抗纖膠囊質量標準的研究

朱 琳 翟美華

江蘇省南通市藥品檢驗所，江蘇南通226006

抗纖膠囊是江蘇省南通市第三人民醫院的醫院制劑，功能為扶本固正、活血化瘀、解毒通絡，阻止肝纖維化的發生，用于預防和治療早期肝硬化，臨床療效顯著。方中含有漢防己、黃芪、山楂、赤芍、桃仁、苦參及蟲草菌絲。該藥的質量標準目前比較簡略，只包含性狀和檢查兩項，現對其鑒別及含量測定作進一步的研究。

1 藥品和儀器

1.1 試劑及樣品

粉防己堿對照品（批號110711-200406）、芍藥苷對照品（批號110736-200934）、苦參堿對照品（批號110805-200508）購于中國藥品生物制品檢定所；硅膠G（青島海洋化工廠）；甲醇、三乙胺為色譜純；液相用水為去離子水；其余試劑均為分析純。抗纖膠囊樣品及相應陰性對照樣品均由江蘇省南通市第三人民醫院提供。

1.2 儀器

日立L-2000型高效液相色譜儀（日本日立公司）；賽多利斯BP211D電子分析天平。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

2.1.1 赤芍的鑒別 取本品內容物1 g，加乙醇10 mL，振搖5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。取缺赤芍的陰性對照品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB][1]試驗，吸取上述3種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開劑，展開、取出、晾干，噴5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同的藍紫色斑點。陰性對照無干擾。

2.1.2 苦參的鑒別 取本品內容物1 g，加濃氨試液0.5 mL，三氯甲烷25 mL，放置過夜，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取苦參堿對照品，加三氯甲烷制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。取缺苦參的陰性對照品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗，吸取上述兩種溶液各4μL，分別點于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)為展開劑，展距8 cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水（2∶4∶2∶1）10℃以下放置的上層溶液為展開劑展開，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾[2]。

2.2 含量測定

2.2.1 溶液的制備 ①精密稱取于五氧化二磷減壓干燥12 h的粉防己堿對照品15.47 mg，置50 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 mL置于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1 mL中含粉防己堿92.82 μg）。②取

本品內容物1 g，精密稱定，加甲醇約100 mL，索氏提取5 h至基本提取完全，轉移到蒸發皿中蒸干，用甲醇少量多次洗滌，定容至50 mL容量瓶中，搖勻，過0.45μm濾膜，即得。③取缺漢防己的陰性樣品，同“2.2.1.2”項下方法操作，即得。

2.2.2 色譜條件和系統適用性試驗 色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇-三乙胺溶液（3.5→500）（80∶20），流速：0.9 mL·min；檢測波長：283 nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。

圖1 粉防己堿含量測定系統適用性結果

2.2.3 空白試驗 取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，分別進樣測定。可見供試品色譜中具有與粉防己堿對照品保留時間一致的色譜峰，而陰性對照則沒有，說明測定的專屬性好，無干擾。見圖1。

2.2.4 線性關系考察 精密吸取“2.2.1.1”項下對照品溶液1、2、4、6、8、10、12、16、20、30 μL 進行色譜測定，按上述色譜條件測定峰面積，并以峰面積（Y）對進樣量（X，μg）進行回歸，得標準曲線方程：Y=735786X-428.14，r=1.0000（n=10），表明粉防己堿在0.09282～2.7846 μg范圍內呈良好線性關系。

2.2.5 精密度試驗 精密吸取“2.2.1.1”項下對照品溶液連續進樣6次，每次10μL，峰面積平均值為2281537，RSD為0.19%，結果顯示，儀器精密度良好。

2.2.6 穩定性試驗 精密吸取供試品溶液，于 1、2、3、4、6、8、10、12 h進樣測定，結果RSD=1.56%，試驗結果顯示，供試品溶液在避光條件下，12 h內穩定。

表1 加樣回收率測定結果

2.2.7 重復性試驗 按“2.2.1.2”項下方法處理同一批樣品5份，HPLC分析，計算粉防己堿含量，結果RSD=1.52%，表明方法重復性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗 取同一批樣品0.5 g，精密稱定9份，精密量取對照品濃溶液5 mL、6 mL、7 mL各3份，置上述樣品中，照“2.2.1.2”法測定，計算粉防己堿含量，求出加樣回收率。見表1。

2.2.9 樣品的測定 分別取3批抗纖膠囊，按上述含量測定方法進行測定，結果粉防己堿含量分別為1.31 mg/粒、1.24 mg/粒、1.27 mg/粒。故暫定本品每粒含粉防己堿（C38H42N2O6）應不低于1.0 mg。

3 討論

3.1 提取精制方法的選擇

本實驗比較了加甲醇超聲提取、加甲醇索氏提取以及加氯仿和氨水索氏提取3種方法后發現，用甲醇索氏提取，結果粉防己堿的吸收峰相對較大，圖形理想。

3.2 流動相的選擇

有研究發現如果流動相中沒有三乙胺，可見峰形的拖尾較嚴重，其原因可能是粉防己堿中的堿性氮原子易與C18色譜柱上未完全封尾的氫氧根產生的氫鍵結合，使其難以洗脫，造成拖尾。加入三乙胺后可取代粉防己堿與色譜柱中的氫氧根產生的氫鍵結合，減少粉防己堿在色譜柱上的吸附，使其易于洗脫，從而改善色譜峰的形狀.在實驗流動相篩選過程中若用二乙胺，其分離效果較三乙胺差[3]。在本實驗中甲醇-三乙胺溶液（3.5→500）（80∶20），流動相分離效果最好。

3.3 檢測波長的選擇

粉防己堿的紫外吸收光在214 nm和283 nm波長處有最大吸收峰，其中214 nm波長處靠近末端吸收峰，且雜質干擾較大，不利于定性和定量；而283 nm波長處在檢測時不被雜質干擾，因此選擇283 nm為檢測波長[4]。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：1.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典中藥薄層色譜彩色圖集[M].廣州：廣東科技出版社，1993：106.

[3] 尹明福，鄭光浩，南極星.反相高效液相色譜法測定粉防己堿的含量[J].延邊大學醫學學報，2004，27（3）：183.

[4] 馮碧敏，葉云，張昊.高效液相色譜法測定防己中粉防己堿含量[J].藥物鑒定，2005，14（11）：37.