食管鱗狀細胞癌中Survivin的表達

王會恩 張霄鵬 王志康 劉會寧 周韶輝 段國辰

食管癌是常見的惡性腫瘤之一，其發病率有逐年增高的趨勢。隨著人們對腫瘤研究的深入，目前認為凋亡相關基因Survivin與食管癌的發生發展密切相關，本研究采用免疫組化方法研究食管癌中Survivin的表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2003至2004年食管鱗狀細胞癌蠟塊標本58例為試驗組，其中男35例，女23例;年齡39～79歲，平均年齡56.61歲;高分化28例，中分化21例，低分化9例。所有患者均為術前未經放療及化療的初發病例。正常食管黏膜組織32例為對照組，其中男22例，女10例;年齡20～68歲，平均年齡31.30歲。為囊腫等良性腫瘤旁的正常黏膜組織。以上每例標本均進行HE染色后經有經驗的病理醫師閱片后確診。

1.2 主要試劑 羊抗人Survivin多克隆抗體，為SantaCruz公司產品。SP免疫組化試劑盒，DAB顯色劑，多聚賴氨酸(Poly-L-lysine)防脫片劑均購自北京中山生物技術有限公司。

1.3 方法 采用免疫組織化學SP法(過氧化物酶標記的鏈酶卵白素法)。將每個蠟塊切為4～5 μm的切片，共切3張，1張HE染色，1張作為陰性對照，另1張Survivin染色。免疫組化步驟均嚴格按照試劑盒要求操作。常規設立陽性對照和陰性對照。

1.4 實驗結果判定 細胞漿呈棕黃色者為Survivin陽性細胞。首先按染色強度記分:0為陰性，1為弱陽性，2為陽性，3為強陽性。再按照陽性細胞所占百分比記分:陽性細胞＜5%為0分，5% ～25%為1分，25% ～50%為2分，50% ～75%為3分，＞75%為4分。兩者之和≥2分可判為陽性。

1.5 統計學分析 應用SPSS 11.0統計軟件，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Survivin蛋白在正常食管黏膜組織和食管癌組織中的表達 Survivin蛋白在食管鱗狀細胞癌組織中的表達，陽性表達55.17%(32/58)，陰性 44.83%(26/58);在正常食管組織中陽性表達9.38%(3/32)，陰性 90.62%(29/32)。2組比較差異有統計學意義(χ2=18.24，P＜0.01)。見表1、圖1。

表1 Survivin在正常食管組織和食管癌組織中的表達 例

圖1 食管鱗癌組織中Survivin的表達(SP×200)

2.2 Survivin蛋白表達與患者的臨床病理學特征的關系 Survivin蛋白的表達與患者的性別、年齡及腫瘤的部位無明顯的相關性(P ＞0.05)，而與腫瘤的分化程度相關(P＜0.05)。見表2。

表2 Survivin的表達與臨床病理學指標的關系 例

3 討論

我國是食管癌的高發國，且病死率居高不下。食管癌的發生發展是一個多因素、多階段、多基因參與的復雜過程，因此從細胞水平深入到基因分子水平探討食管癌病變的發生、發展機制具有重要的臨床意義。

Survivin又名生存素，是一種分子量為6.5 kDa的胞內蛋白，編碼基因定位于染色體17q25。生存素只表達于胚胎和發育的胎兒組織，除胸腺、生殖腺外不見于其他終末分化的正常成人組織。相反在大多數腫瘤組織如肺癌、結腸癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌、膀胱癌中均可檢測到生存素的表達。生存素能抑制各種凋亡誘導因子所誘導的細胞凋亡。

