結直腸癌患者血清Th 1/Th 2細胞因子水平變化及其臨床意義研究

陳遠崇，陳竹雨

結直腸癌患者血清Th 1/Th 2細胞因子水平變化及其臨床意義研究

陳遠崇，陳竹雨

目的 探討結直腸癌病理分期、組織分型及手術治療對血清Th1/Th2細胞因子變化的不同影響及其臨床意義。方法 采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法 (ELISA)檢測45例結直腸癌患者和10例健康體檢者 (正常對照組)外周血中干擾素γ(IFN－γ)、白介素 (IL) －2、IL－4、IL－10的水平。結果 正常對照組、Dukes'B組、Dukes'C組和Dukes'D組IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比較，差異有統計學意義 (P＜0.01)。其中Dukes'B組、Dukes'C組和Dukes'D組較正常對照組IFN－γ、IL－2明顯降低，IL－4、IL－10明顯升高，差異均有統計學意義 (P＜0.05);結直腸癌患者隨著Dukes'分期的升高，IFN－γ、IL－2逐漸降低，IL－4、IL－10逐漸升高，差異均有統計學意義 (P＜0.05)。腺癌組和黏液性腺癌組IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比較，差異無統計學意義 (P＞0.05)。術后較術前IFN－γ、IL－2明顯升高，IL－4、IL－10明顯降低，差異均有統計學意義 (P＜0.01)。但術后較正常對照組IFN－γ、IL－2明顯降低，IL－4、IL－10明顯升高，差異均有統計學意義 (P＜0.01)。結論 結直腸癌患者外周血中Th1、Th2免疫反應失衡，向Th2方向漂移;結直腸癌患者外周血Th1/Th2失衡程度與臨床分期呈正相關，與腫瘤的組織分型無關;術后Th1/Th2失衡有可能逆轉。

結直腸腫瘤;T淋巴細胞;腫瘤分期;組織分型

結直腸癌是常見的消化道腫瘤之一，嚴重危害人類健康。臨床面對的多為進展期腫瘤，雖然目前治療水平有了顯著進步，但術后轉移和復發的比例仍可達40%～70%?，F代研究已證實，1型、2型輔助性T淋巴細胞 (Th1、Th2)平衡失調會造成機體免疫抑制狀態，與腫瘤的發生、發展、擴散及復發均密切相關。本研究采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)對結直腸癌的病理分期、組織分型及其手術治療前后細胞因子的變化進行分析，從而了解免疫功能變化情況，以期望有助于指導治療和判斷預后。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取張家口市第五醫院和張家口市第一醫院普通外科2005年3月—2010年10月行手術治療的結直腸癌患者45例為研究對象，其中男23例，女22例;年齡33～62歲，平均年齡 (52.55±13.69)歲;Dukes分期:B期24例，C期17例，D期4例;組織學分型:腺癌39例，黏液性腺癌6例。所切除標本均已經病理學診斷證實。外周血抽取前未經化學治療或放射治療。同時收集同時期體檢健康者10例為正常對照組，其中男5例，女5例;年齡30～65歲，平均年齡(50.82±13.69)歲。受檢者均無免疫系統性疾病。

1.2 試劑 Multiskan MK3酶標儀，美國Thermo公司;干擾素γ(IFN－γ)、白介素 (IL) －2和IL－4、IL－10檢測試劑盒，上海依科賽生物制品有限公司。

1.3 方法

1.3.1 血清標本的采集 正常對照組及結直腸癌患者手術前后各采取外周靜脈血2 ml，3 000 r/min，離心5 min，收集血清，－20℃儲存備用。

1.3.2 細胞因子的檢測 采用ELISA檢測試劑盒，嚴格按照試劑盒說明書操作，檢測血清中 IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平。

1.4 統計學方法 采用SPSS 13.0統計學軟件進行統計學分析，計量資料采用(±s)表示，采用t檢驗和方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 正常對照組和不同病理分期結直腸癌血清細胞因子水平比較 正常對照組、Dukes'B組、Dukes'C組和Dukes'D組IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比較，差異有統計學意義(P＜0.01)。其中Dukes'B組、Dukes'C組和Dukes'D組較正常對照組IFN－γ、IL－2明顯降低，IL－4、IL－10明顯升高，差異均有統計學意義 (P＜0.05);結直腸癌患者隨著Dukes'分期的升高，IFN－γ、IL－2逐漸降低，IL－4、IL－10逐漸升高，差異均有統計學意義 (P＜0.05，見表1)。

2.2 不同組織分型結直腸癌血清細胞因子水平比較 腺癌組和黏液性腺癌組IFN－γ、IL－2、IL－4和IL－10水平比較，差異無統計學意義 (P＞0.05，見表2)。

2.3 手術前后結直腸癌血清細胞因子水平比較 術后結直腸癌患者較術前IFN－γ、IL－2明顯升高，IL－4、IL－10明顯降低，差異均有統計學意義 (q值分別為4.15、5.63、4.96和6.92，P＜0.01)。但術后較正常對照組IFN－γ、IL－2明顯降低，IL－4、IL－10明顯升高，差異均有統計學意義 (q值分別為6.21、7.48、5.26和6.69，P＜0.01，見表3)。

