三七及竹節參中皂甙的不同提取方法

張春軍,董琦,董凱

(牡丹江醫學院,黑龍江 牡丹江 157011)

三七〔Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen〕,是我國的傳統珍貴藥材為五加科植物,以干燥的根入藥[1]。別名山膝、金不換、田漆、田七、人參三七、滇三七等。三七用于治療心血管疾病已有悠久的歷史,在《醫門秘旨》中已有記載。三七具有抗炎、抗衰老和提高免疫功能等多種作用。三七皂苷是三七的活性部位,對心血管系統有強心、擴張冠狀動脈、增加冠狀血流量、抗動脈粥樣硬化、降低血小板表面活性、抑制血小板活化、黏附和聚集、抗血栓形成等作用[2]。除了三七外,五加科植物竹節參(Panax japonicus),主產于云南、四川、貴州、廣西等省,其根、莖葉中也含有大量的皂甙,為了綜合開發利用三七及竹節參的資源。我們對三七及竹節參根、莖、葉中皂甙的提取方法進行了實驗研究,目的在為工業化提取三七及竹節參皂甙找到更簡捷、安全的新方法,并把竹節參作為一種新的醫藥資源進行開發和利用。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 微波爐、回流裝置、減壓蒸餾裝置、恒溫水浴槽、721分光光度計、天平。

1.2 試劑 蒸餾水、50%乙醇、70%乙醇、甲醇、正丁醇、乙醚、濃H2SO4、冰醋酸 、16%香草醛醇、77%硫酸。

2 提取方法

2.1 三七粗莖葉總皂甙的提取

2.1.1 水煎醇沉法。稱20g干燥的粗莖葉于250mL燒杯中,分別用50mL水煎煮四次,每次15min,過濾合并濾液,用Libeman-burchard試驗檢驗無紅色。說明沒有提取出皂甙,此方法行不通。

2.1.2 冷浸法。稱20g干燥三七粗莖葉于250mL燒杯中,分別加入水(30、30、20、20)mL,時時攪拌 1.5h,過濾,合并濾液,棄去濾渣,用 Libeman-burchard試驗,鑒定無紅色,說明沒有提取出皂甙,此方法行不通。

2.2 三七根中皂甙的提取

稱取20g烘干粉碎的三七根粉末,5份,分別于250mL具塞錐形瓶中,其中兩份分別用甲醇,水各100mL浸泡24h,另外兩份分別用甲醇,水各 100mL浸泡36h,其余1份加50%乙醇置于微波爐中40%的火力提取四次,每次2min,分別過濾,用Libeman-burchard試驗,鑒定有紅色,分別合并濾液,棄去濾渣,并減壓回收溶劑至浸膏狀,分別用50mL蒸餾水溶解,蒸餾瓶用少量蒸餾水洗滌,合并于分液漏斗中,分別用乙醚萃取 4次(30、30、20、20)mL,棄去醚層并回收再利用,水層再用水飽和過的正丁醇萃取4次(30、30、20、20)mL,棄下層回收再利用,將上層減壓回收正丁醇溶劑至浸膏狀,用50mL蒸餾水溶解,并用100mL容量瓶定容,搖勻待測。

2.3 竹節參根、莖葉中皂甙的提取

2.3.1 冷浸法。分別稱取烘干粉末的竹節參根,莖葉粉末8g于具塞錐形瓶中,分別加人甲醇104mL,浸泡36h后過濾用 Libeman-burchard試驗鑒定有紅色,說明含有皂甙。棄去濾渣,濾液減壓回收溶劑至浸膏狀,分別用50mL蒸餾水溶解,蒸餾瓶用少量蒸餾水洗滌,分別合并于分液漏斗中,分別用乙醚萃取4次(30、30、20、20mL),棄上層并回收再利用,下層用水飽和過的正丁醇萃取4次(30、30、20、20mL)。棄下層回收再利用,將上層減壓回收正丁醇溶劑至浸膏狀,分別用50mL甲醇溶解,再用100mL容量瓶定容,搖勻待測。

