Wistar大鼠缺鐵性性貧血模型的建立

田婷 馮楠 胡曉梅 李鐵錚 南偉 陳根

鐵是人及動(dòng)物體必須的微量元素，鐵的缺乏會引起貧血和多系統(tǒng)功能紊亂[1]。缺鐵性貧血與消化性潰瘍、腫瘤、痔瘡等多種疾病有關(guān)，以大鼠作為模型動(dòng)物構(gòu)建的缺鐵性貧血模型被越來越多的應(yīng)用于與缺鐵有關(guān)疾病的研究。目前，雖然已有一些大鼠缺鐵性貧血模型建立成功的實(shí)驗(yàn)，但傳統(tǒng)的剪尾放血建立缺鐵性貧血模型的方法操作不便且容易引起失血反應(yīng)[2]；用低鐵飼料喂養(yǎng)大鼠建立缺鐵性貧血模型的方法簡便易行，但低鐵飼料的配制成分和工藝復(fù)雜，成本高。本實(shí)驗(yàn)研究中，配制一種配方簡單、價(jià)格低廉的低鐵飼料，喂養(yǎng)大鼠后，觀察是否出現(xiàn)缺鐵性貧血，具體內(nèi)容如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 體重（180±5）g的雌性Wistar大鼠12只（購自蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）。

1.2 低鐵飼料的配制方法 按玉米淀粉54%、奶粉（蘭州莊園乳業(yè)有限公司生產(chǎn)）40%、NaCl 1%、大豆油（金龍魚）5%[3]的比例混合，加入去離子水，制成棒狀，橫徑約15mm。置于80℃的真空干燥箱中烘烤24～30h后取出，晾干后置于干燥、室溫下保存。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的喂養(yǎng)方法 將雌性健康Wistar大鼠12只，體重（180±5）g，隨機(jī)分為缺鐵組和對照組，每組6只。缺鐵組大鼠飼喂低鐵飼料，飲蒸餾水；對照組大鼠飼喂清潔級正常飼料，飲蒸餾水。所有大鼠每3d換一次墊料，以保證大鼠不受外源微生物的感染。

1.4 大鼠實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的檢測

大鼠喂養(yǎng)1個(gè)月后，稱重。采用高氰化鐵法檢測血紅蛋白：將大鼠斷尾采血，每只大鼠采20μl的血液加入盛有5ml HiCN試劑的一次性試管中，用XK-2血紅蛋白儀（南昌新長征醫(yī)療科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)）測量血紅蛋白的濃度并記錄。大鼠斷尾采血10μl加入盛有2ml稀釋液的試管中，用毛細(xì)吸管滴加混合液于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，在光學(xué)顯微鏡下觀察并對紅細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用Excel數(shù)據(jù)庫軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對照組和缺鐵組相關(guān)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的測定結(jié)果

1個(gè)月后，大鼠缺鐵性貧血模型建立成功。在蘭州大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院分析測試中心用火焰法測得得正常清潔級飼料中鐵的含量為0.0503%，低鐵飼料中鐵含量為0.0059%，正常飼料中鐵的含量是低鐵飼料中鐵含量的8.5倍。缺鐵組大鼠的平均體重小于正常組（P＜0.05），血紅蛋白含量小于正常組（P＜0.01），紅細(xì)胞計(jì)數(shù)小于正常組（P＜0.01）。光學(xué)顯微鏡下觀察到缺鐵組紅細(xì)胞的數(shù)目明顯少于對照組。見表1。

表1 對照組和缺鐵組相關(guān)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的測定結(jié)果（±s）

表1 對照組和缺鐵組相關(guān)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的測定結(jié)果（±s）

注：與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.01。

組別 體重（g） 血紅蛋白濃度（g/L）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（×1012/L）對照組 210.40±15.63 161.80±17.15 6.32±2.06缺鐵組 138.70±19.15* 123.00±16.55** 5.15±4.06***

2.2 缺鐵性貧血大鼠攝食量和行為體態(tài)的變化

起初，缺鐵組大鼠的進(jìn)食量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于對照組大鼠的進(jìn)食量，不及1/3。隨著時(shí)間的推移，食量逐漸增加，但始終低于對照組的食量。前2周內(nèi)缺鐵組大鼠興奮不安，反應(yīng)靈敏，活動(dòng)增多。第3周開始可見明顯的背部脫毛，相互撕咬，皮毛萎縮，耳朵和腳爪蒼白,趾甲脫落，個(gè)體明顯變小，鼠體較正常組的瘦而短。在整個(gè)喂養(yǎng)過程中，未見對照組有過上述類似的表現(xiàn)。缺鐵組的糞便和尿液都為橙黃色，且其量均較對照組少，糞便顏色也較對照組干澀，臭味淡。實(shí)驗(yàn)后，用洗潔精刷洗缺鐵組的大鼠籠，籠底始終為黃色而無法洗干凈。

