頭孢克肟栓劑的制備及質量評價

蔣 妮，鮑 旭，高 萌，何 艷，田 舸，田 燕

(1.大連兒童醫院 藥劑科，遼寧 大連 116012；2.大連醫科大學 藥學院，遼寧 大連 116044)

頭孢克肟(Cefixime)，化學名為7{[2-氨基-4-噻唑基(羧甲氨基)]亞胺-乙?；?-氨基-3-乙烯基-8-氧-5-硫雜-卜氮雜二環[4.2.0]-2-辛烯-2-羧酸[1]，對α-溶血性鏈球菌、 溶血性鏈球菌和肺炎球菌有強大抗菌作用，是一種抗菌譜廣，抗菌作用強，血藥濃度維持時間長，對多種內酰胺酶穩定，可口服的第三代頭孢菌素類抗生素[2]。目前，頭孢克肟的劑型主要有膠囊劑、片劑、分散片、咀嚼片、顆粒劑、干混懸劑等，但藥動學數據提示口服頭孢克肟各劑型相對生物利用度差異無顯著性意義(P>0.05)[3]。

由于頭孢克肟在水中溶解度小、對胃腸道副作用較大，尤其是空腹時可引起惡心、嘔吐、腹瀉等，使其應用受到限制，為此根據肛門栓劑直腸給藥可以降低肝臟首過效應的原理研制頭孢克肟栓劑，通過改變給藥途徑的方法來降低其對胃腸道的不良反應。根據頭孢克肟本身的結構和性質，本研究采用熱熔法制備頭孢克肟栓劑，并對其進行質量評價，測定其含量、體外釋放度等，為頭孢克肟的開發和應用奠定基礎。

1 材 料

1.1 儀 器

1200型高效液相色譜儀(美國Angilent 公司)，RB-1融變時限測試儀(天津天光光學儀器有限公司)，FA1104I上皿電子天平(上海精科儀器有限公司)，501型超級恒溫水浴(上海市實驗儀器廠)，RCZ-5A智能藥物溶出儀(天津大學精密儀器廠)。

1.2 試 藥

頭孢克肟對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100610，純度：97%)，頭孢克肟(上海天寰藥業有限公司，批號：100330，純度：98%)，頭孢克肟膠囊(上海海虹實業集團巣湖今辰藥業有限公司，批號：100925，規格：100 mg/粒),聚乙二醇4000(PEG4000，國藥集團化學試劑有限公司，批號：100427)，聚乙二醇400(PEG400，國藥集團化學試劑有限公司，批號：(00330)，吐溫 80(沈陽新興試劑廠，批號：091109)，乙腈(色譜純，美國Tedia公司，批號：1009262)，磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀等試劑均為分析純。頭孢克肟栓劑(大連醫科大學藥劑學教研室自制，規格：100 mg/枚)。

1.3 測定波長的選擇

精密稱取頭孢克肟對照品適量，用流動相溶解稀釋，制成約20 μg/mL的對照品溶液，在200～400 nm范圍內掃描(見圖1)，最大吸收波長在288 nm 處，而所用輔料在此條件下無干擾，故選擇288 nm作為頭孢克肟的檢測波長。

1.4 色譜條件[4]

色譜柱為HYPERSIL C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：乙腈:0.25%四丁基氫氧化銨溶液(1∶2，取0.4 mol/L 四丁基氫氧化銨溶液25 mL，用純化水稀釋至1000 mL，用1.5 mol/L磷酸調至pH7.0)；檢測波長：288 nm；流速：1.0 mL/min；溫度：25℃。在此條件下，理論塔板數按頭孢克肟計算不低于4000。精密量取頭孢克肟對照品10 mg和頭孢克肟栓劑適量(含頭孢克肟約10 mg)，分別置50 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，按上述色譜條件，分別進樣，頭孢克肟對照品和頭孢克肟栓劑的HPLC色譜圖分別見圖2和圖3(保留時間在10.1 min左右，圖3中峰1為頭孢克肟峰)，分離度符合要求。

圖1 頭孢克肟對照品的紫外光譜圖

圖2 頭孢克肟對照品的HPLC色譜圖

圖3 頭孢克肟栓劑的HPLC色譜圖

2 方法和結果

2.1 頭孢克肟栓劑的制備

采用熱熔法，稱取PEG4000 5.5 g和PEG400 3.5 g置蒸發皿中，在水浴上加熱使全部熔化、混勻，另稱取頭孢克肟樣品1.0 g，分散于適量吐溫80中，在攪拌下加入到已制好的水溶性基質中，攪拌均勻。趁熱注入已涂好潤滑劑的栓模中，共制10枚，固化(溫度為-2℃)。脫模，用吸水紙吸去栓劑表面殘留的液體石蠟，得頭孢克肟栓劑，每枚1.0 g(規格：100 mg/枚)。

