環氧啉含量的HPLC法測定方法

戴麗雯，陳文利，巨修練*

(1.武漢工程大學化工與制藥學院，湖北省新型反應器與綠色化學工藝重點實驗室,湖北 武漢 430074；2.武漢工程大學分析測試中心，湖北 武漢 430074)

0 引 言

環氧啉(Cycloxylidin)其化學名稱為1-(2，3-環氧丙基)-N-硝基亞咪唑烷-2-亞胺，它是基于計算機輔助藥物分子設計(CADD)方法，利用CoMFA模擬結果，以4個含不同藥效團的活性中間體為原料合成的一系列新煙堿類化合物中殺蟲活性突出的創新的化合物，環氧啉殺蟲譜廣，防治效果與吡蟲啉相近[1]，是第四代新煙堿類殺蟲劑.

作為第一代的新煙堿類殺蟲劑的吡蟲啉，其是目前全球市場上銷量最大殺蟲劑品種.但是長期使用單一化合物，會使害蟲產生抗性，吡蟲啉也不例外.文獻報道，吡蟲啉的抗性的形成可能與害蟲解毒能力提高和靶標部位對毒素敏感性降低有關[3].另外，吡蟲啉由于含有吡啶環，生產過程中會產生大量的污染物，難以治理.環氧啉可以有效的克服以上缺點，生產成本僅為吡蟲啉的1/3，且與吡蟲啉具有相似的殺蟲譜及殺蟲效果，且持效性高于吡蟲啉，毒性比吡蟲啉更低，結構新穎，作為第四代煙堿殺蟲劑，具有較大的開發前景.

根據環氧啉的結構，雖有一些方法可檢測，但鑒于環氧啉為新開發的化合物，本文參考并查閱了相關的煙堿類殺蟲劑吡蟲啉的高效液相色譜法[4]，經過實驗采用了合適的色譜條件，直接測定環氧啉的含量.本方法不需要繁雜的化學操作，簡便快速，重復性極令人滿意.經驗證該方法對實際復雜樣品的分離效果好，可靠性高,抗干擾性強.

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

甲醇為色譜純；水為二次蒸餾水；環氧啉標樣[5](自制，含量為98.15％)；樣品為環氧啉原藥及10％可濕性粉劑.

Waters2695液相色譜儀；二極管陣列檢測器.

1.2 色譜條件

流動相為甲醇-水(25∶75，V/V)溶液，流速為1.0 mL/min，C18色譜柱(C18250 mm×4.6 mm,5 μg/mL)，檢測波長為220 nm，柱溫為室溫，進樣量10 uL.

1.3 對照品溶液

精密稱取干燥至恒重的環氧啉標樣0.108 0 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解，用流動相定容至刻度，搖勻，得貯備液.

1.4 樣品溶液

精密稱取環氧啉原藥0.105 2 g，置于50 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并用流動相定容至刻度，搖勻.準確移取該溶液10.0 mL置于50 mL的容量瓶中,并用流動相定容至刻度，即為1#樣品溶液.

精密稱取質量分數10％可濕性粉劑0.757 0 g，置于50 mL的容量瓶中，用甲醇溶解，在恒定的溫度下超聲5 min，用流動相定容至刻度，搖勻.然后準確移取該溶液10.0 mL置于50 mL的容量瓶中,并用流動相定容至刻度(注：移取時用孔徑0.45 μm的過濾膜進行過濾)，作為2#樣品溶液.

2 結果與討論

2.1 方法耐用性的考察

在上述色譜條件下，改變流動相的配比，采用相同的色譜柱，考察條件的耐用性，將流動相甲醇-水分別設定為35∶65，30∶70，25∶75，20∶80，15∶85，10∶90時，結果顯示甲醇-水之比為25∶75時，環氧啉與其雜質的分離度高，選擇性也較好，并符合溶劑選擇性分類三角形圖.

2.2 線性關系研究

準確移取對照品貯備液1，2，3，4，5，6，7，8 mL分別置于25 mL的容量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，每次進樣10 μL，以峰面積為縱坐標，相應的濃度為橫坐標進行線性回歸，結果見表1.

表1 環氧啉標準工作曲線測定結果

由表1數據可知，以環氧啉濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，線性回歸方程為：Y=1.603 593+0.169 560 5X，相關系數為0.999 92.結果表明，環氧啉檢測限為43.2～345.6 μg/mL時，峰面積與濃度成良好的線性關系.對照品溶液色譜圖見圖1.

圖1 標準溶液的色譜圖

2.3 精密度及重現性

取環氧啉對照品稀溶液，連續進樣8次，每次進樣10 μL，環氧啉的峰面積積分值的RSD為0.908％.

分別取1#樣品稀溶液,2#樣品稀溶液，每次進樣10 μL，重復進樣8次，環氧啉的峰面積積分值的RSD分別為0.912％，0.895％.

2.4 回收率實驗

準確稱取環氧啉原藥0.108 0 g，置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并用流動相定容至刻度，分別取10 mL，置于3個100 mL的容量瓶中，再分別取20 mL加入另外3個100 mL的容量瓶中，然后按順序精密加入0.5，1，2，4，6，8 mL的對照品貯備液，用水稀釋至刻度，搖勻，進樣，讀取峰面積，從標準曲線上求得含量并計算回收率.其結果見表2.

表2 環氧啉回收率實驗(n=6)

2.5 樣品穩定性實驗

將環氧啉原藥和質量分數10％可濕性粉劑分別儲存在冰箱內7，14，21，28 d，按上述方法測定，分析結果顯示環氧啉原藥和質量分數10％可濕性粉劑的含量無明顯變化.

2.6 樣品的含量測定

分別取1#樣品，2#樣品，分別在實驗的色譜條件下(C18色譜柱，25％甲醇-75％水的流動相，檢測波長220 nm，流速1.0 mL/min，室溫)測定環氧啉含量，進樣10 μL，讀取峰面積，按外標法計算含量，結果見表3.

表3 樣品分析

圖2，3分別為1#樣品溶液的色譜圖，2#樣品溶液的色譜圖.

圖2 1#樣品溶液色譜圖

圖3 2#樣品溶液色譜圖

3 結 語

本研究通過實驗建立的環氧啉含量的HPLC的測定方法，得到了理想的峰形及高的分離度.該分析法準確，方便.本研究最佳色譜條件為：C18色譜柱(C18250 mm×4.6 mm,5 μg/mL)，流動相為甲醇—水(25∶75,V/V)，流速為1.0 mL/min，室溫，220 nm檢測波長.樣品中環氧啉原藥的平均回收率是99.65％，其RSD為0.878％.

參考文獻：

[1]李黎,巨修練.綠色農藥環氧啉的開發及應用[J].湖北植保,2009,115(5)：5-56.

[2]楊吉春,李淼,柴寶山,等.新煙堿類殺蟲劑最新研究進展[J].農藥,2007,46(7)：433-438.

[3]史曉斌,王鵬.吡蟲啉的抗性現狀及其機理研究進展[J].農藥研究與應用,2010,14(2):1-3.

[4]周琴,吳永鳳.吡蟲啉的高效液相色譜法分析[J].廣東化工,2004,31(1):28-29.

[5]巨修練,盧倫,李黎.1-(1,2-環氧丙基)-N-硝基亞咪唑烷-2-基胺的制備及用途：中國，200810236885.X[P].2009-08-12.