2.3.2 回流法。分別稱取烘干粉碎的竹節參根、莖葉粉末10g置于250mL圓底燒瓶中。分別加入其中100mL甲醇,安裝好回流裝置加熱回流12h后過濾、棄濾渣。濾液減壓回收甲醇至浸膏狀,再用50mL水溶解,用少量蒸餾水洗滌圓底燒瓶合并溶液,用乙醚萃取4次(30、30、20、20mL)上層回收再利用。下層溶液用水飽和過的正丁醇萃取4次(30、30、20、20mL)下層回收利用。上層減壓回收正丁醇至浸膏狀。用50mL甲醇溶解,再用100mL容量瓶定容,搖勻待測。

2.3.3 微波法。分別稱取烘干粉碎的竹節參根、莖葉粉末10g置于250mL具塞錐形瓶中加入70%的乙醇分別提取3次,每次2min,提取后用 Liberman-Burchard試驗鑒定有紅色,說明含有皂甙。過濾棄渣,濾液減壓回收回收溶劑至浸膏狀,用50mL蒸餾水溶解,再用少量蒸餾水洗滌蒸餾瓶。合并溶液于分液漏斗中用乙醚萃取 4次(30、30、20、20mL)。上層回收再利用,下層溶液繼續用水飽和過的正丁醇萃取4次(30、30、20、20mL)下層回收利用,上層溶液減壓回收正丁醇至浸膏狀,用50mL甲醇溶解,再用100mL容量瓶定容,搖勻待測。

3 皂甙的測定

分別用移液管精密吸取各組樣品1mL稀釋至10mL備用,精密吸取標準液和各組稀釋后的樣品溶液各0.5mL,分別置于10mL具塞的刻度離心試管中,將試管至于冰水浴中,分別精密加入16%香草醛醇溶液0.5mL,77%硫酸5mL搖勻,將試管置60℃恒溫水浴中加熱10min,再置冰水浴中冷卻15min于544nm波長測定光密度,另外平行的作一空白液進行校正[3],按二者光密度值計算三七總皂甙含量。

4 結果

通過2.1的實驗,總結經驗得出用冷浸法、回流法、微波法對三七及竹節參中皂甙的提取。

表1 提取三七根皂甙的方法比較

從表1中的數據可以看出,冷浸法提取中,浸泡36h比浸泡24h提取率高。而微波法提取比冷浸法提取率高,并且,微波法較省時。

表2 不同方法對竹節參皂甙的比較

從表2中數據可看出;采用微波、回流和冷浸提取法,在相同處理條件下,各組皂甙得率相差不太明顯。微波、回流和冷浸法提取竹節參皂甙得率分別為:3.40%、3.20%、2.71%、莖葉得率分別為:3.28%、3.05%、2.02%。其中,微波法和回流法提取率明顯比冷浸法高。并且,從所用的時間看冷浸法提取時間為36h,回流法提取時間為12h,微波法提取時間為10min。從提取所用時間及操作看,微波法提取以乙醇為溶劑,因此提取成本低,并且安全快捷、無污染等多種優點。

5 結論

本研究表明:采用微波、回流和冷浸法提取,微波法具有比傳統回流提取方法更高的提取率,具有簡便、省時等特點,更安全,無污染,可替換回流提取。并且從實驗結果可看出竹節參中皂甙含量與三七中皂甙含量相差不大。因此,竹節參可作為一種新的藥用資源進行大面積的人工種植與開發利用。

[1]黃桂寬,胡細蓮,秦冰冰,等.三七莖葉皂甙提取與純化的微型實驗研究[J].廣西師范大學學報,2000,6(S1):106-107.

[2]潘俊杰,鄭琴,楊明.三七中三七總皂苷的提取、分離純化及分析方法的研究進展[J].世界科學技術-中醫藥現代化,2007,12(6):77-82.

[3]張晶,陳全成,弓曉杰,等.不同提取方法對人參皂甙甘提取率的影響[J].吉林農業大學學報,2003,25(1):71-73.