血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性與纖溶系統(tǒng)的關(guān)系

王景明

近年來，凝血、纖溶系統(tǒng)與動脈粥樣硬化及其引發(fā)事件的關(guān)系倍受關(guān)注，尤其在缺血性心腦血管疾病方面。研究發(fā)現(xiàn)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)基因多態(tài)性與心腦血管發(fā)病高度相關(guān)［1～3］，但ACE基因多態(tài)性在凝血及纖溶中的作用以及其與纖溶的關(guān)系，查新尚未見的報道。因此，我們應(yīng)用PCR技術(shù)和遺傳學(xué)方法測定了疾病組和對照組的ACE基因多態(tài)性，測dD、PT、Fg、TT、APTT各值。旨在探討ACE基因多態(tài)性與纖溶系統(tǒng)之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 疾病組:126例，男76例，女50例，選自2001年1月至2009年10月間住院患者，病例均符合WHO關(guān)于冠心病、高血壓病的命名和診斷標準，年齡(62.76±8.5)歲﹙52～77歲﹚。其中單一疾病:冠心病22例，高血壓20例;合并疾病:冠心病合并高血壓者20例，高血壓合并冠心病者24例。對照組:選擇經(jīng)病史、體檢、實驗室檢查、X線及心電圖檢查，排除各類心腦血管疾病、糖尿病和肝腎功能不良者及無高血壓病史者66例，男40例，女26例，年齡53～76歲，平均年齡(63.28±8.8)歲。均按ACE基因型分為Ⅱ、ID和DD基因型三組。

1.2 方法 受試者均禁食12 h以上，晨間取肘靜脈血，用酶法測D-二聚體(dD)、凝血酶原時間(PT)、纖維蛋白原(Fg)、凝血酶時間(TT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)，F(xiàn)g采用Follin酚法。

ACE基因檢測及多態(tài)性:取肘靜脈血5 ml，肝素抗凝，酚-氯仿法抽提基因組DNA，應(yīng)用PCR方法擴增DNA片段。參照 Rigat設(shè)計引物［4］，上引物 5'-CTG GAG ACC ACT CCC ATC CTT TCT-3';下引物 5'-GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA T-3'。擴增程序:94℃ 變性 1 min，58℃ 退火 1 min，72℃延伸1 min，共30個循環(huán)。取PCR產(chǎn)物10 μl，采用2%凝膠電泳(含溴乙錠 0.5 μl/ml)，經(jīng)100V 60 min，在紫外光下觀察、鑷影。可見ACE基因有190bp(D)和490bp(I)兩個基因片段(附圖)，三種基因型:DD、ID和Ⅱ型。

附圖 ACE多態(tài)性基因圖

2 結(jié)果

2.1 正常對照組與疾病組ACE基因多態(tài)性頻率見表1。疾病組ACE基因DD型頻率38.1%和D等位基因頻率54.4%明顯高于正常人的19.7%和34.1%(χ2分別為6.63、8.94，P＜0.05、P ＜0.05)。

2.2 臨床資料及 dD、PT、Fg、TT、APTT指標見表2。疾病組中，dD、Fg水平明顯高于對照組(P ＜0.05)，而 PT、TT、APTT水平明顯低于對照組(P＜0.05)。將疾病組和對照組按ACE基因型分組，分別進行比較。在三種基因型患者中，ACE基因DD型疾病組dD、Fg水平明顯高于ID、Ⅱ型組(P＜0.05)，而PT、TT、APTT水平明顯低于ID、Ⅱ型組(P＜0.05)，相比有顯著性差異;ACE基因多態(tài)性與dD、Fg濃度間顯著正相關(guān)(r值分別為0.671、0.702，P 值均 ＜0.01);與 PT、TT、APTT 濃度間存在顯著負相關(guān)(r=-0.648、-0.683、-0.653，P ＜0.01)。

表1 正常人與疾病組的ACE基因型和等位基因頻率

表2 各組臨床資料和 dD、PT、Fg、TT、APTT指標

3 討論

3.1 ACE基因多態(tài)性研究范圍的擴大 近年來，編碼ACE基因多態(tài)性被認為是冠心病、高血壓病的侯選易感基因之一，與維持及修復(fù)心血管結(jié)構(gòu)密切相關(guān)［4-6］。而我們研究發(fā)現(xiàn)ACE基因多態(tài)性與凝血及纖溶系統(tǒng)關(guān)系密切。與凝血和纖溶系統(tǒng)中的dD、PT、Fg、TT、APTT等指標密切相關(guān)，疾病組中dD、Fg水平明顯高于對照組(P ＜0.05)，而PT、TT、APTT水平明顯低于對照組(P＜0.05)。將疾病組和對照組按ACE基因型分組，分別進行比較。在三種基因型患者中，ACE基因DD型疾病組dD、Fg水平明顯高于ID、Ⅱ型組(P＜0.05)，而PT、TT、APTT水平明顯低于ID、Ⅱ型組(P＜0.05)，相比有顯著性差異;ACE基因多態(tài)性與dD、Fg濃度間顯著正相關(guān)(r值分別為0.671、0.702，P ＜0.01);與 PT、TT、APTT 濃度間存在顯著負相關(guān)(r=-0.648、-0.683、-0.653，P ＜0.01)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，ACE基因 DD型與 dD、Fg濃度明顯正相關(guān)，與 PT、TT、APTT明顯負相關(guān)。結(jié)果提示ACE基因尤其DD型可能是影響凝血及纖溶異常的關(guān)鍵，這進一步強調(diào)了基因DD型者檢測和控制凝血及纖溶異常的重要性。

