添加維生素B12對西門塔爾牛冷凍精液品質影響的初步觀察

郭學東,張麗娟,馮立國

(吉林省梨樹縣畜牧總站 136500)

添加維生素B12對西門塔爾牛冷凍精液品質影響的初步觀察

郭學東,張麗娟,馮立國

(吉林省梨樹縣畜牧總站 136500)

為觀察稀釋液中添加VB12對西門塔爾牛精液品質的影響，進行了對比試驗。結果表明:添加VB12的試驗組凍精解凍后精子活力、頂體完整率比對照組有極顯著提高 ( P ＜ 0.01)，精子畸形率與GOT活性均明顯下降，精子存活時間延長。說明VB12在牛精液冷凍中對牛精子形態結構具有一定保護作用。

牛精液；冷凍；維生素B12；精子質量

自20世紀50年代初，牛精液冷凍技術由Smith和Polge研究成功后，已在全世界范圍內應用，并進入了生產過程。據有關報道，VB12可以提高精子活力和受胎率[1]。本試驗在牛的精液冷凍稀釋液中添加VB12，觀察解凍后牛精子某些生理生化指標的變化,以期為生產實踐提供參考。

1 材料和方法

1.1 稀釋液的配制

用天平稱取Tris(三羥甲基氨基甲烷)12.12 g、葡萄糖5.5 g、檸檬酸6.76 g，放入1000 mL的三角燒杯中，加入重蒸餾水344.12 g，待充分溶解后用濾紙(用酒精燈燒掉絨毛)過濾后，放入水浴鍋中煮沸消毒30 min，加入甘油32 mL，然后放入4～5℃的冰箱中。

在采精前取出稀釋液，每500 mL加入青霉素80萬單位、鏈霉素50萬單位，然后放入水浴鍋中加溫至32℃，加入卵黃100 mL充分振蕩，使卵黃充分溶解。然后加入河南潤弘生物制藥廠生產的VB12注射液2.5 mL(1 ml含VB120.5 mg,其化學成份含有微量元素鈷)為試驗稀釋液。

對照組稀釋液除不含VB12外,其他成分及劑量均與試驗組稀釋液相同。

1.2 精液的冷凍

試驗所用公牛為四平市興牛牧業服務有限公司種公牛站中挑選的相近年齡和體重的4頭西門塔爾種公牛(XM09297、XM09223、XM09315、XM09139)。用假陰道采精，原精活力都在0.6以上。本實驗用20個采精日完成。

將1次采精取得的精液分為2等份，1份用試驗組稀釋液稀釋，另一份用對照組稀釋液稀釋，稀釋劑量兩組相同。經2 h緩慢降溫至5℃后，放入5℃平衡柜中平衡2 h，然后在冷凍儀中冷凍。

1.3 冷凍精液的解凍

預先把水浴鍋水溫加熱至38～40℃，細管凍精用鑷子分別取出迅速放入盛有38℃水的容器中解凍，解凍時間為10～15 s，待溶解后立即取出，用吸水紙或紗布擦干水滴，再用細管剪剪去超聲波封口端1 cm，滴一小滴精液于顯微鏡載玻片上鏡檢即可。

1.4 精液品質測定

精子活力測定：采用常規方法, 按百分制評定精子活力。每個樣品重復2次，取其平均數。

精子頂體完整率和畸形率的測定：每個樣品用姬姆薩染色法涂片2張，每張在油鏡下分別數500個精子，計算頂體完整率和畸形率。

GOT 活性的測定：精液的樣品經1500 r/min離心5 min，取其精清按常規方法[2]測定GOT(谷氨酸草酰乙酸轉氨酶)活性。

精子存活時間測定：解凍后的精液放在39℃恒溫箱中，定時檢查精子活力，直至精子全部死亡為止。

2 結果與分析

由表1可以看出，試驗組比對照組精子活力有極顯著提高(P＜0.01)，頂體完整率有極顯著提高(P＜0.01)；精子畸形率和GOT活性均明顯下降，精子存活時間延長。試驗結果表明，在牛的精液冷凍中添加維生素稀釋液對精子具有一定保護作用。

試驗組凍精解凍后的精子形態結構損傷程度較對照組小，GOT外滲量少，精子活力高。因為精子前進運動主要動力來自尾部，GOT是精子尾部線粒體上的主要酶之一，當精子尾部受到損傷時，線粒體上GOT向精清中釋放，而使精清中酶的活性增強，但精子活力卻減弱。目前只知道VB12是一種輔酶，含有微量元素鈷，具有促進血細胞成熟，參與機體代謝作用，是否與它含的微量元素鈷有關，還需要進一步探索。

試驗所用公牛頭數較少，只是初步結果，其它一些影響因素還有待進一步深入探討。

表1 添加VB12對解凍后精液品質的影響

[1] 董偉.家畜繁殖學[M].北京:中國農業出版社,1990,51,79,147-149.

[2] 北京農業大學. 動物生化學實驗指導[M].北京:中國農業出版社, 1986.

S823.3

A

1005-2739（2011）06-0050-02

2011-09-13

郭學東(1975-)，男，專科，畜牧師。E-mail: jlls5222016@126.com