原發(fā)性肝癌患者血清中Glypcian-3檢測及與AFP聯(lián)合試驗的診斷價值

王麗麗,王立群,高 歌

(吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院,吉林長春130033)

本文通過檢測原發(fā)性肝癌(PHC)、肝硬化(LC)和正常對照組血清中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(Glypican-3)蛋白,探討血清Glypican-3檢測能否作為滿意的PHC腫瘤標記物以及與AFP聯(lián)合檢測的診斷價值,為今后PHC早期臨床診斷提供一些幫助。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院 2006年 3月-2008年3月,門診和住院收治的PHC患者共64例為肝癌組,其中男54例,女10例。年齡24-81歲,平均58.06±12.13歲。所有的PHC患者的診斷符合2001年9月中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會修訂的《原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標準》,且經(jīng)病理證實。其中Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期分別為6例(9.38%)、28例(43.75%)、26例(40.63%)、4例(6.25%);伴門脈癌栓26例(40.63%);腫瘤直徑≥5 者 28例(43.75%);癌結(jié)節(jié) 2個以上者24例(37.5%);肝功能狀況采用Child-pugh分級法:A級22例(34.38%)、B級 14例(21.88%)、C級 28例(12.50%)。肝硬化組選取同期收治的LC患者共63例,其中男45例,女18例。年齡24-80歲,平均53.92±11.67歲。診斷符合2000年中華醫(yī)學會西安會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》標準。健康對照組為健康體檢者共54例,其中男41例,女13例。年齡35-79歲,平均54.17±12.67歲。三組患者在性別、年齡等一般資料比較無顯著性差異。

1.2 標本采集

所有患者留取清晨空腹12小時肘靜脈血3 ml共兩管,即刻于 4℃、3 000 r/ml離心15 min,分離血清0.5-1 ml置Ependorff管分裝,-20℃冰箱中冰凍待用,全部標本于實驗時一批測定。

1.3 主要試劑及儀器

Glypican-3應用美國寶特公司生產(chǎn)的ELX-800全自動酶標儀檢測,試劑盒購自美國ADL公司。AFP應用美國雅培公司生產(chǎn)的AXSYM全自動免疫分析儀,試劑盒購自美國雅培公司。

1.4 實驗方法

Glypican-3采用酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測。AFP采用微粒子酶免化學發(fā)光分析法檢測。嚴格按照試劑盒說明書進行檢測。

1.5 結(jié)果判斷

腫瘤標志物陽性標準分別以試劑盒推薦的臨界參考值數(shù)值為準。Glypican-3＞80 ng/ml為陽性;AFP ＞20 μ g/ml為陽性。

1.6 統(tǒng)計學處理

應用SPSS 10.0軟件包進行統(tǒng)計分析,GPC3、AFP檢測數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x—±s)表示,陽性率的比較用 χ2檢驗,PHC與對照組組間均數(shù)比較用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 原發(fā)性肝癌、肝硬化組及正常對照組血清GPC3、AFP 檢測結(jié)果

見表1。

表1 三組GPC3、AFP檢測結(jié)果(±s)

表1 三組GPC3、AFP檢測結(jié)果(±s)

★與對照組比較 P＜0.01;※與LC組比較 P＜0.01

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2.2 GPC3、AFP在PHC中的檢出率比較

見表2。

表2 GPC3、AFP在三組中檢測陽性率的比較

2.3 不同臨床參數(shù)的外周血GPC3的表達

將64例PHC患者按性別、年齡、臨床TNM分期、腫瘤直徑、癌結(jié)節(jié)數(shù)目、有無門脈癌栓及肝功能分級分組,其血清GPC3陽性檢測率見表3。

64例PHC 患者中AFP陰性的(AFP＜20 μ g/ml)患者數(shù)為17例,其中有13例GPC3為陽性,占AFP陰性數(shù)的76.47%。在AFP陽性與陰性不同表達時GPC3陽性率的比較,差異無顯著性(P＞0.05)。血清AFP ＞200μ g/ml組(21/28,75.00%)與血清 AFP20-200 μ g/ml組(14/19,73.68%)的 PHC患者外周血GPC3檢出率與血清AFP＜20 μ g/ml組比較,差異均無顯著性(P＞0.05)。

表3 不同臨床參數(shù)的患者外周血GPC3的表達

2.4 GPC3與AFP聯(lián)合檢測對PHC診斷價值

單項檢測GPC3的敏感性為75.00%,特異性為100%,漏診率為25.00%,AFP的敏感性為73.43%,特異性為92.16%,漏診率為26.57%。兩者比較,差異無顯著性(P＞0.05)。二者聯(lián)合檢測,可使敏感性提高到93.75%,漏診率降至6.25%,與GPC3、AFP單獨檢測相比,差異有顯著性(P＜0.05)。見表4。

表4 GPC3與AFP聯(lián)檢對PHC診斷價值的比較

3 討論

原發(fā)性肝癌(PHC)是一種常見、多發(fā)、死亡率高的惡性腫瘤之一。目前PHC的診斷主要依靠影像學的發(fā)現(xiàn)和血清腫瘤標志物(TM)的檢測。PHC標志物分析有助于PHC早期診斷、療效觀察、術(shù)后隨訪及復發(fā)或轉(zhuǎn)移監(jiān)測,為早期診斷惡性腫瘤提供特異的科學依據(jù)。因此,希望找到一種特異性強,敏感度高的TM。由于腫瘤標志物只有相對特異性,大多數(shù)項目缺乏定位診斷價值,單一的腫瘤標志物作為診斷PHC的指標均有不同程度的局限性。

