HPLC法測(cè)定麥冬中沿階草酮甲的含量

侯浣波 周慧 余萍 曾品濤 鄭一敏

（1四川省第五人民醫(yī)院，四川 成都 610031；2重慶理工大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，重慶400050；3重慶市現(xiàn)代中藥制藥工程技術(shù)研究中心，400054；4重慶醫(yī)療器械質(zhì)量檢驗(yàn)中心，401121）

麥冬（Ophiopogonis Radix）為百合科沿階草屬植物麥冬的塊根，廣泛使用的常用中藥，具有養(yǎng)陰、清心的功效，是一味滋清兼?zhèn)涞难a(bǔ)益良藥[1]。麥冬的化學(xué)成分有甾體皂苷、高異黃酮、多糖、氨基酸、揮發(fā)油等[2]。民間諸多抗癌復(fù)方中都含有麥冬，臨床上麥冬復(fù)方也被廣泛用于治療肺癌以及輔助放化療，并取得很好的療效[3-4]。為有效控制其質(zhì)量，作者采用高效液相色譜法測(cè)定其中沿階草酮甲的含量，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 藥品與儀器

Waters高效液相色譜儀（Waters 1525二元泵，Waters 2487紫外檢測(cè)器）；Breeze液相色譜工作站（Waters公司）；KQ-50型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器廠）；供試藥材購于重慶市桐君閣中藥材市場(chǎng)，由重慶理工大學(xué)傅善權(quán)副主任技師鑒定為百合科沿階草屬植物麥冬（Ophiopogon aponicus(L.f)KerGawl）的塊根；沿階草酮甲對(duì)照品（實(shí)驗(yàn)室自制，批號(hào)101008，純度為99.5%）；試劑甲醇為色譜純，水為三蒸水過濾，其他試劑均為AR。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

[5-7]選定色譜條件：Hypersil Cl8柱(150 mm×4.6 mm × 5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-水（75∶25）；檢測(cè)波長：298 nm；柱溫：室溫。在此條件下沿階草酮甲的理論塔板數(shù)不低于3 000。

2.2 對(duì)照品及供試品溶液的制備

精密稱取沿階草酮甲對(duì)照品適量，用甲醇，制成0.306mg/mL的溶液，濾過，即得對(duì)照品溶液。取麥冬粉末（40目）5 g，精密稱定置100 mL具塞錐形瓶中，加入甲醇40 mL，超聲提取30 min，過濾；濾渣再加20 mL甲醇，超聲提取10 min，過濾；濾渣再加20 mL甲醇，超聲提取30 min，過濾，合并三次濾液；濾液減壓濃縮至干，殘?jiān)蛹状歼m量溶解，超聲，轉(zhuǎn)移至2 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1線性關(guān)系考察在上述色譜條件下，分別精密吸取“2.2”項(xiàng)對(duì)照品溶液 3，6，9，12，15，18 μL 進(jìn)樣，以峰面積對(duì)質(zhì)量進(jìn)行回歸，沿階草酮甲的回歸方程為Y=3 645 282 X－420 010（ r=0.999 76），線性范圍為 0.918 ～ 5.508μg。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，進(jìn)樣10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得沿階草酮甲峰面積的RSD為0.43%，表明儀器進(jìn)樣精密度良好。

2.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，分別制備后在 0，2，8，12，24 h 進(jìn)樣 10 μL，測(cè)定沿階草酮甲峰面積的RSD為0.75%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4重復(fù)性試驗(yàn)取同一批麥冬樣品，按“2.2”項(xiàng)下的操作平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，就算沿階草酮甲含量，其RSD為1.30%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.3.5加樣回收試驗(yàn)精密稱取5份已知含量的同一批麥冬藥材粉末，加入適量沿階草酮甲對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下供試液的制備方法進(jìn)行制備，將供試液定容至5 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，進(jìn)樣10 μL,按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算平均回收率為99.80%，RSD為1.74%。

2.3.6樣品的含量測(cè)定取樣品按“2.2”項(xiàng)下方法制備的供試品溶液，進(jìn)樣10 μL（3次平行），測(cè)定峰面積，由外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算得沿階草酮甲的含量分別為0.09275‰，0.08728‰和0.093 86‰(表1)，對(duì)照品及供試品色譜圖見圖1。

表1 麥冬中沿階草酮甲的含量測(cè)定結(jié)果

圖1 沿階草酮甲對(duì)照品(A)與樣品圖譜（B）

3 討論

供試品溶液的制備，比較了加熱回流提取與超聲提取，其測(cè)定結(jié)果無明顯差異，但加熱回流提取的雜質(zhì)比超聲提取多，且超聲提取較簡便，故選擇超聲提取。還比較了超聲提取時(shí)間（30，45，60 min），測(cè)定結(jié)果分別 0.090 30‰，0.090 69‰和0.091 03‰，差異不明顯，故選擇30 min。文中所建的高效液相色譜法重復(fù)性良好，回收率高，且方法簡便，快速，易于操作，可作為麥冬中沿階草酮甲的含量測(cè)定方法。

參考文獻(xiàn)：

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