西替偽麻緩釋片在中國志愿者體內的藥代動力學研究

胡岳江，張志濤，蔣志文

(1.浙江省永康市第一人民醫院，浙江 金華 321300; 2.蚌埠醫學院藥學系，安徽 蚌埠 233030)

西替偽麻緩釋片是由西替利嗪(cetirizine)和偽麻黃堿(pseudoephedrine)組成的復方緩釋制劑，用于治療過敏性鼻炎。西替利嗪和偽麻黃堿聯合應用，療效明顯優于單獨給藥，且耐受性良好[1-3]。本品為雙層片，西替利嗪(5 mg/片)在速釋層，常規釋放;偽麻黃堿(120 mg/片)在緩釋層，緩慢釋放;這種新型制劑可有效增加臨床治療的依從性，但人體內藥動學的系統研究尚未深入進行。筆者采用液相色譜-串聯質譜法同時測定血漿中西替利嗪和偽麻黃堿的濃度，在單次口服中、高劑量和多次給藥后，對西替偽麻緩釋片在中國健康志愿者體內的藥代動力學特征進行研究，為臨床用藥提供參考依據。

1 儀器與試藥

TSQ Quantum Ultra AM型液質聯用儀(美國Thermo Finnigan公司)，ESI離子源，Xcalibur 1.1數據處理系統。西替偽麻緩釋片(批號為040618，每片含鹽酸西替利嗪5 mg、鹽酸偽麻黃堿120 mg)，鹽酸西替利嗪對照品(批號為040618)由蘇州東瑞制藥有限公司提供;鹽酸偽麻黃堿對照品(批號為1237-200002)和卡馬西平對照品(批號為0142-9503)由中國藥品生物制品檢定所提供;甲醇為色譜純，乙酸銨為分析純，水為自制重蒸水。

2 方法與結果

2.1 受試者選擇

選擇24名健康受試者，男女各半，年齡(20.6±1.8)歲，身高(164±5)cm，體重(60±7)kg，無煙酒嗜好，試驗前2周未服用任何藥物，試驗前經詢問病史、體格檢查和實驗室檢查未發現異常。試驗方案經醫學倫理委員會批準，所有受試者均自愿簽署知情同意書。

2.2 樣品采集

單次給藥∶設中、高劑量試驗組，選定的24名健康志愿者隨機入組，每組12名，采用平行試驗設計，分別口服樣品1片或2片。服藥前受試者禁食過夜(10 h以上)，于次日早晨7:30空腹給予樣品，用 200 mL溫開水送服。分別于服藥前和服藥后0.5，1，1.5，2，2.5，3，4，5，6，8，10，12，14，16，24，36 h 時從肘靜脈采血 3 mL，置含有肝素的離心管中，立即離心，分離出血漿，置-20℃冰箱中保存至測定。

多次給藥∶單次給藥結束1周后，中劑量組12名受試者經體格檢查證明正常，繼續進行多次連續給藥研究。志愿者試驗期間統一入住Ⅰ期病房，于每日7:30和19:30，分別口服樣品1片，服藥后2 h可適量飲水，4 h統一進清淡飲食，連續給藥5 d。從第3天起，于每日清晨服藥前采集血樣，連續3次，確認達到穩態，于次日早上7:30服藥后從肘靜脈采血3 mL，取血時間同單次給藥。血樣置含有肝素的離心管中，離心，取血漿于-20℃儲存待測。

2.3 血漿樣品檢測

2.3.1 色譜與質譜條件

色譜柱∶Phenomenex苯基柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相∶甲醇-0.01 mol/L乙酸銨溶液(75∶25);流速∶1.0 mL/min;柱溫∶25℃;電噴霧離子化正離子SRM方式檢測，噴霧電壓為5.0 kV，毛細管溫度為350℃，源內碰撞電壓(CID)為10 V，霧化氣流速為35 mL/min。用于定量的離子分別為西替利嗪 m/z∶母離子(M+H+)388.9→子離子 200.9;偽麻黃堿 m/z∶母離子(M+H+)166.0→子離子 147.9;內標卡馬西平 m/z∶母離子(M+H+)237.0→子離子194.0。在此條件下，西替利嗪、偽麻黃堿與內標及血漿中內源性雜質分離良好(圖1)。

