膽總管結(jié)扎誘發(fā)大鼠肝外膽汁瘀積的肝腎功能動(dòng)態(tài)變化研究

朱平生，王 兵，龍愛華

(1.河南中醫(yī)學(xué)院肝病研究所，河南 鄭州 450008;2.上海中醫(yī)藥大學(xué)肝病研究所，上海 201203)

膽總管結(jié)扎(BDL)模型是成熟的肝外膽汁瘀積模型[1]。本文參考國(guó)外文獻(xiàn)[2]，建立大鼠肝外膽汁瘀積模型，對(duì)該模型形成過程中的肝、腎功能進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，分析探討其特點(diǎn)，為進(jìn)一步應(yīng)用此模型開展藥理學(xué)研究提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

Wistar雄性大鼠50只，清潔級(jí)，體重200 g±20g，中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，SCXK(滬)2006-0012，上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)、造模和觀察。

1.2 試劑

肝、腎功能試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3 模型復(fù)制及動(dòng)態(tài)觀測(cè)

按數(shù)字表隨機(jī)法將大鼠分為2組，模型組38只，假手術(shù)組12只，大鼠禁食不禁水12h后，腹部皮膚常規(guī)消毒，用2%戊巴比妥鈉以2ml/kg體重劑量大鼠腹腔注射麻醉，沿腹正中線切開，暴露并游離膽總管，將膽總管遠(yuǎn)近端三段結(jié)扎，于遠(yuǎn)心端第2、3結(jié)扎線之間剪斷膽總管并關(guān)腹。假手術(shù)組僅開腹并游離膽總管后關(guān)腹[2]。于大鼠膽總管結(jié)扎第3天及1周、2周分別隨機(jī)取模型組5只、假手術(shù)組3只大鼠處死取材，于3周處死剩余大鼠取材，觀測(cè)肝重、脾重、體重。

1.4 樣品采集及處理

經(jīng)2%戊巴比妥鈉以2ml/kg體重劑量腹腔麻醉后，大鼠仰臥位固定，打開腹腔觀察大體情況和肝、脾的色、質(zhì)、形態(tài)、體積及腹水情況。經(jīng)下腔靜脈采血并分離血清備用，摘取肝、脾稱重。

1.5 觀察指標(biāo)與方法

1.5.1 一般情況 體重、肝重、脾重等。

1.5.2 肝、腎功能 檢測(cè)血清 AlB、GLO、TP、TBil、TBA、CHO、BUN、CRE 含量，ALT、AST、LDH、ALP、GGT活性，按試劑盒說明方法測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS13.0中ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況

自造模開始觀察至3周末，模型組死亡12只，死亡率為24%，動(dòng)物在第1周內(nèi)死亡較多，2～3周死亡減少。

表1顯示，與假手術(shù)組比較模型組大鼠的體重都有不同程度的降低，肝重、脾重、肝指數(shù)、脾指數(shù)呈增高的動(dòng)態(tài)變化。

2.2 肝腎功能的動(dòng)態(tài)變化

表2～4顯示，AlB含量在造模3d后即顯著下降，隨著造模時(shí)間的推移呈梯級(jí)進(jìn)行性降低;GLO、TP含量造模3d后先增高并持續(xù)在一個(gè)水平，于第3周開始下降;TBil含量和 GGT、ALP活性呈持續(xù)增高的動(dòng)態(tài)變化，ALT活性和 TBA、CHO含量在造模3d后即顯著增高，此后有所下降，至3周末仍高于假手術(shù)組(P<0.01，P<0.05)，AST在 3d后即顯著增高并維持至3周末。LDH活性在造模1周時(shí)顯著增高，其后有所下降;BUN含量在造模后前2周無明顯改變，至第3周有所增高，CRE含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 大鼠一般情況各指標(biāo)變化情況(s)

表1 大鼠一般情況各指標(biāo)變化情況(s)

注:與各相同時(shí)相的假手術(shù)組比較:#P<0.05

組別 n 體重(g)肝重(g)脾重(g)肝指數(shù)(%)脾指數(shù)(‰)假手術(shù)組3天 3 247.33± 2.52 9.77±0.38 0.63±0.06 3.95±0.192.6±0.2假手術(shù)組1周 3 255.67± 4.04 10.40±1.22 0.67±0.06 4.07±0.48 2.6±0.2假手術(shù)組2周 3 295.67± 9.71 9.60±1.25 0.70±0.10 3.24±0.33 2.4±0.2假手術(shù)組3周 3 306.40±13.43 10.49±0.63 0.68±0.09 3.42±0.08 2.2±0.2模型組3天 5 203.60±29.69# 12.00±1.00# 1.16±0.13# 5.95±0.51# 5.8±0.9#模型組1周 5 190.00±34.00# 12.12±1.54# 1.28±0.64# 6.43±0.41# 6.6±2.4#模型組2周 5 218.40±10.43# 13.20±1.30# 1.34±0.13# 6.05±0.63# 6.1±0.6#模型組3周 11 210.17±23.60# 13.78±2.39# 1.55±0.41# 6.55±0.80# 7.4±1.9#

表2 大鼠血清AlB、GLO、TP、TBil含量變化表(s)

表2 大鼠血清AlB、GLO、TP、TBil含量變化表(s)

注:與假手術(shù)組比較:#P<0.05，*P<0.01;與模型其他時(shí)間點(diǎn)比較:△P<0.05

組 別 n ALB(g/L)GLO(g/L)TP(g/L)TBil(μmol/L)假手術(shù)組 12 32.72±1.29 24.29±3.24 57.01± 4.23 8.44±7.39 3天模型組1周2周3周29.02±4.36*29.70±0.60*27.92±3.57*22.93±1.62*△33.68±3.89#30.53±0.84#36.24±7.69#26.6±3.75#△62.70±7.62#60.23±0.40#64.16±11.13#49.53± 4.96#△81.32±8.47*83.00±10.43*92.36±15.00*141.87±53.20*△

