葡萄柚莖尖微芽嫁接脫毒成苗技術研究初報

李 麗 羅君琴 徐建國 孫建華 柯甫志 聶振朋

（浙江省柑橘研究所 臺州黃巖 318020）

1 材料與方法

1.1 供試品種（系）

紅肉葡萄柚、黃肉葡萄柚。

1.2 砧木苗培養

莖尖微芽嫁接采用沙田柚和枳為砧木，挑選果皮完好無霉爛的果實，先用自然水沖洗去果皮表面的雜質，在無菌條件下，用75%酒精擦洗作表面消毒，反復2～3次。切去果皮，取出飽滿的種子，用無菌的1mol/L的氫氧化鈉溶液浸泡10min，軟化種子表面的果膠，用清水沖洗直到果膠去除干凈。在無菌慮紙上剝除種子的內外種皮，胚根朝下置于固體的MS培養基中，每試管接5～6顆種子。標好品種和日期，置于25±1℃的恒溫培養箱中暗培養14～20d，獲得黃化苗供嫁接用。

1.3 莖尖微芽嫁接

晴朗的上午10：00左右，于健壯無病的葡萄柚樹株上，剪取3～5cm的未自剪的春梢，置于有清水的三角瓶中封口保濕。拿回實驗室用洗潔精清洗干凈嫩芽表面的雜質，在無菌條件下，用5%（v/v）的次氯酸鈉溶液對嫩芽作表面消毒8min。切去砧木頂端和部分根端，留莖長2cm左右，然后用刀片在離砧木上切口0.5cm處切出三角形創口，在體視顯微鏡下用嫁接刀尖剝取保留生長錐及2～3個葉原基的莖尖，快速將其放到砧木的三角形切口中，用刀背按壓使莖尖與砧木的橫切口完全接合。嫁接好的試管苗置入濾紙橋支撐的MT液體培養基中進行光培養，培養溫度為25±1℃，光照為1500～2000Lx，培養時間為12h/d。

1.4 除萌

嫁接后7～10d，砧木陸續萌蘗，生長迅速與接穗競爭營養，如不及時除萌，會嚴重影響接穗正常生長，當萌蘗長到2cm以上時，接穗因得不到足夠的營養而褐化死亡現象明顯增多。一般經過2～3次除萌，莖尖與砧木接口愈合充分的接穗開始生長，此時萌蘗不再發生。

1.5 嫁接成活苗的移栽

莖尖嫁接萌動開始后約21d左右，待接穗長出4～5片葉后，便移栽到網室大棚中。首先將待移栽的嫁接苗在實驗室的自然散射光下煉苗3～5d。在此間準備好培養土，成分為2/3珍珠巖+1/3東北泥炭，經高壓滅菌后備用。移栽時將嫁接苗從試管中取出，洗凈根部的培養液，移入無菌的培養土中。用1/2MT營養液+800倍多菌靈混合液澆透定根。再將培養缽移入裝有霧噴設施的防蟲網室中進行隔離養護，保持網室80%～90%的濕度。移栽后每隔7d澆一次1/2MT營養液+800倍多菌靈混合液，14d左右待嫁接苗新根長出，移栽成活，便開始新葉生長，看護培養得當，嫁接苗生長迅速，21d左右接穗即可長到5cm以上。

2 結果與分析

葡萄柚不同品系與砧木組合嫁接成活率差異較大。紅肉葡萄柚和黃肉葡萄柚莖尖微芽嫁接成活率品系間的無明顯差異，不同砧木間則表現出明顯的差異性。采用沙田柚為砧木，兩品系的葡萄柚嫁接成活率最高，都達70.0%左右，黃肉系相對較高達70.6%；而枳為砧木，紅肉葡萄柚和黃肉葡萄柚的嫁接成活率明顯較低，前者為15.0%，后者為11.8%（見表1）。其原因可能是葡萄柚與柚類嫁接親和性較好。

表1 不同砧木對葡萄柚莖尖微芽嫁接成活率的影響

3 小結

研究表明，在田間常規條件下，枳是中國目前應用最多、最廣的柑橘砧木，對多數柑橘品種親和力強，成活率高。枳是溫州蜜柑、椪柑、金柑、甌柑等常規半矮化砧；枳砧梁平柚、五步柚、晚白柚等，表現親和性好，矮化，生長正常，早結豐產；但它對本地早、柳橙、蕉柑、萊姆、湯姆森臍橙、麻豆文旦、八朔蜜柑、尤力克檸檬、馬敘無核葡萄柚、鄧肯葡萄柚等則不親和。

利用組織培養，試管微環境條件下，進行兩種葡萄柚與砧木組合的莖尖嫁接試驗，結果表明，試管微環境下，枳對葡萄柚也表現出親和性差，這與田間條件下的表現一致。而以沙田柚為砧木的嫁接親和性較佳。