2.3.2 樣品處理

取血漿0.2 mL，置離心管中，加入1 000 μg/L內標溶液20 μL，混勻;加入甲醇0.8 mL，渦旋混勻，以12 000 r/min轉速離心10 min，吸取上清液20 μL進樣。

2.3.3 方法學考察

標準曲線∶分別配制含西替利嗪 0.4，2.0，4.0，8.0，20.0，40.0，80.0，150.0，300.0，600.0 μg/L，含偽麻黃堿 1，5，10，20，50，100，200，400，800，1 600 μg/L 的系列血漿樣品，按 2.3.2 項操作并測定。以待測物與內標的峰面積比值(R)對血藥濃度(C)用加權法(W=1/C2)進行線性回歸，得西利替嗪和偽麻黃堿的回歸方程分別為 R=0.004 95C+0.000666(r=0.999)和 R=0.002 60C-0.000 013(r=0.999)。

精密度與準確度∶分別配制含西替利嗪2，40，300 μg/L和含偽麻黃堿 5，100，800 μg/L 的血漿樣品(低、中、高質量濃度)，按2.3.2項下操作，記錄色譜圖，計算西替利嗪、偽麻黃堿峰面積和內標峰面積的比值 R，代入當天的標準曲線中求得實測質量濃度，由實測質量濃度計算批內與批間精密度。結果見表1。

回收率∶分別取含西替利嗪和偽麻黃堿高、中、低質量濃度的樣品，每個質量濃度進行5個樣本分析。同時另取相應標準溶液和內標溶液，以空白血漿經甲醇沉淀蛋白處理后的上清液稀釋至相應濃度，渦旋混勻后進樣分析，以每個質量濃度兩種處理方法的峰面積比值計算回收率。結果見表1。

表1 精密度與準確度、回收率試驗結果(n=15)

穩定性∶取空白血漿0.2 mL，分別配制高、中、低3個質量濃度的樣品，考察西替利嗪和偽麻黃堿血漿樣品室溫放置12 h、-20℃放置1周、經歷3次冷凍解凍循環以及經沉淀蛋白處理后的血漿樣品室溫放置5 h的穩定性，測得值與新配制的QC樣品值進行比較。結果顯示 RSD均小于15%，表明西替利嗪和偽麻黃堿在上述條件下均穩定。

2.4 血藥濃度－時間曲線

采用液相色譜-串聯質譜法分別測定口服西替偽麻緩釋片1片、2片和每天2片連續給藥5 d后各組的平均血藥濃度-時間曲線，見圖2。

圖2 口服給藥后平均血藥濃度-時間曲線(n=12)

2.5 數據處理與藥代動力學參數

將志愿者單次給藥和多次給藥后的血藥濃度列表，計算均值及標準差，繪制平均血藥濃度-時間曲線，計算主要藥代動力學參數。峰濃度(Cmax)和達峰時間(Tmax)用實測值表示;藥時曲線下面積 AUCss，AUC0－t用梯形法計算，AUC0-∞按公式計算，AUC0-∞=AUC0－t+Ct/λz，其中 t是最后一次可測濃度的取樣時間，Ct是測定的最后時間點的血藥濃度，λz是末端消除速率常數;平均穩態血藥濃度(Cav)可按公式計算，Cav=AUCss/τ，其中 τ是給藥間隔時間(12 h);消除速率常數(ke)和半衰期(t1/2)、清除率(CL)、表觀分布容積(Vd)等其他藥代動力學參數均由DAS 2.0軟件處理而得。采用方差分析比較多次給藥組與單次給藥組藥代動力學參數，評價西替利嗪和偽麻黃堿在該制劑中的藥代動力學特征。結果見表2。多次給藥達穩態后，西替利嗪和偽麻黃堿的 Cav分別為(135.6±23.4)μg/L和(417.9±126.0)μg/L，穩態血藥濃度-時間曲線下面積(AUCss)分別為(1 626.7±280.8)μg·h/L和(5 015.0±1 511.8)μg·h/L，蓄積系數(R)分別為 1.3±0.1和 1.2±0.1，波動度(DF)分別為1.3±0.2和0.7±0.2。

