楊黃菌絲體純培養條件優化模式的研究1）

張躍新，胡偉，閆寶松，馬鳳

（黑龍江省林副特產研究所，黑龍江省非木質林產品研發重點實驗室，黑龍江 牡丹江 157011）

楊黃（PhellinusvaniniiLjup），隸屬擔子菌綱、非褶菌目、銹革孔菌科、木層孔菌屬。楊黃是兼性腐生菌，自然界中只生長在山楊（Populusdavidiana）和香楊（Populuskoreana）活立木、樹樁或倒木上。由于市場需求緊俏，產地進行掠奪性開采，目前野生資源破壞嚴重，自然恢復面臨困難，而且因其對生長環境的特定要求，現人工培育尚未取得突破性進展。楊黃生物學特性的研究顯得尤為重要。本文對楊黃純培養條件進行了優化，為楊黃生物學特性的研究打下前期基礎。

1 供試材料

供試培養基：葡萄糖20g，馬鈴薯20g，瓊脂粉20g，磷酸二氫鉀3.0g，硫酸鎂1.5g，水1000mL；

供試菌株：楊黃8號菌株（野生）。

2 試驗方法

2.1 不同碳源對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

用乳糖、木糖、可溶性淀粉、甘露糖、果糖、甘露醇、山梨醇、麥芽糖、蔗糖替代培養基中的葡萄糖，制作培養皿，每組重復5次，在28℃下暗光培養，測量菌絲生長速度及生長10天后的菌絲干重。

2.2 不同氮源對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

用麥麩、谷氨酸、硫酸銨、酵母、玉米、天門氨酸、甘氨酸、酒、豆餅粉、硝酸銨替代培養基中的馬鈴薯，制作培養皿，每組重復5次，在28℃下暗光培養，測量菌絲生長速度及生長10天后的菌絲干重。

2.3 不同無機鹽對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

用氯化鈣、硫酸銅、硫酸鋅、氯化錳替代培養基中的硫酸鎂，制作培養皿，每組重復5次，在28℃下暗光培養，測量菌絲生長速度及生長10天后的菌絲干重。

2.4 三元二次通用旋轉組合實驗設計

采用三元二次通用旋轉組合設計，以最佳碳源、最佳氮源、最佳無機鹽為因素，以菌絲干重（Y）為目標函數，三元二次通用旋轉組合試驗設計因素編碼見表1，試驗設計如表2，數據分析采用dPs軟件中的回歸分析法。

表1 編碼水平

3 結果分析

3.1 不同碳源對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

圖1 不同碳源對楊黃菌絲生長速度的影響

圖2 不同碳源對菌絲體干重的影響

由圖1可知，楊黃8號在10種培養基上均可生長，但在添加甘露糖的培養基上生長速度最快，在添加山梨醇、果糖、葡萄糖、甘露醇、可溶性淀粉的培養基上生長速度其次，在添加麥芽糖、蔗糖、木糖、乳糖的培養基上生長速度最慢；由圖2可知，楊黃8號在添加葡萄糖的培養基上菌絲干重最大，在添加甘露糖、麥芽糖的培養基上菌絲干重其次，在添加其余碳源的培養基上菌絲干重最小。綜合圖1與圖2可知，楊黃在添加甘露糖的培養基上菌絲生長速度最快，但菌絲干重不是最大；楊黃在添加葡萄糖的培養基上菌絲生長速度較快，菌絲干重最大。以菌絲干重為選擇條件，則葡萄糖為楊黃菌絲生長的最佳碳源。

3.2 不同氮源對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

圖3 不同氮源對楊黃菌絲生長速度的影響

圖4 不同氮源對菌絲體干重的影響

由圖3可知，楊黃8號在10種培養基上均可生長，但在添加天門氨酸的培養基上生長速度最快，在添加玉米、豆餅粉、谷氨酸、酵母、麥麩的培養基上生長速度其次，在添加酒、硝酸銨、硫酸銨、甘氨酸的培養基上生長速度最慢；由圖4可知，楊黃8號在添加麥麩的培養基上菌絲干重最大，在添加豆餅粉的培養基上菌絲干重其次，在添加天門氨酸的培養基上菌絲干重較添加豆餅粉的培養基上菌絲干重小，在添加其余氮源的培養基上菌絲干重最小。綜合圖3與圖4可知，楊黃的最佳氮源為麥麩，楊黃在添加麥麩的培養基上菌絲生長速度較快，菌絲干重最大。

3.3 不同無機鹽對楊黃菌絲生長速度及菌絲干重的影響

圖5 不同無機鹽對楊黃菌絲生長速度的影響

圖6 不同無機鹽對菌絲體干重的影響

由圖5可知，楊黃8號在10種培養基上均可生長，但在添加氯化錳、硫酸鎂、氯化鈣的培養基上生長速度最快，在添加硫酸鋅、硫酸銅的培養基上生長速度最慢；由圖6可知，楊黃8號在添加硫酸鎂的培養基上菌絲干重最大，在添加氯化鈣的培養基上菌絲干重其次，在添加氯化錳的培養基上菌絲干重較添加氯化鈣的培養基上菌絲干重小，在添加其余無機鹽的培養基上菌絲干重最小。綜合圖5與圖6可知，楊黃的最佳無機鹽為硫酸鎂，楊黃在添加硫酸鎂的培養基上菌絲生長速度最快，菌絲干重最大。

由試驗可知，楊黃的最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為麥麩，最佳無機鹽為硫酸鎂。

3.4 三元二次通用旋轉組合實驗結果

表2 三元二次通用旋轉組合菌絲干重

以最佳碳源、最佳氮源、最佳無機鹽為因素，X1、X2、X3分別表示葡萄糖、麥麩、硫酸鎂，以菌絲干重（Y）為目標函數，數據分析采用dPs軟件中的回歸分析法，經數據分析建立它們的關系模型：

表3 大于0.54的64個方案中各變量取值的頻率分布

表4 最高值的各個因素組合

由表3、表4可知，最佳培養基配方應為：馬鈴薯2g／100mL，瓊脂粉2g／100mL，葡萄糖3.0g／100mL，麥麩1.5g／100mL，硫酸鎂0.2g／100mL，磷酸二氫鉀0.3 g／100mL，可得楊黃菌絲體干重1.29g／100mL。

4 結論

通過不同碳源、氮源、無機鹽對楊黃菌絲體的影響實驗得到最佳碳源、氮源、無機鹽，通過三元二次通用旋轉組合實驗進行了純培養模式條件的優化實驗，得到了楊黃純培養模式條件下的最佳培養基配方，在此配方下可得楊黃菌絲體干重1.29g／100mL。

[1]胡偉，王春生，張晶.楊黃代用料栽培初探[J].中國林副特產，2007（01）.

[2]戴玉成.一種新的藥用真菌——瓦尼木層孔菌（楊黃）[J].中國食用菌，2003（05）.1）黑龍江省森林工業總局青年基金項目（sgzJQ201003）