3 討論

膽管結(jié)扎形成的膽汁瘀積，在3周內(nèi)模型大鼠肝臟重量逐漸增加，可能與造模后肝臟膽管上皮細(xì)胞增生有關(guān)。膽管結(jié)扎后大鼠血清白蛋白含量隨著時(shí)間的推移呈進(jìn)行性降低;球蛋白含量在造模后3d即有增高，是膽管結(jié)扎膽汁瘀積球蛋白反應(yīng)性的增高，在第3周有所下降，與肝細(xì)胞的適應(yīng)性有關(guān);總蛋白先增高后降低的變化是由于造模后3d球蛋白的增高而增高，到第3周時(shí)隨著球蛋白和白蛋白的下降而下降。血清膽紅素在結(jié)扎后3d驟然增高，后持續(xù)緩慢增高，表明在肝細(xì)胞發(fā)生腫脹、變性、壞死到一定程度后，代償失衡肝內(nèi)的膽汁瘀積通過膽紅素表現(xiàn)出來，并明顯增高，隨后在肝臟強(qiáng)大的代償功能轉(zhuǎn)化下，膽紅素量反應(yīng)鈍化，與膽汁瘀積加重相關(guān)性不明顯[3]。ALT及AST活性是監(jiān)測(cè)肝炎的敏感指標(biāo)，當(dāng)肝臟發(fā)生炎癥、壞死時(shí)，ALT、AST就會(huì)從肝細(xì)胞內(nèi)大量釋放入血，導(dǎo)致血清中ALT、AST升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果是ALT活性3d時(shí)最高，其后下降，可能與肝細(xì)胞通透性瞬間的增加相關(guān);AST-直維持在較高水準(zhǔn)上與肝細(xì)胞的細(xì)胞器損傷相關(guān)。血清ALP的增高程度與膽管阻塞的程度有關(guān);GGT進(jìn)行性增高主要表明膽管細(xì)胞的病變，亦有認(rèn)為與肝纖維化的程度有關(guān)。在肝外膽汁瘀積時(shí)，肝臟產(chǎn)生的膽固醇過多，由于排泄障礙而反流入血液[4]，因此在膽管結(jié)扎3d時(shí)膽固醇增高，隨著膽汁瘀積加重，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的減少，膽固醇酯化減少，血清內(nèi)膽固醇比例可有所下降;而膽汁酸是在肝細(xì)胞微粒體內(nèi)由膽固醇轉(zhuǎn)變而來，與膽汁一起排泄入腸道，是肝臟清除體內(nèi)膽固醇的主要方式，膽汁酸在造模3d的顯著增高與膽固醇含量的增高有關(guān)，后由于膽固醇含量的降低，膽汁酸的量有所下降。

表3 大鼠血清酶ALT、AST、LDH、ALP、GGT活性變化表(s)

表3 大鼠血清酶ALT、AST、LDH、ALP、GGT活性變化表(s)

注:與假手術(shù)組比較:*P<0.01;與模型上一時(shí)間點(diǎn)比較:△P<0.05，▲P<0.01

組 別 n ALT(U/L)AST(U/L)LDH(U/L)ALP(U/L)GGT(U/L)假手術(shù)組 12 39.09± 5.49 218.49± 55.86 1134.57±301.05 109.56± 28.49 4.69± 0.51模型組3天 5 406.80±168.60*△ 777.74±271.95* 2204.18±456.72* 399.68±113.74* 19.44± 4.74*△1周 5 157.47± 81.83* 801.07±590.45*△ 2916.67±697.98*△ 325.47± 53.87*△ 40.53±24.57*2周 5 114.48± 48.16* 507.58±170.11* 1503.84±487.82▲ 287.34±108.66*△ 58.44±25.97*3周 11 172.40± 37.29* 709.90±226.90* 2169.96±434.10*△ 449.13±109.17*△ 144.67±32.19*△

表4 大鼠TBA、CHO、BUN、CRE含量變化表(s)

表4 大鼠TBA、CHO、BUN、CRE含量變化表(s)

注:與模型組比較:#P<0.05，*P<0.01;與模型上一時(shí)間點(diǎn)比較:△P<0.05，▲P<0.01

組 別 n TBA(μmol/L)CHO(mmol/L)BUN(mmol/L)CRE(μmol/L)假手術(shù)組 12 22.46±11.71* 1.37±0.15* 7.29±1.61#22.73±13.64 23.5±2.19模型組3d 5 362.74±150.89▲ 5.29±1.15△ 7.09±1.84 12.26± 5.06 1w 5 156.37± 29.92 2.86±0.49 6.35±2.85 20.07± 8.29 2w 5 155.66± 53.64 2.03±0.33 6.04±1.02 19.76±12.06 3w 11 255.77±112.79 3.18±2.02 10.98±3.59△

從以上研究可以看出，BDL模型組大鼠的肝腎功能顯著異常，與假手術(shù)組比較，模型組TP、ALB含量顯著降低(P<0.05)，TBil、TBA、CHO、BUN 含量，ALT、AST、LDH、ALP、GGT 活性顯著增高(P<0.05，P<0.01)，說明肝外膽汁瘀積可明顯損害肝腎功能。

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[3]劉鉞，張朝明，郝玲，等.血清總膽紅素、甘氨膽酸、甲胎蛋白、糖類抗原19-9與膽汁瘀滯相關(guān)性評(píng)價(jià)[J].國(guó)際放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)雜志，2006，30(2):107-109.

[4]姚光弼，范上達(dá)，廖家杰.臨床肝臟病學(xué)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2004.144.