基質金屬蛋白酶MMP-2在口腔鱗癌中的表達及意義

于 艷,張安玲

(1.吉林醫藥學院附屬醫院口腔科,吉林吉林市132011;2.吉林大學第四醫院口腔科)

口腔鱗狀細胞癌其患病率和死亡率較高,而浸潤和轉移是造成其不良預后的主要因素,早期診斷非常重要。研究表明[1],基質金屬蛋白酶2(MMP-2)在腫瘤的侵襲轉移中發揮重要作用。本研究對50例口腔鱗癌中MMP-2表達進行研究,為臨床早期診斷提供依據。

1 材料和方法

1.1 一般資料

收集2008年1月至2010年1月在吉林醫藥學院附屬醫院口腔科手術切除經病理診斷確診的口腔鱗狀細胞癌歸檔蠟塊50例,男28例,女22例,具有完整的病史、病理數據,術前均未接受過放化療治療。患者年齡38-80歲,平均年齡45.5歲。經頸淋巴結清掃術證實伴淋巴結轉移者24例,無淋巴結轉移者26例;按TNM分期,Ⅰ+Ⅱ期患者20例,Ⅲ+Ⅳ期患者30例。鱗癌分化程度:低分化10例,中分化25例,高分化15例。正常口腔黏膜組織標本20例做對照(經H E染色證實)。

1.2 實驗方法

將10%福爾馬林固定、石蠟包埋的組織蠟塊進行常規切片,經免疫組化染色,石蠟切片脫蠟水化,根據每一種抗體的要求,對組織抗原進行相應的修復。將切片浸入0.01 M(pH6.0)枸櫞酸鹽緩沖液,微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10 min后,反復1-2次,冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1-2次。用已知的陽性的口腔癌切片作陽性對照,用已知的陰性的口腔癌切片作陰性對照,以PBS緩沖液代替一抗作空白對照。

1.3 結果判定標準

由兩位病理醫師對免疫組化染色分別進行半定量計數。MMP-2蛋白的陽性結果判定:MMP-2蛋白主要表達在腫瘤細胞膜或胞漿,呈棕黃色顆粒,以染色強度與陽性細胞的百分比乘積作為半定量標準[2]。染色強度:未著色0分,淡黃色1分,棕黃色2分,棕褐色3分;陽性細胞百分數＜5%為0分,5%-25%為1分,26%-50%為2分,＞50%為3分,二者乘積＞l視為陽性。

1.4 統計學分析

用SPSS 17.0統計分析軟件進行分析,口腔鱗癌MMP-2的表達與臨床病理特征的關系采用 χ2檢驗,統計學檢驗以P＜0.05為差異有顯著性。

2 結果

MMP-2在口腔鱗癌組織中呈高表達,陽性表達率為66.00%,口腔正常黏膜組織的陽性表達率為25.00%,二者相比有顯著差異(P＜0.01);腫瘤不同分化程度間MMP-2表達率無顯著性差異(P＞0.05);在TNMⅠ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期的表達率無顯著性差異(P＞0.05);MMP-2的表達與淋巴結轉移密切相關,有淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組MMP-2陽性表達率相比有顯著性差異(P＜0.05)。(詳見表1)。

表1 MMP-2在口腔鱗癌中的表達與臨床病理特征之間的關系

3 討論

口腔鱗狀細胞癌的生長、侵襲和轉移是一個多階段、多水平、多因素的過程,關鍵是降解腫瘤周圍的基質。實驗證明[3],瘤細胞侵襲轉移能力與其誘導產生蛋白酶、降解細胞外基質、基底膜的能力密切相關。首先是腫瘤細胞降解細胞外基質和基底膜,其主要步驟包括瘤細胞穿過ECM屏障、血管壁的基底膜及穿出血管壁進入宿主微循環。對ECM的降解必須有蛋白水解酶的激活和參與,ECM降解酶主要分為三大類[4]:絲蛋白酶、半胱氨酸酶、MMPs,其中MMPs是近年來在研究細胞外基質合成與降解平衡的一組酶,幾乎能降解細胞外所有成分 ,在轉移癌中明顯高表達。基質金屬蛋白-2(MMP-2)基因位于人類染色體16q21,由13個外顯子和12個內含子組成,結構基因總長度為27kb,MMP-2是一種非糖化的明膠酶,分子量為72 KD,屬于膜型基質金屬蛋白酶類,是MMPs家族中的一個亞家族。在腫瘤細胞侵襲過程中,活化的MMP-2是定位細胞穿透基質的突出部位,具有“鉆頭”樣作用[5]。存在于腫瘤細胞表面的MMP-2能使這些腫瘤細胞降解其下面的基底膜,穿透基質并發生轉移。大量實驗證明[6]MMP-2在人類多數腫瘤組織及其轉移灶中高度表達,并且在癌細胞脫落、游走、浸潤轉移過程中起著相當重要的作用。本研究發現口腔鱗癌織中MMP-2表達率66.00%,顯著高于正常口腔黏膜組織,癌巢周圍的腫瘤細胞陽性表達水平更高,說明癌巢周邊的腫瘤細胞可以分泌更多的MMP-2。本實驗結果還顯示,在口腔鱗癌組織中MMP-2高表達與口腔鱗癌病理分級和臨床分期無關,在淋巴結轉移陽性組中,MMP-2的陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移組,提示MMP-2在口腔鱗癌的浸潤轉移可能起著促進作用。

綜上所述,基質金屬蛋白-2與口腔鱗癌的侵襲轉移的關系,已為我們認識腫瘤進程的機理提供了有力的依據,隨著這一領域研究的深入,將為臨床腫瘤的診斷預防提供可信的指標,也為臨床治療腫瘤提供新的策略與方向,為口腔鱗癌早期診斷、治療及預后的評價提供重要的幫助。

[1]邱蔚六.頜面外科學[M].第 4版.北京:人民衛生出版社,1999:266.

[2]許良中,揚文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準[J].中國癌癥雜志,1996,6(4):229.

[3]Murray GI.Matrix metaloproteinases:a multi-functional group ofmolecules[J].J Pathol,2001,195(2):135.

[4]Jouce ER.Matrix Metalloproteinases.Angiogenesis,and Cancer Clinical[J].Cancer Research,2003:549.

[5]Fang J,Shing Y,Wienderschain D,et al.Matrix metalloproteinase-2 is required for the swich to the angiogenic phenotype in a tumormodel[J].Proc Natl Acad Sci USA,2000,97(21):3884.

[6]張 鋒,謝志堅,宋 恩,等.口腔鱗狀細胞癌細胞基質金屬蛋白酶2表達與頸淋巴結微轉移的關系[J].口腔醫學,2008,24(01):15.