老年高血壓病患者心房顫動(dòng)易感性與C-反應(yīng)蛋白-717A/G多態(tài)性的關(guān)系

李 靜,高淑萍,石桂良,姜敏輝,鄧新桃,朱健華,潘 閩*

(1.南通大學(xué)附屬醫(yī)院 老年醫(yī)學(xué)科,江蘇 南通226001;2.寧夏人民醫(yī)院 心內(nèi)科;3.興化市人民醫(yī)院心內(nèi)科;4.南通大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科)

心房顫動(dòng)(atrial fibrillation)是臨床最常見(jiàn)的心律失常。與竇性心律相比,房顫患者的卒中風(fēng)險(xiǎn)增加6倍,死亡風(fēng)險(xiǎn)增加2倍[1]。高血壓病是與房顫最相關(guān)的心血管疾病[2]。新近的研究顯示,炎癥可能參與了房顫的發(fā)生發(fā)展,房顫患者炎性標(biāo)記物水平顯著升高,而應(yīng)用抗炎藥物如他汀等可明顯降低房顫的方生[3]。本文研究 C-反應(yīng)蛋白(CRP)-717A/G多態(tài)性(rs2794521)與老年高血壓病患者心房顫動(dòng)的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 一般資料

病例選自南通大學(xué)附屬醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)科及心內(nèi)科門診及住院的老年高血壓病患者169例。高血壓病的診斷標(biāo)準(zhǔn)按照J(rèn)NC-7。分為房顫組75例,房顫的診斷按照2006年ACC/A HA/ECS制定統(tǒng)一的房顫命名和分類方法;對(duì)照組94例,經(jīng)詳細(xì)的詢問(wèn)病史、體格檢查、心電圖檢測(cè)證實(shí)既往無(wú)房顫發(fā)作史的竇性心律者。并排除并發(fā)感染或非感染性炎癥性疾病、嚴(yán)重肝腎功能不全、腫瘤或免疫系統(tǒng)疾病、急性冠狀動(dòng)脈綜合征等其它引起CRP升高者。入選者均為無(wú)血緣關(guān)系的漢族人。2組的一般資料見(jiàn)表1。房顫組hs-CRP水平及左心房直徑顯著高于對(duì)照組。

表1 兩組一般資料比較

1.2 研究方法

1.2.1 CRP-717A/G多態(tài)性檢測(cè) 取EDTA-Na2抗凝外周靜脈血,RBC裂解液裂解后分離得到白細(xì)胞,改良KI法抽提DNA。PCR引物參照文獻(xiàn)[4]由上海生工公司合成。上、下游引物序列分別為:5′-GACTCCTGCCTGAAGCTTTACATA-3′和 5′-ATACATGTGCCATGCTGGTGTG-3′。PCR 反應(yīng)體系為 50 μ l,含模板DNA 100 ng,dNTPS各0.2 mmol/L,引物各0.5 pmol/L,10 ×buffer 5 μ l,MgCl21.5 mmol/L,Taq DNA聚合酶2 U。經(jīng)94℃5 min預(yù)變性后,94℃60 s,62℃30 s,72℃45 s共30個(gè)循環(huán),最后 72℃延伸8分鐘。限制性酶切反應(yīng)在30 μ l體系中進(jìn)行,含PCR反應(yīng)產(chǎn)物10 μ l,Bsh1236Ⅰ限制性內(nèi)切酶2 U,10×buffer 3.0 μ l,37℃酶切16 h。3%瓊脂糖凝膠電泳分離酶切產(chǎn)物,溴乙錠染色后紫外燈下觀察結(jié)果。

1.2.2 生化指標(biāo)檢測(cè) 血清總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)及甘油三酯(TG)的檢測(cè)用標(biāo)準(zhǔn)酶比色法(Randox公司),血清高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)用乳膠凝集法(華拓公司)。檢測(cè)在日立7600全自動(dòng)生化分析儀完成。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

基因頻率用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算,研究對(duì)象與Hardy-Weinberg平衡的符合程度用 χ2檢驗(yàn),組間基因型及等位基因頻率比較用 χ2檢驗(yàn);不同基因型間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。hs-CRP呈偏態(tài)分布,將其轉(zhuǎn)化為對(duì)數(shù)后行t檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)處理由STATA8.0計(jì)算機(jī)軟件完成。