2.2 質量評價[5]

2.2.1 外 觀

按上述工藝條件制備三批栓劑(批號：20100915，20100916，20100917)，均為乳白色，外形光滑圓整，大小均勻，色澤一致，硬度適中。

2.2.2 重量差異及融變時限

按《中國藥典》2010版二部附錄規定操作，三批栓劑(批號：20100915，20100916，20100917)的重量差異分別為±1.12%、±1.51% 和±1.47%；融變時間分別為22 min 14 s、20 min 23 s和21 min 35 s，結果符合《中國藥典》規定。

2.2.3 含量測定

2.2.3.1 頭孢克肟標準曲線的繪制：精密稱取干燥至恒重的頭孢克肟對照品10 mg于10 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，得濃度為1 mg/mL的對照貯備液。精密量取頭孢克肟對照貯備液100、200、400、800、1200、1600 μL置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，配成10、20、40、80、120、160 μg/mL的系列濃度對照液，分別進樣分析，按1.4項色譜條件測定峰面積，以對照品溶液的濃度(C)為橫坐標、以峰面積(A)為縱坐標作圖，進行線性回歸，得標準曲線方程為A=4237.8C-1589.3，r=0.9996，頭孢克肟濃度在10～160 μg/mL之間,線性關系良好。

2.2.3.2 精密度試驗：精密量取頭孢克肟對照貯備液200、800、1200 μL各5份，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制備成20、80、120 μg/mL的低、中、高3個組，按2.2.3.1項下方法測定5次和每天在同一時間進樣、連續測定5 d，分別測定頭孢克肟對照貯備液的日內精密度和日間精密度(5 d)。結果日內RSD分別為1.57%、2.13%、1.96%，日間RSD分別為2.24%、2.35%、2.47%，取樣精密度良好。

2.2.3.3 重現性試驗：取同一批號的頭孢克肟栓劑(批號：20100915，200 mg/枚)5份，200 mg/份，分別置于25 mL量瓶中，加入約50℃ 60%甲醇溶液20 mL，使其溶解后再加甲醇定容至刻度，搖勻后過濾，棄去初濾液，精密量取續濾液1000 μL置于10 mL量瓶中，用流動相稀釋后按1.4項色譜條件分別進樣分析，測定峰面積A，根據標準曲線方程計算含量。測得樣品中頭孢克肟含量的RSD為1.78%，該方法重復性好。

2.2.3.4 加樣回收試驗：精密稱取同一批號的頭孢克肟栓劑(批號：20100916)9份，250 mg/份，分別置25 mL量瓶中，每3份分別精密加入1 mg/mL頭孢克肟對照貯備液500、1000、1500 μL，余下操作同2.2.3.3項。于288 nm波長處測定峰面積A，根據標準曲線方程計算含量，以測得量與加入量比較，計算回收率。結果低、中、高濃度樣品中頭孢克肟平均回收率分別為98.97%、100.35%、101.86%(RSD=1.47%)，此法用于測定樣品含量的準確度好。

2.2.3.5 穩定性試驗：分別精密稱取自制頭孢克肟栓劑(批號20100918)100、200、300 mg，按2.2.3.3項下操作，取續濾液1000 μL置于10 mL量瓶中，制備成低、中、高三個濃度的樣品溶液，分別測定0、0.5、1、2、4、6、12、24、36、48 h時的峰面積A。根據標準曲線方程計算含量，結果測得低、中、高三個濃度的RSD分別為2.10%、0.76%、0.38%，樣品溶液在48 h內穩定。

2.2.3.6 含藥量的測定：精密稱取相當于頭孢克肟約20.0 mg的頭孢克肟栓劑三批(批號：20100915，20100916，20100917)各200 mg，余下按2.2.3.3 項下操作，測定峰面積A，根據標準曲線方程計算含量。結果樣品中頭孢克肟含量平均為10.2%(RSD=1.57%，與理論含藥量10%接近)。

2.2.4 有關物質檢查

取頭孢克肟栓劑三批(批號：20100915，20100916，20100917)1000 mg各3份(每份含頭孢克肟約100 mg)，置100 mL量瓶中，加磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)溶解(必要時超聲處理使溶解完全)并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液；同法制備對照品溶液。精密量取對照品溶液20 μL，按2.2.3.3 項下操作，調節靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為記錄儀滿量程的20%。再精密量取對照品和供試品溶液各20 μL，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2.5倍。根據標準曲線方程計算各雜質的總量，結果三個批號有關物質平均含量分別為1.03%、0.87%、0.94%，符合規定。