Satoh等［1］發現胰腺癌 Survivin蛋白的表達陽性率為76.9%，認為在腫瘤發生早期階段即有Survivin蛋白表達上調，并與凋亡指數明顯相關。Kishi等［2］研究了82例前列腺癌標本和80例正常對照前列腺組織，結果表明Survivin表達在有淋巴結轉移和血管侵犯的癌中表達增高，而且與癌細胞增殖活性成正相關，提示Survivin表達的程度與前列腺癌發生、發展有關。Li等［3］報道了 Survivin mRNA在肝癌中的表達情況，Survivin mRNA表達陰性腫瘤的癌細胞凋亡率明顯高于陽性者(P=0.0019)，Survivin mRNA表達陽性患者5年生存率明顯低于陰性者(P=0.0148)，提示Survivin mRNA表達情況可作為預測肝癌切除術后預后的獨立指標。另外，研究發現34.5%的胃癌，70.7%的乳腺癌，77.8%的膀胱癌，85.5%的非小細胞性肺癌中都有不同程度的Survivin mRNA表達，Survivin蛋白通過級聯式激活并溶解蛋白質，主要抑制Caspase-3和Caspase-7的活性，阻斷細胞的凋亡，是迄今發現的最強的凋亡抑制因子［4］。Survivin蛋白表達與患者的性別、年齡及腫瘤部位無明顯關系，但與腫瘤組織的浸潤深度及淋巴結轉移的關系各家報道不一。多數研究表明Survivin蛋白的表達與多種腫瘤的生物學特性、分期密切相關［5］。Lu等［4］的資料顯示，Survivin蛋白表達與胃癌的組織學類型及淋巴管浸潤有關。Lo等［6］研究顯示，Survivin蛋白在口腔及皮膚鱗癌組織中的表達與腫瘤的分化程度和淋巴結轉移有密切關系。少數研究認為Survivin蛋白的表達與上述臨床病理因素無關。本研究結果顯示 Survivin蛋白的表達隨食管鱗狀細胞癌的浸潤深度加深而增強，但無統計學意義(P＞0.05)，而在有淋巴結轉移的食管鱗癌組織顯著高于淋巴結無轉移組織，結合長期生存組表達明顯低于短期生存組，提示Survivin蛋白是一個有研究價值的腫瘤標志物及判斷食管鱗狀細胞癌預后的參考指標，并有可能成為基因治療的新靶點。

本研究結果顯示:在58例食管鱗癌組織中Survivin有32例陽性表達，為胞漿染色。而在32例正常黏膜中，Survivin僅有3例陽性表達，也為漿染色，這與多數實驗結果基本一致，少數研究發現Survivin也可出現核表達，出現不一致的原因可能與所取樣本數目多少有極大關系，還可能與腫瘤的組織分型、免疫組化技術等多種因素有關。

本試驗陽性率與年齡、性別及部位無關，只與分化程度相關，隨分化程度的降低，Survivin的表達有升高趨勢，我們的結果顯示，低分化和中分化均與高分化差異有統計學意義，但低分化和中分化差異無統計學意義。

綜上所述，Survivin與食管癌的發生發展密切相關，它作為一種新的凋亡抑制蛋白在腫瘤發病機制中的作用以及治療靶點的應用已經引起了廣泛關注，但是仍有很多問題亟待闡明，如Survivin基因表達的調控、與癌基因、抑癌基因和其他凋亡相關基因的關系，以及在腫瘤診治中的具體的應用價值等。

1 Satoh K，Kaneko K，Hirota M，et al.Expression of Survivin is correlated with cancer cell apoptosis and is involved in the development of human pancreatic duct cell tumors.Cancer，2001，92:271-278.

2 Kishi H，Igawa M，Kikuno N，et al.Expression of the Survivin gene inprostate cancer:correlation with clinicopathological characteristics，proliferative activity and apopt.J Urol，2004，171:1855.

3 Li F，Ambrosini G，Chu EY，et al.Control of apoptosis and mitotic spindle checkpoint by Survivin.Nature，1998，396:580-584.

4 Lu CD，Altieri DC，Tanigawa N，et al.Expression of a novelantiapoptosis gene，Survivin，correlated with tumor cellapoptosis and p53 accumulation in gastric carcinomas.Cancer Res，1998，58:1808-1812.

5 Altieri DC，Marchisio C.Survivin apoptosis:an interloper between cell death an cell proliferation in cance.Lab Invest，1999，79:1327.

6 Lo Muzio L，Staibano S，Pannone G，et al.Expression of theapoptosis inhibitor Survivin in aggressive squamou cell carcinoma cell careinoma.Exp Mol pathol，2001，70:249.