3.2 凝血與纖溶系統(tǒng)與心腦血管疾病的關(guān)系 眾所周知，缺血性心腦血管的發(fā)病過程中存在著高凝狀態(tài)，凝血和纖溶系統(tǒng)貫穿在心腦血管病發(fā)病的始終，心腦血管疾病已成為死亡與致殘最重要的原因。因此，研究治療和預(yù)防心腦血管疾病尤為重要。

多數(shù)研究認為［7，8］，dD、Fg水平升高，是冠心病的重要危險因素之一，本文觀察發(fā)現(xiàn)基因DD型疾病組中，dD、Fg水平升高顯著，明顯高于其他基因型組(P＜0.01)，而基因DD型對照組中，dD、Fg水平也升高，明顯高于其他基因型組(P＜0.05)。纖維蛋白原是血小板聚集的重要介質(zhì)之一，是血漿中最大的鏈狀蛋白，對血漿及全血粘度影響極大，促進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，而Fg升高進一步加重缺血性心腦血管的原因之一。另外，血漿中dD過多，促進局部炎癥細胞特別是單核細胞合成并釋放某些細胞因子，導(dǎo)致凝血亢進，增加血栓形成的傾向，這也是缺血性心腦血管病中，dD、Fg升高的原因所在。PT、TT、APTT是反應(yīng)凝血的重要指標。PT、TT、APTT縮短，除了少數(shù)因為凝血因子Ⅷ或Ⅻ的活性特別高存在高凝狀外;還存在于缺血性心腦血管等疾病中，單獨測PT臨床上意義不大，與TT、APTT同時檢測不但可擴大篩選因子活性范圍，而且提高對肝素類物質(zhì)檢測的敏感性。在缺血性心腦血管疾病中，PT、TT、APTT各值縮短。本研究示，ACE基因DD型疾病組，PT、TT、APTT水平明顯低于ID、Ⅱ型組，相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，與PT、TT、APTT明顯負相關(guān)。

研究表明，dD、PT、Fg、TT、APTT 異常除與環(huán)境因素有關(guān)外，還與ACE基因等遺傳因素有關(guān)。隨著分子生物學(xué)研究的不斷發(fā)展和范圍的不斷擴大，檢測ACE基因多態(tài)性在凝血及纖溶中的作用，對心腦血管疾病的治療和預(yù)防起了積極地作用，對抗栓和溶拴藥物的應(yīng)用起良好的指導(dǎo)作用。

［1］ 王景明，呂秀云，陳亮，等.血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性與血脂及纖維蛋白原的關(guān)系.中華航海醫(yī)學(xué)與高氣壓醫(yī)學(xué)雜志，2002，9(4):204-206.

［2］ Bautista LE，Vargas CI，Orostegui M，et al.Population-based casecontrol study of rennin-angiotensin system genes polymor-phisms and hypertension among hispanics.Hypertens Res，2008，31(3):401-408.

［3］ Lebedeva ER，Sakovich VP，Khusainova RI，et al.The role of angiotensin-converting enzyme and apolipoprotein E in the development of intracratiial aneurysms.Zurnal Nevropatologii I Psi-hiatrii Im S S Korsakova，2007，107(10):52-57.

［4］ Rigat B，Hubert C，Corvopl P，et al.PCR detection of the inser-tion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene(DCP1)(dipeptidyl carboxypeptidase 1).Nucleic Acids Res，1992，20:1433.

［5］ Ay C，Bencur P，Vormittag R，et al.The angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism and serum levels of an-giotensin-converting enzyme in venous thromboembolism.Data from a case control study.Thromb Haemost，2007，98(4):777-782.

［6］ 張晟瑜，張抒揚.冠心病與血栓形成相關(guān)基因的多態(tài)性.協(xié)和醫(yī)學(xué)雜志，2010，1(1):118-120.

［7］ 唐渝平.不同類型冠心病凝血纖溶指標的對比分析.醫(yī)師進修雜志，2004，27(7):30-31.

［8］ 郭素菊，劉梔，張譯心.急性腦梗死病人血漿纖維蛋白原、D-二聚體含量和纖溶酶原活化的變化.微循環(huán)學(xué)雜志，2006，16(2):33.