3 討論

缺鐵性貧血(IDA)是最常見的貧血。其發(fā)病率在經(jīng)濟(jì)不發(fā)達(dá)地區(qū)的幼兒、育齡婦女中明顯增高[4]。缺鐵性貧血的原因有：鐵的攝入量不足、吸收障礙和丟失過多。缺鐵性貧血時(shí)，細(xì)胞中含鐵酶和鐵依賴酶的活性降低，進(jìn)而影響患者的精神、行為、體力、免疫功能及患兒的生長發(fā)育和智力；缺鐵可引起粘膜組織病變和外胚葉組織營養(yǎng)障礙[5]。本實(shí)驗(yàn)的方法為鐵的攝入量不足造成的缺鐵性貧血。缺鐵性貧血的大鼠發(fā)生上述行為和體態(tài)的變化,與劉曉溪等[6]的研究結(jié)果一致；但攝食量的變化與楊真等[7]報(bào)告的研究結(jié)果不同。

本方法建立的缺鐵性貧血模型主要是由于飼料的缺鐵造成的。該飼料降低大鼠的血清鐵、血紅蛋白的速度快，效果明顯。用本法建立缺鐵性貧血?jiǎng)游锬Ｐ偷年P(guān)鍵是低鐵飼料的配方及其制作方法。本實(shí)驗(yàn)除用低鐵飼料外，同時(shí)飲蒸餾水，限制了外源性鐵的攝入。實(shí)驗(yàn)組大鼠與對照組大鼠在體重、血紅蛋白的濃度、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)等方面有著顯著的不同。我們摸索出了能使Wistar大鼠快速發(fā)生缺鐵性貧血的飼料的配方及制作方法，簡便而有效，在一般的實(shí)驗(yàn)室中就可以實(shí)現(xiàn)。另外，大鼠表現(xiàn)出來的行為和體態(tài)的變化也有助于我們判斷缺鐵性貧血。同時(shí)，該實(shí)驗(yàn)也表明體重180g左右的的雌性Wistar大鼠是構(gòu)造缺鐵性貧血模型的良好的模型動(dòng)物。雖然本實(shí)驗(yàn)的測量指標(biāo)偏少，但可用排除法確定本實(shí)驗(yàn)方法造成的貧血為缺鐵性貧血：除天竺鼠和靈長目動(dòng)物類，其他的哺乳動(dòng)物都能將葡萄糖在肝臟中轉(zhuǎn)化成維生素C,故本實(shí)驗(yàn)排除了缺乏維生素C引起的貧血；維生素B12缺乏半年后才能出現(xiàn)相應(yīng)的癥狀，而本實(shí)驗(yàn)的造模過程只有1個(gè)月的時(shí)間，故排除了維生素B12缺乏引起的巨幼紅細(xì)胞性貧血；維生素E對熱穩(wěn)定，故排除了低鐵飼料在制作過程中因高熱導(dǎo)致的維生素E缺乏引起的貧血。

在本實(shí)驗(yàn)中，我們對缺鐵性貧血大鼠糞便和尿液中的橙黃色物質(zhì)產(chǎn)生了好奇，這些物質(zhì)是糞膽素和尿膽素還是由低鐵飼料中的其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來，以及缺鐵性缺血在一定條件下能否導(dǎo)致溶血性貧血，這有待于我們做更多探討。

[1]Lozoff B, Brittenham GM.Behavioural aspects of iron deficiency[J].Pro Hematol, 1986, 14: 23-53.

[2]劉戍年.大鼠缺鐵性貧血模型的建立[J].中國病理生理雜志,1995,(4):361-362.

[3]張萍,韋娜,糜漫天,等.鐵和復(fù)合微量元素改善缺鐵性貧血的實(shí)驗(yàn)研究[J].微量元素與健康研究,2002,19(1):3-5.

[4]吳金英.182例小兒營養(yǎng)性缺鐵性貧血病因分析與預(yù)防[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2008,143:81.

[5]陸再英,鐘南山.內(nèi)科學(xué)[M].7版,北京：人民衛(wèi)生出版社,2010:571-573.

[6]劉曉溪，李潮，李昕泉.缺鐵性貧血大鼠模型建立中行為體態(tài)觀察[J].中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué),2004,13(3):273.

[7]楊真,羅海吉,盧曉翠,等.大鼠缺鐵性貧血模型建立及各項(xiàng)指察研究[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2006,6(3):284-286.