野生酸棗果肉幾種有機酸含量分析研究

劉世鵬，曹娟云，陳宗禮

（延安大學生命科學學院，陜西省區域生物資源保育與利用工程技術研究中心，陜西 延安 716000）

酸棗（Ziziphus jujuba var.spinosa）系鼠李科（Rhamnaceae）落葉灌木，廣泛分布于我國北方諸省，具有養肝、寧心、安神及其斂汗的功效[1]，常用于治療神經衰弱、心煩失眠、多夢、盜汗、易驚等疾病[2]，同時又有一定的滋補作用。現代藥理學研究表明，酸棗的主要活性是齊墩果酸、熊果酸等幾種五環三萜類化合物，它們具有抑菌、保肝、降脂、升白細胞、增強機體免疫力等功能，近年又證明其具有一定的抗癌活性[3]，因此受到廣泛關注。

王向紅等[3]對酸棗和紅棗的果肉與果仁中的齊墩果酸與熊果酸進行了分析，結果表明酸棗果肉的含量明顯高于紅棗，而酸棗仁中幾乎不含有齊墩果酸和熊果酸。最近的研究表明，不同地區的酸棗種質資源不同[4-5]，即使在同一地區差異也很大[6]。為此，本研究對幾個不同產地的不同種質酸棗果肉的總酸、Vc以及齊墩果酸和熊果酸含量進行對比研究，為酸棗的充分開發利用及品種選育提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 儀器

島津LC-2010A型高效液相色譜儀（日本島津），紫外檢測器（河南兄弟儀器設備有限公司），Easy3000色譜工作站（上海千譜軟件有限公司）；德國 Sartorius BP-221s電子天平（德國Sartotius公司）；超純水制備系統:MILLI-Q Synthesis（美國MILLIPORE）；超聲儀：KQ—300DE型（昆山超聲儀器有限公司）；針筒式微孔濾膜過濾器（江蘇百林科技，孔徑0.45 μm）；PB-10型酸度計；離心機（SIGMA 3K30）等。

1.2 試劑

標準樣品：齊墩果酸、熊果酸、檸檬酸購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇，乙腈為美國Fisher公司產品，為色譜純；其余試劑均為分析純，所使用的水為去離子的雙蒸餾水。

1.3 試驗材料

6種酸棗材料分別采自陜西神木、陜西安塞、山西呂梁、河北邢臺和山東煙臺。其中采自陜西神木的兩個材料外形差別較大。其主要生物學性狀見表1。

1.4 樣品處理

表1 6種酸棗果實的主要生物學性狀

酸棗樣品依次用自來水、蒸餾水、雙蒸水清洗干凈后，一部分風干用于總酸和Vc的測定，另一部分放45°C烘箱中烘至完全干燥后，去核，將果肉研磨粉碎成粉末狀，－20°C密封保存，用作齊墩果酸和熊果酸含量的測定。

1.5 總酸與Vc的測定

采用滴定法，分別按GB/T 5009.187-2003（以檸檬酸計）[7]和何照范等[8]的方法，每個樣品重復6次。

1.6 齊墩果酸和熊果酸含量測定

1.6.1 色譜條件 色譜柱：Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm），流動相∶乙腈∶甲醇∶0.5%醋酸銨=67∶12∶21，磷酸調 pH 值為 2.8；流速：0.8 mL/min；柱溫：22℃檢測波長：210 nm。

1.6.2 對照品溶液的配制和標準曲線的建立 精密稱取齊墩果酸和熊果酸對照品適量,甲醇溶解，配成含齊墩果酸濃度為0.71 mg/mL和熊果酸0.72 mg/mL 的溶液。取齊墩果酸原液、稀釋 2、5、10、20 倍，熊果酸溶液稀釋 8、10、15、20、25 倍后均進樣 10 μL，按1.6.1色譜條件下分析，記錄色譜峰面積。

1.6.3 供試品的制備和測定 精密稱取6種干燥酸棗果肉粉末各0.5 g，置于具塞試管中，精密加甲醇3.0 mL，稱重,超聲提取30 min，以甲醇補重，8 000 r/min離心20 min，吸取上清液以0.45 μm微孔濾膜過濾，濾過后進樣20 μL。色譜條件同1.6.1。

2 結果與分析

2.1 總酸與Vc測定結果

圖1、圖2為6個材料的總酸與Vc含量。由圖中可以看出，6個材料的總酸和Vc含量分別在0.4%～4.2%和277～631 mg/100g FW之間，均為4號最高，2號最低。除了5號與6號的總酸含量接近外，材料之間的總酸與Vc含量差異顯著（p<0.05）。

圖1 6個酸棗材料果肉的總酸

圖2 6個酸棗材料果肉的Vc含量

2.2 齊墩果酸和熊果酸的回歸方程

標準品進樣量為橫坐標繪制標準曲線，計算回歸方程：齊墩果酸：y=0.500 5 x+0.058 4，r=0.999；熊果酸：y=0.3846 x－0.008 6，r=0.995。結果表明齊墩果酸含量在0.3571～7.1429 μg、熊果酸含量在0.285 7～0.892 9 μg內線性關系良好。

