，部分陽性表達(dá)定位在細(xì)胞膜，特別是細(xì)胞與細(xì)胞的交界處 (見圖1～3)。54例腎腺癌無骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中TSLC1蛋白陽性表達(dá)29例，陽性表達(dá)率為53.7%。而在10例正常腎組織中TSLC1蛋白均呈陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為10/10。在腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中，2例弱陽性表達(dá)，8例陰性表達(dá)，TSLC1陽性表達(dá)率為2/10。TSLC1在腎腺癌伴骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中的陽性表達(dá)率明顯低于腎腺癌無骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (χ2=4.84，P=0.028)，腎腺癌無骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中TSLC1的陽性表達(dá)率明顯低于正常腎組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (χ2=6.059，P=0.014，見表1)。

2.2 TSLC1蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 TSLC1蛋白在腎腺癌Ⅰ～Ⅱ級中的表達(dá)高于Ⅲ級，在腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移患者癌組織中的表達(dá)低于未轉(zhuǎn)移者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05);不同年齡、不同腫瘤直徑患者其TSLC1陽性表達(dá)率間差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05，見表2)。

表1 TSLC1蛋白在腎腺癌及伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移組織和正常腎組織的表達(dá) (例)Table 1 Expressions of TSCL1 in tissues of renal adenocarcinoma with or without bone metastasis and normal kidney tissue

表2 TSLC1蛋白在腎腺癌和腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Table 2 Relationship between expressions of TSCL1 in tissuses of renal adenocarcinoma or renal adenocarcionma with bone metastasis and their clinicopathological features

圖1 TSLC1在正常腎組織中的表達(dá)(SP×400)Figure 1 TSLC1 expression in normal kidney tissue

圖2 TSLC1在腎腺癌組織中的表達(dá)(SP×400)Figure 2 TSLC1 expression in renal adenocarcinoma tissue

圖3 TSLC1在腎腺癌骨轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá) (SP×400)Figure 3 TSLC1 expression in tissue of renal adenocarcinoma with bone metastasis

3 討論

目前相關(guān)研究表明TSLC1表達(dá)減少或缺失與多種腫瘤不良預(yù)后有關(guān)。MURAKAMI于2002年通過功能互補(bǔ)方法，轉(zhuǎn)染正常11號染色體長臂DNA片斷到非小細(xì)胞肺癌 (NSCLC)細(xì)胞株A549，然后將轉(zhuǎn)染細(xì)胞注入裸鼠后背，以觀察腫瘤是否形成來判斷該DNA片斷是否包括抑癌基因，結(jié)果發(fā)現(xiàn)和證實(shí)了人染色體11q23.2處的一個嶄新的腫瘤抑制基因。該基因能明顯抑制肺癌細(xì)胞株的惡性生長，命名為 TSLC1基因［4］。Pletcher等［5］通過物理和測序繪圖方法，從人工酵母染色體上分離出1.6 Mb片斷，轉(zhuǎn)染到NSCLC細(xì)胞株A549中，然后將細(xì)胞導(dǎo)入裸鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)其能抑止腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，推測其抑癌作用是通過細(xì)胞－亞細(xì)胞之間的相互作用。TSLC1在控制腫瘤的惡性進(jìn)展中起中樞效應(yīng)器基因的作用，可作為腫瘤診斷的一種基本生物標(biāo)記，有助于為有高度復(fù)發(fā)可能的患者制定輔助治療策略。TSLC1 在許多腫瘤組織如肺癌［2，6］、神經(jīng)膠質(zhì)瘤［7］、宮頸癌［8］、食管癌［9］、乳腺癌［10］等腫瘤組織中表現(xiàn)為低表達(dá)或缺失，而在成人急性T淋巴細(xì)胞性白血病卻表達(dá)增高［11］。