Capurro和Nakatsura等[1,2]在應用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)方法檢測到PHC患者血清中的Glypican-3,發(fā)現(xiàn)陽性率高,capurro報道的陽性有 53%(18/34),Nakatsura報道有40%(16/40),而在肝炎合并肝硬化患者血清中Capurro檢測到1例陽性(共20例),正常人血清中未檢測到。Yamauchi等[3]進一步證實了Glypican-3在PHC組織中的表達同基因水平相一致,在非癌肝組織中同樣沒有表達或表達量極低。這與本試驗得出的結(jié)論相一致。而Capurro在肝炎合并肝硬化患者血清中檢測到1例陽性,在隨訪時發(fā)現(xiàn)該患者發(fā)展為PHC,說明Glypican-3可用于PHC的早期診斷,有助于鑒別良、惡性肝病。因此,蛋白印跡、酶聯(lián)免疫吸附法研究表明Glypican-3是一個良好的PHC 血清學標記物[1、2、4]。

Capurro M[2]和Filmus J[5]分別分析比較了PHC病人血清中Glypican-3和AFP的表達,結(jié)果顯示在同一患者血清中兩者的表達沒有相關(guān)性,Glypican-3mRNA在小肝癌檢出率明顯比AFPmRNA和血清中的AFP高[6]。研究表明,Glypican-3在AFP陰性的PHC中有較高的表達[7],與我們的結(jié)果相一致,提示Glypican-3可提高AFP陰性PHC患者的診斷率。

我們的研究結(jié)果顯示:Glypican-3蛋白表達與病理分級有顯著相關(guān)性(P＜0.05),而與腫瘤直徑無明顯相關(guān)性,這與國外報道相一致[8],提示Glypican-3蛋白作為一個特異性的腫瘤標記物,可能在細胞癌變的初始即有穩(wěn)定的表達,發(fā)生于PHC的早期,檢測血液中的Glypican-3的表達對于預測腫瘤的惡性程度、病情輕重及預后有重要價值。由此我們認為檢測Glypican-3可作為診斷PHC的腫瘤特異性標志物。

本實驗單獨檢測Glypican-3的敏感性為75.0%,漏診率為25.0%,AFP的敏感性為73.4%,漏診率為26.6%。兩者比較,無顯著性差異。表明Glypican-3與AFP在PHC中表達無相關(guān)性。AFP陰性PHC患者血清有較高的Glypican-3檢出率。Glypican-3對AFP陰性及低濃度的原發(fā)性肝癌的篩選均有一定的臨床診斷和鑒別診斷價值,有助于提高原發(fā)性肝癌的早期診斷率,減少漏診。二者聯(lián)合檢測,可使敏感性提高到93.8%,漏診率降至6.2%,我們認為若采用Glypican-3作為PHC血清標志物與AFP聯(lián)合檢測用于臨床,可更進一步提高PHC診斷的陽性率,尤其是AFP陰性患者的診斷率。Glypican-3、AFP可以起到較好的互補作用,是解決AFP假陽性和假陰性問題的有效途徑,是PHC血清學診斷方法發(fā)展的必然趨勢。特別是在當前國內(nèi)PHC有上升趨勢,早期、快速、準確的篩查發(fā)現(xiàn)PHC,這一方法具有重要價值。

為了提高PHC的診斷靈敏度、準確性和鑒別診斷價值,減少漏診率,建議采用Glypican-3、AFP聯(lián)合檢測。

[1]Nakatsura T,Yoshitake Y,Senju S,et al.Glypican-3,overexpressed Specifically in human hepatocellular carcinoma,is a novel tumor marker[J].Biochem Biophys Res Commun,2003,306:16.

[2]CapurroM,Wanless IR,Sherman M,et al.Glyp ican23:a novelserum and histochemical marker for hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterology,2003,125:89.

[3]Yamauchi N,Watanabe A,Hishinuman M,et al.The glypican 3 oncofetal protein is a promising diagnostic markerforhepetocellularcarcinoma[J].Mod Pathol,2005,18(12):1591.

[4]Capurro M,Wanless IR,Sherman M,et al.Glypican-3:a novel-serum and histochemical marker for hepatocellular carcinoma[J].Gastroenterology,2003,125:89.

[5]Filmus J,Capurro M.Glypican-3 and alphafetoprotein as diagnostic tests for hepatocellular carcinoma[J].Mol Diagn,2004,8(4):207.

[6]Hsu HC,Cheng W,Lai PL.Cloning and expression of a developmentally regulated transcript MXR7 in hepatocellular carcinoma:biological significanceand temporospatial distribu-tion[J].Cancer Res,1997,57:5179.

[7]Debra L,ZyngerMD,Anita Gupta MD,et al.Expression of glypican-3 in hepatoblastoma:an immunohistochemical study of 65 cases[J].Human Patho-logy,2008,39:224.

[8]Franc?oise Degos MD,et al.Glypican-3 expression in hepatocellular tumors:diagnostic value forpreneoplastic lesions and hepatocellularcarcinomas[J].Human Pathology 2006,37:1435.