米非司酮作用下Bcl-2及Fas在子宮腺肌病異位病灶中的表達(dá)

婁 娜,駱永鳳,田雪紅

(1.長春市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科,吉林 長春130051;2.吉林省人口生命科學(xué)技術(shù)研究院;3.吉林大學(xué)第二臨床醫(yī)院婦產(chǎn)科)

子宮腺肌病是指子宮內(nèi)膜向肌層良性浸潤并在其中彌漫性生長。米非司酮是一種抗孕激素,可以誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜異位癥異位內(nèi)膜細(xì)胞凋亡。本實驗通過對米非司酮作用下,子宮腺肌病患者子宮肌層的異位病灶中細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Bcl-2及Fas的表達(dá)變化的研究,從細(xì)胞凋亡的角度為其治療子宮腺肌病提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 對象和分組

研究對象為2003年1月-2009年1月在長春市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科,經(jīng)臨床確診為子宮肌腺病,要求手術(shù)治療的180例患者。隨機分成兩組,實驗組102例,對照組78例。實驗組中54例于月經(jīng)周期第8天給予米非司酮25 mg口服,每日兩次,連服2周,停藥后行刮宮術(shù),病理證實為分泌期者52例,增生期者2例,隨后行手術(shù)治療。另48例于月經(jīng)前1周給予米非司酮口服,用法同上,停藥后即手術(shù)治療。故實驗組中相當(dāng)于增生期者50例,分泌期者52例。對照組不予服藥,其中有40例于月經(jīng)后2-3天行手術(shù)治療,相當(dāng)于增生期,38例于月經(jīng)前3-7天行手術(shù)治療,相當(dāng)于分泌期。上述患者,均行子宮切除術(shù)。實驗組患者年齡為38-52歲,平均年齡為45.76±2.88歲,對照組年齡為40-52歲,平均年齡為46.35±3.14歲,兩組差異無顯著性(P＞0.05)。上述患者均已婚,有生育史,無婦科內(nèi)分泌疾病史,卵巢功能及肝腎功能正常,術(shù)前3個月未服用激素類藥物及中藥類藥物,合并子宮肌瘤及卵巢內(nèi)膜異位囊腫者排除。術(shù)后病理回報均證實為子宮腺肌病。

1.2 方法

1.2.1應(yīng)用免疫組化法檢測肌層異位病灶中Bcl-2及Fas基因的表達(dá)變化。Bcl-2及Fas陽性反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色顆粒,多分布于細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞漿中。綜合細(xì)胞著色及陽性細(xì)胞百分率數(shù)判定,參照文獻(xiàn)[1],按如下通用標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評分和積分:①按顯色程度積分:細(xì)胞無著色,記為0分;細(xì)胞輕度著色染為淡黃色,記為1分;細(xì)胞著色為黃色,記為2分;細(xì)胞明顯著色為棕黃色,為3分;②按陽性細(xì)胞百分率積分:無細(xì)胞顯色或陽性細(xì)胞數(shù)小于5%積0分;5%-35%細(xì)胞顯色者積1分;36%-65%細(xì)胞顯色者積2分;65%以上細(xì)胞顯色者積3分。兩種評分相加除以2,按積分高低分為:0分為陰性(-);0.5-1分為弱陽性(+);1.5-2為陽性(++);2.5-3為強陽性(+++)。

1.2.2統(tǒng)計學(xué)分析 各組數(shù)據(jù)采用百分率表示,計量資料采用t檢驗,計數(shù)資料采用卡方檢驗。以P＜0.05為顯著差異,P＜0.01為極顯著差異,P＞0.05為無顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 Bcl-2基因的表達(dá)

Bcl-2基因陽性反應(yīng)產(chǎn)物主要分布在細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞漿中,陽性細(xì)胞呈彌漫性分布。實驗組增生期與分泌期,Bcl-2的陽性表達(dá)率分別為26%、23.08%;對照組增生期與分泌期Bcl-2的陽性表達(dá)率分別為77.5%、71.05%。見表1。

表1 子宮腺肌病異位病灶中Bcl-2的表達(dá)

實驗組中,增生期與分泌期相比較,Bcl-2的表達(dá)無顯著性差異(P＞0.05)。對照組中,增生期與分泌期相比較,Bcl-2的表達(dá)亦無顯著性差異(P＞0.05)。而兩組的增生期與分泌期分別比較,以及兩組綜合比較,Bcl-2的表達(dá)有極顯著性差異(P＜0.01)。提示實驗組較對照組Bcl-2的陽性表達(dá)率明顯下降。見表3。

2.2 Fas基因的表達(dá)

Fas陽性反應(yīng)產(chǎn)物的分布,與Bcl-2相似,主要表達(dá)在細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞漿中,陽性細(xì)胞呈彌漫性分布。實驗組的增生期與分泌期,Fas的陽性表達(dá)率分別為80%、84.62%;對照組增生期與分泌期Fas的陽性表達(dá)率分別為45%、52.63%。見表2。

實驗組中,增生期與分泌期相比較,Fas的表達(dá)無顯著性差異(P＞0.05)。對照組中,增生期與分泌期相比較,Fas的表達(dá)亦無顯著性差異(P＞0.05)。而兩組的增生期與分泌期分別比較,以及兩組綜合比較,Fas的表達(dá)有極顯著性差異(P＜0.01)。提示實驗組較對照組Fas的陽性表達(dá)率明顯升高。見表3。

表2 子宮腺肌病異位病灶中Fas的表達(dá)