2.2.5 溶出度的測定

按照《中國藥典》2010年版溶出度測定法規定[6]采用轉籃法，轉速為100 r/min，溫度為(37±1)℃。以pH 7.2的磷酸鹽緩沖液為溶出介質(取磷酸二氫鉀6.8 g，加水適量溶解，用1 mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH值至7.2，用純化水稀釋至1000 mL)，取頭孢克肟栓劑6枚(規格：100 mg/枚)及頭孢克肟硬膠囊6粒(規格：100 mg/粒)分別投入杯中，自樣品與介質接觸時開始記時，分別于5、10、15、30、45、60、90、120 min采樣5 mL，并立刻補充同體積等溫新鮮介質，每個取樣操作在30 s內完成，0.45 μm微孔濾膜過濾，得到溶出液樣品。分別按1.4項色譜條件進樣分析，測定峰面積，根據標準曲線方程計算含量，并用SPSS 11.5統計軟件，多組資料采用方差分析，兩組間比較采用t檢驗，結果見表1。

表1 頭孢克肟在硬膠囊劑和栓劑中的溶出度

Tab 1 Dissolution rates of Cefixime suppositories and Cefixime hard capsules

表1 頭孢克肟在硬膠囊劑和栓劑中的溶出度

1)與硬膠囊劑溶出度相比，P<0.05

時間(min)5101530456090120栓劑溶出度48.8±2.2369.2±1.2181.6±1.2290.3±1.311)95.9±1.6897.8±0.9098.2±0.8798.7±0.88硬膠囊劑溶出度43.7±2.4859.6±1.3670.5±1.4081.2±1.5982.8±1.5383.5±0.9884.2±0.9484.9±0.86

結果表明，頭孢克肟栓劑在規定介質中30 min時的體外溶出度為(90.3±1.31)%，而市售頭孢克肟硬膠囊的體外溶出度為(81.2±1.59)%，二者在30 min時的體外溶出度差異有顯著性意義(P<0.05)，結果均符合《中國藥典》2010版二部附錄規定。

3 討 論

頭孢克肟是一種抗菌譜廣、抗菌作用強、引人注目的頭孢菌素類抗生素。但是，由于其口服后對胃腸道不良反應較大，根據其結構和性質，通過改變劑型可以提高其生物利用度、降低藥物的不良反應[7,8]。

用熱熔法制備的頭孢克肟栓劑呈白色，表面光滑圓整，色澤均一，硬度較好，重量差異、融變時限均符合《中國藥典》2010版二部附錄規定[5]。

熱熔法制備栓劑是基于固體分散體的原理[9]，將藥物高度分散于藥物基質中，藥物以分子、膠態、微晶或無定形粉末等狀態存在，能大幅度減小難溶性藥物的粒度，增大其溶出面積。同時，聚乙二醇類基質水溶性較強，能將藥物表面潤濕，有利于藥物的溶出，加快了有效成分的溶出速度，提高其吸收效果。本研究采用水溶性基質，用熱熔法制備頭孢克肟栓劑，改善了藥物的溶解性能，加快其溶出速度。試驗結果表明，30 min時頭孢克肟栓劑的體外溶出度比頭孢克肟硬膠囊的體外溶出度提高約11.2%(P<0.05)，而頭孢克肟栓劑在體內的生物利用度及藥物動力學等有待于進一步的研究。

參考文獻：

[1] Rex N, Brogden-eborah M, Campoli-Richards. Cefixime: A review of its antibacterial activity, pharmacokinetic properties and therapeutic potential[J]. Drugs, 1989,8:524-550.

[2] Liu XD, Xie L, Gao JP, et al. Cefixime absorption kinetics after oral administration to humans[J]. Eur J Drug Metab Pharmacokinet,1997,22: 185-188.

[3] 張建國,王本杰,郭瑞臣,等.頭孢克肟3種劑型的人體生物等效性評價[J].中國臨床藥學雜志,2005,14(5):297-301.

[4] 畢津蓮,李湘斌.高效液相色譜法測定頭孢克肟膠囊的含量[J].中國現代醫學雜志,2008,18(21):3214-3216.

[5] 中華人民共和國藥典委員會.《中華人民共和國藥典》(二部)[S].北京:化學工業出版社,2010.附錄7-8,83-85, 87-88.

[6] 中華人民共和國藥典委員會.《中華人民共和國藥典》(二部)[S].北京:化學工業出版社,2010.184-185.

[7] 董淑英,童旭輝,李見春.頭孢克肟口腔崩解片在健康人體的生物等效性[J].中國醫院藥學雜志,2009,29(20):1739-1742.

[8] 張媚,金樂紅,唐婷.高效液相色譜法測定頭孢克肟咀嚼片的含量[J].健康研究,2011,31(1):9-11.

[9] 龍曉英,房志仲.藥劑學[M].北京:科學出版社,2009.172-173.