丹紅注射液改善VD模型大鼠學習記憶能力作用機制研究

金 杰，任素華，苗彥永

(1.河南中醫學院第一附屬醫院，河南 鄭州 450008;2.新鄉市中心醫院，河南 新鄉 453000)

血管性癡呆(Vascular Dementia，VD)是由各種腦血管因素導致腦組織損害而引起的獲得性智能損害綜合征，是常見的老年期癡呆之一。目前，血管性癡呆的治療尚無突破，中醫藥對本病的治療具有一定優勢。

1 材料與方法

1.1 動物及分組

健康清潔SD大鼠48只，雌雄各半，體重200 g±20 g，由河南省動物研究中心提供，編號 SCXK(豫)2005-0001。按照隨機數字表法隨機分為4組:假手術組、模型組、杏丁組、丹紅組+模型組+杏丁組組合稱為手術組，每組12只，以3%苦味酸分別做體表標記。

1.2 造模及行為學觀察

采用王蕊[1]改進的兩血管阻斷 +硝普鈉降壓法制作VD大鼠模型，應用避暗實驗法[2]判定造模成功與否及大鼠用藥后的學習記憶改善情況。避暗實驗方法為:根據大鼠的嗜暗習性分設明暗兩室，明室上方20cm處懸掛60W日光燈，在暗室的中后部分底部銅柵加40V的電壓，兩室之間設有直徑為3cm的圓洞。實驗時將大鼠背對洞口放入明室，同時啟動計時器，動物放入明室至第1次進入暗室遭電擊所需的時間為潛伏期，記錄大鼠第1次進入暗室的時間(潛伏期)及5min內動物遭電擊次數(錯誤次數)。于造模后和連續給藥14d后分別進行行為學測試，記錄大鼠第1次進入暗室的時間和5min內進入暗室的次數作為學習成績，24h后再次進行測試作為記憶成績，并對其進行智障評分(不進入者評為0分，兩耳通過圓孔評為1分，前肢越過圓孔評為2分，全身進入者評為3分)。

1.3 給藥方法及療程

按成人臨床等效量進行換算，丹紅組采用腹腔注射丹紅注射液(由菏澤步長藥業有限公司提供，批號070965)，杏丁組注射杏丁注射液(由貴州益佰制藥業有限公司提供，批號070811)，每天1次，1周稱鼠重1次，并調整藥物劑量，連續腹腔注射14d。

1.4 標本制備方法

1.4.1 NO測定 采用比色法，取血后注入試管中待凝固后用血清4℃3000r離心，取上清測定。所用測試盒由南京建成生物工程研究所提供，批號20080617。

1.4.2 ET-1測定 采用放射免疫法，取血后注入含7.5%EDTA二鈉30ul和抑肽酶40 ul的試管中混勻，4℃3000r離心10min取上清測定。所用測試盒由北京普洱偉業生物科技有限公司提供，批號20080625。

1.4.3 AChE測定 采用比色法，稱取左側大腦腦組織重量加9倍生理鹽水制成10%勻漿，3500r離心10min，取上清待測。所用測試盒由南京建成生物工程研究所提供，批號20080617。

1.5 統計學方法

采用SPSS13.0統計分析軟件在Winxp系統下操作，對于該計量資料用(s)表示，2組間比較用t檢驗。

2 結果

2.1 VD模型大鼠行為學變化及丹紅注射液對其學習記憶能力的影響

表1、2顯示，造模前各組動物毛發光滑，反應良好，行動敏捷，造模后開始出現興奮不安、短暫驚厥、呼吸減慢;術后早期出現毛發稀疏且無光澤，反應遲鈍，運動減少，后肢呈“八字”，共濟失調，爬行不穩，眼瞼明顯下垂，術后3d各組大鼠大部分活動增加(造模中動物死亡2只);給藥后，異常的行為均有不同程度的緩解，如毛發、行動、較前均有改善，而模型組大鼠毛發干枯、呆滯及行為遲緩。

表1 各組大鼠造模后避暗試驗學習記憶功能結果(s)

表1 各組大鼠造模后避暗試驗學習記憶功能結果(s)

注:*與假手術組比較:P<0.05，**P<0.01

組 別n 學習功能 記憶功能潛伏期(s)錯誤次數(次)潛伏期(s)錯誤次數(次)智障評分假手術組 12 104.67±9.88 2.17±1.34 122.58±9.79 1.75±0.75 1.42±0.78手 術 組 34 43.44±12.62** 3.09±1.29* 42.22±12.11** 2.75±1.43* 1.97±0.80*

表2 各組大鼠給藥后避暗試驗學習記憶功能結果(s)

表2 各組大鼠給藥后避暗試驗學習記憶功能結果(s)

注:*與假手術組比較:P<0.05，**P<0.01;△與模型組比較:P<0.05，△△P<0.01;▲▲與杏丁組相比P<0.01

組 別 n 學習功能 記憶功能潛伏期(s)錯誤次數(次)潛伏期(s)錯誤次數(次)智障評分假手術組 12 106.83±11.39 2.08±0.79 115.00±13.82 1.58±0.67 0.50±0.67模 型 組 12 49.58±11.21** 3.17±1.40* 52.50± 9.60** 4.0 ±1.21** 1.75±0.75**杏 丁 組 11 60.09±11.61△ 2.00±0.89△ 69.27±15.50△△ 1.91±0.83△△ 0.64±0.81△△丹 紅 組 11 74.45±10.88△△▲▲ 1.91±0.83△ 75.73± 7.76△△ 1.64±0.81△△ 0.82±0.75△△