表3 Bcl-2及 Fas在各組中表達(dá)差異比較

3 討論

3.1 細(xì)胞凋亡與子宮腺肌病

近年來,子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡成為婦科領(lǐng)域的一個研究熱點。有研究表明,Bcl-2基因表達(dá)可抑制細(xì)胞凋亡,促使細(xì)胞存活,對異位內(nèi)膜的種植、生長有重要意義[2,3]。Matsumoto等[2]發(fā)現(xiàn)Bcl-2基因表達(dá)在子宮腺肌病病灶無周期性變化,分泌期及月經(jīng)期高于在位內(nèi)膜,增生期低于在位內(nèi)膜,因此認(rèn)為子宮腺肌病的發(fā)生與Bcl-2的表達(dá)顯著增高,細(xì)胞凋亡率明顯下降有關(guān)。在本研究中發(fā)現(xiàn),實驗組和對照組中,增生期與分泌期手術(shù)患者相比較,其子宮肌層異位病灶中Bcl-2表達(dá)無周期性變化,與Matsumoto等的結(jié)果相類似。由此推論,由于子宮腺肌病異位病灶中Bcl-2的表達(dá)無周期性變化且維持一定的陽性率,導(dǎo)致其中的部分內(nèi)膜細(xì)胞免于凋亡,進(jìn)而細(xì)胞凋亡率明顯下降,這也許是子宮腺肌病的發(fā)病機制之一。

目前關(guān)于Fas基因與子宮腺肌病的報道較少。有研究表明:在正常子宮內(nèi)膜中,Fas基因表達(dá)于整個子宮內(nèi)膜周期[4],從增生期、分泌期到月經(jīng)期呈上升趨勢,與子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的發(fā)生一致,并受雌孕激素的周期性調(diào)控,子宮腺肌病在位及異位內(nèi)膜中Fas基因的表達(dá)強度均較正常子宮內(nèi)膜降低[5]。提示Fas基因在促子宮內(nèi)膜凋亡中可能是一種直接作用因子。在本研究中發(fā)現(xiàn),各組增生期與分泌期相比較,與Bcl-2的表達(dá)相類似,病灶中Fas基因的表達(dá)亦無明顯周期性變化且維持一定的陽性率,由此推論,做為促進(jìn)細(xì)胞凋亡的因子,Fas的持續(xù)陽性表達(dá)以及無周期性變化,可能導(dǎo)致部分內(nèi)膜細(xì)胞不凋亡,得以繼續(xù)生存,且異位內(nèi)膜細(xì)胞對凋亡因子的敏感性下降,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡率下降甚至停滯,異位病灶形成并發(fā)展。

3.2 米非司酮作用下子宮腺肌病異位病灶中Bcl-2及Fas基因的表達(dá)變化

米非司酮作為一種抗孕激素,已廣泛地應(yīng)用于婦產(chǎn)科領(lǐng)域。近年來,亦可見米非司酮治療子宮腺肌病的報道。如于月經(jīng)第1-3天口服米非司酮10 mg/d,3個月為一個療程,可使患者停經(jīng),痛經(jīng)癥狀消失,子宮體積明顯縮小,副反應(yīng)少見[6]。但其治療機理尚未完全清楚,而目前從細(xì)胞凋亡的角度來研究米非司酮對子宮腺肌病的治療作用的相關(guān)報道較少。本研究中采用免疫組化法檢測服用米非司酮后的實驗組以及未服藥的對照組,子宮腺肌病異位病灶中Bcl-2及Fas基因的表達(dá),結(jié)果顯示Bcl-2基因的表達(dá),實驗組明顯低于對照組,而Fas基因的表達(dá)實驗組明顯高于對照組,且均有極顯著性差異(P＜0.01)。由此可以證實,米非司酮可促使子宮腺肌病異位病灶中Bcl-2表達(dá)降低,Fas表達(dá)增強,而作為細(xì)胞凋亡抑制因子Bcl-2及細(xì)胞凋亡促進(jìn)因子Fas,它們的這一變化,必將誘發(fā)細(xì)胞凋亡的增強,進(jìn)而達(dá)到治療效果。

3.3 研究米非司酮對子宮腺肌病細(xì)胞凋亡影響的意義

本實驗結(jié)果從細(xì)胞凋亡的角度為米非司酮臨床治療子宮腺肌病的良好療效提供了理論依據(jù)。在今后的研究中可進(jìn)一步考慮最佳藥物劑量以及服用時間,使異位病灶中細(xì)胞凋亡的水平更接近正常子宮內(nèi)膜的凋亡水平?？紤]米非司酮副作用較少,使用方便,價格低廉,應(yīng)有較好的應(yīng)用前景。

[1]李 剛,陳必良,辛?xí)匝?等.米非司酮對早孕絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞Bcl-2和Caspase-3表達(dá)的影響[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2003,19(2):136.

[2]Matsumoto Y,Iwasaka T,Yamasaki F,et al.Apoptosis and Ki-67 expression in adenomyotic lesions and in the corresponding eutopic endometrium[J].Obstet-Gynecol,1999,94:71.

[3]Jones RK,Searle RF,Bulmer JN.Apoptosis and bcl-2 expression in normal human endometrium,endometriosis and adenomyosis[J].Human Reprod,1998,13:3496.

[4]Song J,Rutherford T,Naftolin F,et al.Hor monal regulation of apoptosis and the Fas and Fas ligand system in human endometrial cells[J].Mol Hum Reprod,2002,8(5):447.

[5]Selam B,Kayisly UA,MulayimN,et al.Regulation of ligand expressionby estradiol and progesterone in human endometrium[J].Biol Reprod,2001,65:979.

[6]魏福敏,李 燕,池紅云.米非司酮治療圍絕經(jīng)期子宮腺肌病58例分析[J].中華實用中西醫(yī)雜志,2003,16:701.