3 討論

目前，同時測定人血漿中西替利嗪和偽麻黃堿的方法報道較少，最近的兩篇文獻[4-5]報道了直接沉淀蛋白后的液相色譜-串聯質譜法，但文獻[4]中樣品分析時間長達12 min，而文獻[5]中采用梯度洗脫影響了方法的穩定性和重現性。本試驗建立了液相色譜-串聯質譜法同時測定受試者服用西替偽麻緩釋片后不同時間血漿中西替利嗪和偽麻黃堿的質量濃度，與已報道方法[4-5]相比，靈敏度更高，西替利嗪和偽麻黃堿的最低定量質量濃度分別為0.4 μg/L和1 μg/L，并且將分析時間縮短為6 min左右，提高了分析效率。

表2 口服給藥后西替利嗪和偽麻黃堿的藥代動力學參數(X ± s，n=12)

本品臨床用量為每天2次、每次1片，其中西替利嗪在速釋層，偽麻黃堿在緩釋層，如拆分后給藥，影響緩釋部分的吸收特征，不易設計低于臨床劑量的劑量組。因此，本臨床試驗方案中單次給藥設中、高劑量試驗組，分別口服西替偽麻緩釋片1片或2片。結果表明，單次給藥后西替利嗪和偽麻黃堿的 Cmax和 AUC隨給藥劑量的增加而成比例增大，ke，t1/2，Tmax，CL等經DAS 2.0軟件分析，差異無統計學意義(P＞0.05)。多次給藥與單次給藥(中劑量組)比較，西替利嗪和偽麻黃堿的主要藥代動力學參數基本一致，蓄積系數 R接近1，說明藥物在健康受試者體內基本無蓄積現象。與鹽酸偽麻黃堿的普通復方制劑[6-7]的藥代動力學參數比較，受試制劑中鹽酸偽麻黃堿的 Tmax延長，Cmax降低，波動度 DF減小，表明西替偽麻緩釋片中偽麻黃堿具有明顯的緩釋特征。

毛金銀等[8]曾報道，進食高脂肪、高蛋白食物會影響西替利嗪的 Cmax和 Tmax，而對偽麻黃堿的藥代動力學參數基本無影響。本試驗單、多次給藥所得的西替利嗪藥代動力學參數與該文獻中禁食狀態下的參數基本一致，而偽麻黃堿的 Cmax和 AUC偏大，可能與制劑的制備技術有關。

西替偽麻緩釋片的常見不良反應為口干、失眠、頭痛、嗜睡、無力和神經過敏[3]。整個試驗期間，24名受試者無一例因不良反應終止試驗，所有的實驗室及心電圖檢查均無異常，說明受試制劑在試驗劑量下具有良好的耐受性和安全性。

[1]Bertrand B，Jamart J，Marchal JL，et al.Cetirizine and pseudoephedrine retard alone and in the treatmentofperennialallergic rhinitis: a double-blind multicentre study[J].Rhinology，1996，34(2):91-96.

[2]Nathan RA，Finnaf JR，Laforce C，et al.Comparison of cetirizine-pseudoephedrine and placebo in patients with seasonal allergic rhinitis and concomitant mild-to-moderate asthma:randomized，double-blind study[J].Ann Allergy Asthma Immunol，2006，97(3):389-396.

[3]Wellington K，Jarvis B.Cetirizine/pseudoephedrine[J].Drugs，2001，61(15):2 231-2 240.

[4]Ma M，Feng F，Sheng Y，et al.Development and evaluation of an efficient HPLC/MS/MS method for the simultaneous determination of pseudoephedrine and cetirizine in human plasma:application to phase-Ⅰpharmacokinetic study[J].J Chromatogr B，2007，846(1-2):105-111.

[5]陳偉力，戴佩芳，儲楠楠，等.單劑量和多劑量口服西替偽麻緩釋片的人體藥動學[J].中國新藥雜志，2008，17(6):518-522.

[6]韓 瑩，陳笑艷，謝智勇，等.液相色譜-串聯質譜法同時測定人血漿中偽麻黃堿和苯海拉明[J].藥學學報，2003，38(1):67-70.

[7]任 爽，陳笑艷，段小濤，等.高靈敏度LC/MS/MS法同時測定人血漿中麻黃堿和氯苯那敏[J].藥學學報，2006，41(2):188-192.

[8]毛金銀，丁 黎，徐貴麗，等.西嗪偽麻緩釋片人體藥動學研究[J].中國藥學雜志，2007，42(15):1 168-1 174.