表1 正常對照組和不同病理分期結直腸癌血清細胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 1 Serum level of cytokine concentration in different pathological colorectal cancer colorectal cancer patients and normal control

表1 正常對照組和不同病理分期結直腸癌血清細胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 1 Serum level of cytokine concentration in different pathological colorectal cancer colorectal cancer patients and normal control

注:IFN－γ=干擾素γ，IL－2=白介素2

IL－2 IL－4 IL－10正常對照組 10 151.83±18.13 121.68± 9.63 43.71± 9.11 12組別 例數 IFN－γ 0.13±13.51 Dukes'B組 24 105.82±23.12 89.66±20.15 75.91±21.06 158.47±20.87 Dukes'C組 17 80.17±18.37 73.17±17.44 97.03±18.83 198.15±17.90 Dukes'D組 4 44.58±13.93 42.98±10.03 120.55±15.47 211.62±15.39 F 0.000 0.000 0.000 0.000 37.202 25.708 24.587 46.782 P值值

表2 不同組織分型結直腸癌血清細胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 2 Serum level of cytokine concentration in different tissue－typing colorectal cancer patients

表2 不同組織分型結直腸癌血清細胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 2 Serum level of cytokine concentration in different tissue－typing colorectal cancer patients

.43±23.21黏液性腺癌組 6 95.13±13.20 78.68±12.78 98.79±12.03 193.13±13.22 t IL－2 IL－4 IL－10腺癌組 39 89.83±28.13 83.52±21.63 104.15±20.91 187組別 例數 IFN－γ 1.319 1.289 1.295 1.303 P值值0.163 0.184 0.192 0.176

表3 手術前后結直腸癌血清細胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 3 Serum level of cytokine concentration in colorectal cancer patients before and after operation

表3 手術前后結直腸癌血清細胞因子水平比較(±s，ng/L)Table 3 Serum level of cytokine concentration in colorectal cancer patients before and after operation

IL－2 IL－4 IL－10正常對照組 10 151.83±18.13 121.68±9.63 43.71± 9.11 12組別 例數 IFN－γ 0.13±13.51術前 45 91.54±14.54 81.72±8.22 101.94±10.28 189.31±15.73術后 45 130.82±17.65 113.29±11.35 68.42± 8.19 157.28±14.66 F 92.616 141.699 236.795 107.037 P值值0.000 0.000 0.000 0.000

3 討論

輔助性T淋巴細胞 (Th)根據分泌細胞因子及效應的不同分為兩類:Th1和Th2。Th1細胞分泌IFN－γ和IL－2等，主要介導細胞免疫應答，能夠增強免疫殺傷細胞的細胞毒性作用，激發遲發型超敏反應;Th2細胞分泌IL－4、IL－10等，主要介導體液免疫，促進抗體的產生［1］。機體處于正常狀態時，Th1/Th2類細胞因子處于平衡狀態。一旦Th1/Th2平衡失調，將會造成機體各種疾病，如過敏性疾病、自身免疫性疾病、腫瘤等。

隨著腫瘤的進展，患者均會出現免疫抑制狀態，其機制十分復雜，最主要的原因是腫瘤細胞本身造成的。機體的抗腫瘤免疫以Th1細胞介導的細胞免疫為主。當Th1/Th2平衡失調，Th1向Th2漂移時，便會造成腫瘤免疫功能嚴重減弱，促使腫瘤細胞能夠逃避免疫系統的攻擊，從而大量增殖［2－4］。

結直腸癌的診治強調早期診斷、早期治療，但其在早期常無明顯癥狀，只能依靠患者的主動篩查發現。因此，臨床上面對的多為進展期腫瘤。本研究中，經病理證實研究對象的結直腸癌病理分期多為Dukes'B期和C期。從組織分型上來講多為腺癌。與正常對照組比較，結直腸癌患者血清中Th1細胞因子 (IFN－γ、IL－2)水平下降，而Th2細胞因子 (IL－4、IL－10)水平顯著升高;并且，Dukes病理分期之間存在差異，隨著病情加重，Th1細胞因子下降幅度增加，Th2型細胞因子逐漸上升。另外，腺癌組與黏液腺癌組之間未見明顯差異，可見組織分型對細胞因子的表達無影響。