2.3 精密度試驗

精密吸取同一齊墩果酸和熊果酸對照品溶液，連續進樣6次。

齊墩果酸和熊果酸峰面積積分值的相對標準偏差（RSD）分別為7.2%和2.1%,表明儀器精密度良好。

2.4 供試液穩定性

取同一樣品溶液在 0、2、4、6、8、10、12 h 分別進樣20 μL,依次測定,結果6次測定齊墩果酸和熊果酸含量的RSD分別為6.1%和1.8%。造成齊墩果酸穩定性相對較差的原因可能是由于提取液呈微酸性，在此條件下，放置時間過長會使有機酸部分發酵變質，試驗結果提示供試液應及時測定。

2.5 重復性分析

精密稱取同一樣品6份，按供試品溶液的制備項操作，平行制備供試樣品，每份進樣20 μL。齊墩果酸和熊果酸各自峰面積的6次測定結果RSD分別為：4.3%和2.8%。結果表明，該方法的重復性良好。

2.6 回收率試驗

取干燥樣品（齊墩果酸含量為 0.54 mg/g,熊果酸的含量為0.66 mg/g）的樣品6份,每份0.5 g,分別精密加入齊墩果酸對照品溶液3.0 mL，按2.2.3項下方法進行提取和含量測定。測得并計算齊墩果酸和熊果酸的平均回收率為99.88%和99.42%（表2、3），結果表明該方法準確、可靠。

表2 齊墩果酸加樣回收率測定結果

表3 熊果酸加樣回收率測定結果

2.7 樣品測定結果

在1.6.1色譜條件下測定6個樣品的齊墩果酸和熊果酸總量。結果見圖3和表4。6個材料中齊墩果酸含量4號的最高，1號最低，總體在0.22～0.547 mg/g之間，而6個材料的熊果酸含量6號最高，1號最低，總體在0.280～0.645 mg/g之間。

圖3 樣品液相色譜圖

表4 6個酸棗材料果肉的齊墩果酸和熊果酸含量（mg/g）

3 討 論

酸棗廣泛分布于中國北方諸省。酸棗因其豐富的資源、突出的適應性、顯著的食療價值，以及純天然、富含營養等優勢，近年來日益受到農業、醫藥、食品等行業的的關注，成為當今世界棗屬植物中研究和開發利用的新寵[2]。但目前酸棗的利用主要是酸棗仁入藥，而素稱“Vc之王”[4]的果肉的開發和利用尚不夠充分，造成了巨大的資源浪費。試驗結果表明，不同種質的酸棗總酸和Vc含量差異很大，均為來自于山西呂梁的4號最高、陜西神木的2號最低。6個材料的總酸與Vc含量呈極顯著正相關，這與前人的研究結果一致[4，9]，據此，在肉用或汁用酸棗資源的預選中，高酸可作為高Vc酸棗的重要預選指標。

王向紅等對一種酸棗的果肉和多種不同產地紅棗中的齊墩果酸與熊果酸含量進行了分析，結果表明酸棗果肉的含量明顯高于所測試的其他紅棗的。本研究在實驗室采集的眾多酸棗材料中選擇了采自不同地區的6種外觀等生物學形狀差異明顯的酸棗果肉材料，測得的6個材料中齊墩果酸和熊果酸含量在有些材料之間差異明顯，但均高于紅棗的[3]，由此說明，酸棗果肉具有深入開發價值。

[1] 王身艷，劉清飛，秦明珠.酸棗仁、葉、肉、根的研究進展[J].中成藥，2000，（22）：794-796.

[2] 李璽喬，成 林，袁秉祥.酸棗仁軟膠囊治療神經衰弱的臨床研究[J].中國實驗方劑學雜志，2005，（1）：62-63.

[3] 王向紅，崔 同，齊小菊，等.HPLC法測定不同品種棗及酸棗中的齊墩果酸和熊果酸[J].食品科學，2002，23（6）：137-138.

[4] 武媛林.酸棗種質資源的評價及選優[D].石家莊：河北農業大學，2008.

[5] 安鋒利，楊江濤.酸棗抗旱機制研究進展[J].廣東農業科學，2009，（12）：78-80.

[6] 張亞利.陜西省不同產區酸棗仁品質比較研究[D].西安：西北農林科技大學碩士論文，2007.

[7] GB/T 5009.187-2003，干果（桂元、荔枝、葡萄干、柿餅）中總酸的測定.

[8] 何照范，張迪清.保健食品化學及其檢測技術[M].北京:中國輕工業出版社，1999.99-100.

[9] 楊 蕾.酸棗種質資源果實營養成份分析及種質評價[D].石家莊：河北農業大學，2004.