本研究結(jié)果表明，正常腎組織中TSLC1蛋白廣泛表達(dá)(100%)，腎腺癌無骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中TSLC1蛋白的陽性表達(dá)率 (53.1%)降低，在腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中陽性表達(dá)率 (20.0%)更低，因而推測TSLC1蛋白的表達(dá)減少可能是腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生機(jī)制之一。相關(guān)文獻(xiàn)也證實(shí)TSLC1基因表達(dá)可使鱗狀上皮緊密連接，從而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移及浸潤［12］。研究證實(shí):啟動子區(qū)5＇－2CpG島的高甲基化是TSLC1基因失活的主要原因［6］。TSLC1基因失活、抑癌基因沉默與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示腎腺癌伴骨轉(zhuǎn)移患者癌組織TSLC1蛋白陽性表達(dá)率顯著低于腎腺癌無骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織和正常腎組織，表明TSLC1蛋白可能與腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的侵襲有密切關(guān)系。TSLC1表達(dá)與腎腺癌分級及有無伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與患者的年齡、腫瘤大小無關(guān)，該研究結(jié)果說明TSLC1可能影響腎腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，TSLC1蛋白可以作為判斷腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移惡性程度的一個重要的生物學(xué)指標(biāo)。

根據(jù)本研究TSLC1蛋白在腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移患者的癌組織中表達(dá)下調(diào)或缺失的結(jié)果，推測其在腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生、發(fā)展以及腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的過程中可能發(fā)揮相應(yīng)作用，有望成為腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的診斷、惡性進(jìn)展及預(yù)后判斷的有效指標(biāo)，并為腎腺癌伴發(fā)骨轉(zhuǎn)移的基因治療提供理想靶點(diǎn)。

1 劉旭，張東亮，劉文虎.mTOR抑制劑治療腎細(xì)胞癌的研究進(jìn)展［J］.中國全科醫(yī)學(xué)，2011，14(1):323.

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5 Pletcher MT，Nobukuni T，F(xiàn)ukuhara H，et al.Identification of tumor suppressor candidate genes by physical and sequence mapping of the TSLC1 region of human chromosome 11q23 ［J］ .Gene，2001，273:181－189.

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Expression and Clinical Significance of TSLC1 Gene in Renal Adenocarcinoma with Bone Metastasis

CHEN Jian－feng，CHEN An－min，GUO Feng－jin，et al.Department of Orthopedics，Affiliated Tongji Hospital of Tongji Medical College，Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China

ObjectiveTo discuss the relationship between the expressions of tumor suppresser in lung cancer 1(TSLC1)gene and the clinical and pathological features of renal adenocarcinoma with bone metastasis.MethodsThe expression of TSLC1 were detected by SP immunohistochemical method in 74 samples(54 were from renal adenocarcinoma，10 were from renal adenocarcinoma with bone metastasis and 10 were from normal renal tissues).ResultsThe positive expression rates of TSLC1 were 53.7%(29/54)in renal adenocarcinoma，2/10 in renal adenocarcinoma with bone metastasis and 10/10 in normal renal tissues(P＜0.05).The positive expression rates of TSLC1 were 54.0%in renal adenocarcinoma tissues of pathological gradeⅠ～Ⅱ，and 21.4%in those of pathological gradeⅢ (P＜0.05);positive expression rate were 20.0%in renal adenocarcinoma with bone metastases and 61.1%in those without bone metastases(P＜0.05).ConclusionTSLC1 may be associated with the pathogenesis and development of renal adenocarcinoma and its bone metastasis and might be of great importance in early diagnosis and the prognosis evaluation of renal adenocarcinoma.

Renal adenocarcinoma;Tumor suppresser in lung cancer 1;Immunohistochemistry;Bone metastasis

R 737.11

A

1007－9572(2011)12－4167－03

430030湖北省武漢市，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院骨科

陳安民，430030湖北省武漢市，華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院骨科

2011－02－26;

2011－11－10)

(本文編輯:王俊懿)