目前，結直腸癌的主要治療方法仍是以手術為主的綜合治療。盡管醫療水平有了顯著進步，但術后5年內，結直腸癌轉移和復發的比例仍可達40%～70%。手術只能清除肉眼所見腫塊，并不能確保清除所有腫瘤細胞。殘留的腫瘤細胞在機體免疫功能正常時能被機體殺死;相反，若機體處于免疫抑制狀態，這些腫瘤細胞則能在失去免疫控制的條件下迅速增殖，造成復發［5－7］。另外，手術切除腫瘤的同時，也對機體產生了損傷，不僅導致手術創口的炎癥反應，而且引起機體細胞免疫的抑制，包括淋巴細胞數目減少，細胞毒性減弱，細胞因子分泌減少，但對體液免疫的影響較小［8－9］。本研究中，手術切除腫瘤后，解除了大部分腫瘤對Th1細胞的抑制作用，Th1型細胞因子較術前明顯升高，但Th1細胞因子水平仍低于正常對照組。Th2細胞因子由于手術創傷的影響，雖比術前降低，但仍明顯高于正常對照組。充分說明手術治療可以逆轉Th2型細胞的偏倚。

通過對研究對象的全面分析可知，Th1、Th2細胞因子水平與結直腸癌的發生發展、轉移和復發均密切相關。在結直腸癌的發病過程中，可以用免疫治療方法對Th1/Th2細胞的平衡狀態進行干預，也有可能尋找到一個治療結直腸癌的新靶點。另外，通過對術后細胞因子水平的干預，增強機體抗腫瘤免疫，有可能延緩轉移，阻止復發。

1 Maggi E，Parronchi P，Manetti R，et al.Reciprocal regulatory effects of IFN－gamma and IL－4 on the in vitro development of human Th1 and Th2 clones［J］.J Immunol，1992，148(7):2142 －2147.

2 Heriuchi Y，Hanazawa A，Nakajima Y，et al.T －helper Th1，Th2 imbalance in the peripheral blood of dog with malignant tumor［J］.Microbiol Immunol，2007，51:1135 －1138.

3 Sakaguchi E，Kayano K，Segawa M.Th1/Th2 imbalance in HCV－related liver cirrhosis［J］.Nippon Rinsho，2001，59(7):1259 －1263.

4 葉欣，李毅，劉忠民，等.大腸癌患者血清IL－10水平測定及其意義 ［J］.腫瘤研究與臨床，2002，14:171－173.

5 Morse M，Langer L，Starodub A，et al.Current immunotherapeutic strategies in colon cancer［J］.Surg Oncol Clin N Am，2007，16:873－900.

6 李耀平，喬麗娟，馬克蓉.大腸癌患者細胞因子變化的臨床意義［J］.腫瘤研究與臨床，2008，20:234－236.

7 展曉紅，周蓉蓉，鄭淑芳，等.基質細胞衍生因子1及其受體CXCR4在大腸癌中的表達及臨床意義 ［J］.中國全科醫學，2009，12(6):1066.

8 Ben－Eliyahu S.The promotion of tumormetastasis by surgery and stress immunological basis and implication for psychoneuroimmunology ［J］.Brain Behav Immun，2003，17:27－36.

9 高慶冉，荊濤.P53和PCNA蛋白在大腸癌中的表達及意義研究［J］.實用心腦肺血管病雜志，2011，19(6):915.

A Study on the Change of Serum Cytokine Levels in Colorectal Cancer Patients and Its Significantce

CHEN Yuanchong，CHEN Zhu－yu.The Fifth Hospital of Zhangjiakou，Zhangjiakou 075000，China

ObjectiveTo investigate the influence of pathological staging，tissue－typing and operation on Th1/Th2 imbalance in colorectal cancer patients and its significance through detecting the serum levels of Th1/Th2 type cytokines.Methods

45 colorectal cancer patients and 10 healthy volunteers(control group)were recruited for the study.Peripheral blood samples were collected，and the levels of IFN－γ，IL－2，IL－4，IL－10 levels were detected by ELISA kits.ResultsThe differences of the levels of IFN－γ，IL－2，IL－4 and IL－10 between control group，Dukes'B group，Dukes'C group and Dukes'D group were significant(P＜0.01).Compared with control group，IL－2 and IFN－γ levels of colorectal cancer patients were significantly decreased(P＜0.05)，but IL－4，IL－10 levels were significantly increased(P＜0.05).With pathogenetic condition aggravating，IL－4 and IL－10 levels were increased gradually，while IL－2 and IFN －γ levels were decreased gradually，and the difference was statistically significant(P＜0.05).The cytokine levels were not significantly different between adenocarcinoma patients and mucinous adenocarcinoma patients(P＞0.05).After operation，IL－2 and IFN －γ levels were increased significantly(P＜0.01)，but IL－4 and IL－10 levels were decreased significantly(P＜0.01).After operation，compared with control group，the IFN－γ and IL－2 levels were significantly decreased，while IL－4 and IL－10 levels were significantly increased(P＜0.01).ConclusionThere is response imbalance in Th1 and Th2 in colorectal cancer patients.The imbalanced Th1/Th2 response is correlated with Dukes staging，but uncorrelated with tissue－typing，and can be reversed by operation.

Colorectal neoplasms;T－lymphocytes;Neoplasms staging;Tissue－typing

R 735.3

A

1007－9572(2011)12－4136－03

075000河北省張家口市第五醫院 (陳遠崇);張家口市第一醫院 (陳竹雨)

2011－07－12;

2011－10－13)

(本文編輯:陳素芳)