2.2 丹紅注射液對VD模型大鼠血清NO、ET-1及腦組織AChE含量的影響

表3 各組大鼠血清NO、ET-1及腦組織AChE含量的比較(s)

表3 各組大鼠血清NO、ET-1及腦組織AChE含量的比較(s)

注:*與假手術組比較:P<0.05，**P<0.01;△與模型組比較:P<0.05，△△P<0.01

組 別 n NO(μmol/l)ET-1(pg/ml)AChE(U/mgprot)12 13.517±1.78 94.493± 8.23 0.969±0.40模 型 組12 11.900±1.19* 152.282±14.47** 2.930±0.71**杏 丁 組11 13.936±1.62△△ 128.121±13.21△△ 1.427±0.36△△丹 紅 組11 13.636±2.30△ 132.288±18.63△△ 1.841±0.82假手術組△△

3 討論

NO和ET主要是由內皮細胞合成釋放的具有代表性的舒張血管因子和收縮血管因子組成，廣泛參與心腦血管的病理生理過程，二者的動態平衡對維持血管舒縮功能和血液流動性等具有重要意義[3～5]。

本實驗結果表明，模型組較假手術組血中 NO含量明顯降低，內皮素水平明顯升高，提示腦缺血再灌注損傷誘發血管內皮功能紊亂，導致血管內皮細胞合成與分泌功能障礙，此時NO的合成、釋放減少，其內皮保護作用和拮抗作用削弱，內皮素含量增加，使血管強烈收縮，腦組織血供減少，加速腦組織損傷過程。經過藥物治療后血清NO濃度增加，ET水平降低可能與丹紅注射液使NO的合成、釋放增加，內皮合成、釋放內皮素減少從而改善內皮功能有關。

腦組織海馬區乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)含量的持續降低，可能是VD發生、發展的重要原因之一。實驗及臨床研究表明，抗膽堿治療方法對 VD有效，患者腦脊液中Ach水平顯著下降，下降幅度與癡呆程度成正相關。

本實驗結果表明，反復腦缺血再灌注所致血管性癡呆大鼠的學習記憶功能明顯障礙，腦組織中乙酰膽堿含量升高。根據乙酰膽堿合成反應的質量作用規律，缺血缺氧時能夠誘發膽堿能神經元變性壞死，導致神經元內 AChE釋放，使組織中的可溶性AChE含量及活性升高，最終分解突觸內的Ach，導致Ach水平進一步降低，加重學習記憶功能的損傷。從本研究結果看，在降低AchE方面，杏丁稍優于丹紅，二者之間比較差異無顯著性。但從總體改善記憶作用方面看，丹紅組優于杏丁組，表明丹紅改善記憶的機制可能不只降低AchE 1個環節，而是通過多重機理發揮作用。杏丁注射液主要成分為銀杏總黃酮和雙嘧達莫，具有擴張血管、改善腦缺血產生的癥狀和記憶功能障礙的作用。銀杏葉制劑是目前國內外公認的治療VD有效藥物，故選為對照藥物。丹紅注射液主要成分為丹參和紅花，功能活血化瘀、通脈舒絡，主要用于瘀血閉阻所致的胸痹心痛、中風。現代藥理研究表明，丹參水溶性成分為多酚羥基類化合物，具有抗血小板聚集、抗血栓形成、改變血液黏滯性、改善微循環、抗氧化損傷、擴張血管等作用[7]。紅花主要成分為黃酮類化合物，可明顯改善腦缺血大鼠的行為障礙，縮小缺血區范圍，對缺血性腦損傷有明顯的保護作用[8]。兩藥合用可明顯改善腦的有氧代謝，擴張血管，加速血流，使血流量增加而改善微循環，降低血液的黏滯性，增加氧運，減輕缺血再灌注損傷[9]。

[1]王蕊，楊秦飛，唐一鵬，等.大鼠擬“血管性癡呆”模型的改進[J].中國病理生理雜志，2000，16(10):914.

[2]徐叔云主編.藥理實驗方法學[M].2版.北京:人民衛生出版社，1991.660.

[3]金惠銘，盧建，殷蓮華.細胞分子病理生理學[M].鄭州:鄭州大學出版社，2002.225-230.

[4]陳修，陳維洲，曾貴云.心血管藥理學[M].3版，北京:人民衛生出版社，2002.192-235.

[5]邵福愿，王宇卉.分子神經藥理學[M].上海:上海科學技術出版社，2005.337-347.

[6]Tanaka K，Ogawa N，Asanuma M，Kondo Y，Nomura M.Relationship ween cholinergic dysfunction and discrimination learning disabilities in Wistar rats following chronic cerebral hypoperfusion[J].Brain Res，1996，729:55-65.

[7]中國醫學科學院藥物研究所中草藥現代研究(第2卷)[J].北京:北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1996.472.

[8]戎惠珍.紅花的化學成分及藥理研究概況[J].江西中醫學院學報，1997，9(4):45.

[9]肖志輝.速避凝聯合丹參治療頑固性不穩定型心絞痛療效觀察[J].中國醫藥導報，2007，4(3):69.