2 結(jié)果

2.1 兩組基因型及等位基因頻率

兩組基因型及等位基因頻率分布見(jiàn)表2。經(jīng) χ2檢驗(yàn),均符合 Hardy-Weinberg平衡(房顫組 χ2=0.001 8,P=0.966 4;對(duì)照組 χ2=0.288 9,P=0.590 9)。由于2組GG基因型頻率均較低(房顫組1例,對(duì)照組3例),故將GA及GG合為一組。房顫組AA基因型頻率顯著高于對(duì)照組(χ2=5.005 6,P=0.025 3),A等位基因頻率也顯著高于對(duì)照組(χ2=4.828 2,P=0.028 0)。

表2 兩組基因型及等位基因頻率

2.2 兩組不同基因型臨床參數(shù)比較

兩組不同基因型臨床參數(shù)比較見(jiàn)表3。無(wú)論是房顫組還是對(duì)照組,均未發(fā)現(xiàn)AA/GA+GG基因型在年齡、性別、血壓水平、血脂參數(shù)以及射血分?jǐn)?shù)間存在顯著差異。同樣,2組也均未發(fā)現(xiàn)基因型對(duì)hs-CRP、左心房直徑有影響(P均＞0.05)。

表3 兩組不同基因型臨床參數(shù)比較

3 討論

近年來(lái)的研究顯示,房顫存在著家族聚集性及易感性。家族中有房顫者,其他成員發(fā)展為房顫的風(fēng)險(xiǎn)增加1.8倍[5]。鉀離子通道的變異與家族性房顫相關(guān),但在散發(fā)性房顫患者中,僅少部分與其相關(guān)[6]。此外,雖然既往研究識(shí)別了多種房顫的危險(xiǎn)因素,但仍有眾多具有這些危險(xiǎn)因素的患者并不發(fā)展為房顫[7]。這些均表明,遺傳因素參與了房顫的發(fā)生發(fā)展。

高血壓病是與房顫最相關(guān)的心血管疾病[2],然而,其確切機(jī)制目前知之甚少。共入選5806例65歲以上老年人,隨訪(6.9±1.6)年的大規(guī)模、前瞻性隊(duì)列研究發(fā)現(xiàn):基線CRP水平可預(yù)測(cè)房顫發(fā)生的危險(xiǎn)性[8]。本文也發(fā)現(xiàn),房顫組患者h(yuǎn)s-CRP水平顯著高于對(duì)照組。兩組的基因型及等位基因比較發(fā)現(xiàn),房顫組AA基因型及A等位基因頻率也顯著高于對(duì)照組。提示hs-CRP水平及A等位基因與老年高血壓病患者房顫發(fā)生相關(guān)。

CRP基因-717A/G多態(tài)位點(diǎn)位于CRP基因啟動(dòng)區(qū),因而我們進(jìn)一步研究了該多態(tài)位點(diǎn)與hs-CRP水平的關(guān)系。但無(wú)論是房顫組還是對(duì)照組,均未發(fā)現(xiàn)-717A/G多態(tài)位點(diǎn)與hs-CRP水平相關(guān)。這一結(jié)果與既往的一些研究一致[4,9]。雖然有研究顯示,遺傳因素對(duì)血清CRP水平發(fā)揮了35%-40%的作用[10],但CRP基因多態(tài)性與血清CRP水平之間關(guān)系的研究結(jié)果并不一致[4,11]。其原因可能與年齡、性別、吸煙、臨床治療情況等混淆因子弱化了CRP基因的表型作用有關(guān),也可能與多數(shù)研究樣本量太小有關(guān)。此外,其它一些炎性因子如白細(xì)胞介素-6基因啟動(dòng)區(qū)的多態(tài)位點(diǎn)也可影響血清CRP水平[12]。

本文結(jié)果表明,老年高血壓病合并房顫患者h(yuǎn)s-CRP水平顯著升高,CRP-717 A等位基因與房顫易感性相關(guān)。然而,這一結(jié)論尚需在不同種族及大樣本人群研究中進(jìn)一步確認(rèn)。CRP基因-717A/G多態(tài)性對(duì)房顫患者炎癥狀態(tài)作用的確切機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

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