液質聯用技術用于沉香中非法摻入含松香酸類物質的檢測

張妤琳， 曹 玲， 譚 力， 周 謐

(1.江蘇省食品藥品檢驗所，江蘇 南京 210008;2.江蘇省南通市藥品檢驗所，江蘇南通， 226006)

沉香為蒙醫和中醫常用的貴重藥材，始載于 《名醫別錄》，列為木部上品，具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘的功效。沉香臨床上常用于胸腹脹悶疼痛，胃寒嘔吐呃逆，腎虛氣逆喘急，現代醫學認為有鎮靜，鎮痛，平喘，抑制結核菌的生長等作用［1-3］。其來源為瑞香科植物沉香Aquilaria agallochaRoxb，白木香A.sinensis(Lour)Gilg含有樹脂的木材，前者為進口沉香，后者為國產沉香［4-6］。

由于沉香所用部位是樹的心材，生長年限長，資源有限，不能滿足需求，故市場上常有造假事件發生［7］。近來，在檢驗中發現有多批沉香的浸出物量高，符合現行標準規定，但香氣明顯不同，經反復實驗及考證，懷疑這些沉香中添加了含松香酸類的物質，來增大其浸出物量［8-9］。松香酸為松香的主要成分，松香為松科植物馬尾松或其同屬植物樹干中取得的油樹脂，經蒸餾除去揮發油后的遺留物。松香中主要成分為酸性物(樹脂酸)和中性物，其中樹脂酸約占85%～95%，而松香酸是其樹脂酸的主要成分［10］。本試驗采用液質聯用技術，利用相對分子質量和碎片信息，能快速，簡便，準確的對沉香中是否添加了含松香酸類的物質進行檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器與裝置

Agilent 1100 Series LC/MSD Trap高效液相色譜質譜聯用儀(美國Agilent公司)，含在線脫氣機、雙高壓梯度泵、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器;離子肼質譜配有電噴霧離子(ESI)源。

1.2 材料和試劑

沉香正品藥材來自中國藥品生物制品檢定所標本館，經中檢所標本館張繼館長鑒定;松香藥材由徐州彭祖中藥飲片廠提供;松香酸對照品來自德國SIGMA公司(純度約為75%);4批不同產地的沉香偽品藥材由南通市藥品檢驗所提供(其中編號Ⅲ來自廣東，編號Ⅳ來自安徽，編號Ⅴ來自徐州，編號Ⅵ來自啟東)。

乙腈:色譜純，Tedia公司，水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.3 實驗條件

1.3.1 色譜與質譜條件 色譜柱:Agilent zorbax SB-C18(5 μm，4.6 mm × 250 mm);流動相為乙腈-0.1%甲酸溶液(75 ∶25);體積流量 1.0 mL/min;柱溫:30℃;進樣量10 μL。檢測器:紫外二極管陣列和質譜串聯，紫外檢測波長241 nm。質譜參數:ESI離子源，正離子方式檢測，質量掃描范圍m/z50～500，霧化器壓力35.0 psi，干燥氣(N2)體積流量8.0 L/min，干燥氣溫度325℃，噴霧電壓4 000 V，裂解電壓1.0 V，分流比5 ∶1。

1.3.2 對照品溶液的制備 取松香酸對照品10 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

1.3.3 對照藥材溶液的制備 取松香對照藥材12 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

1.3.4 供試品溶液的制備 取沉香正品及偽品藥材細粉0.3 g，加入乙醇25 mL，超聲處理15 min，濾過，取續濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得沉香正品藥材溶液及偽品藥材溶液。

取沉香正品藥材細粉0.3 g以及松香酸對照品2.5 mg，加入乙醇 25 mL，超聲處理 15 min，濾過，取續濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得沉香正品藥材加樣松香酸對照品溶液。

2 結果與討論

2.1 松香酸對照品的LC/MS分析

對照品溶液的總離子流圖(TIC)見圖1。松香酸的保留時間為18.1 min，根據其分子質量對圖譜進行提取離子，結果在其提取離子流圖(EIC)中，保留時間與TIC中一致。

圖1 松香酸對照品TIC和EIC圖Fig.1 The TIC and EIC chromatogram of abietic acid

記錄其一級和二級質譜圖(見圖2)。

2.2 松香藥材的LC/MS分析

其總離子流(TIC)以及提取離子流(EIC)，在保留時間18.1 min出現相對分子質量為303.2的色譜峰，其一級、二級質譜均與松香酸對照品一致。

2.3 沉香正品藥材的LC/MS分析

其相對總離子流圖(TIC)以及提取離子流圖(EIC)如下(見圖3)，在保留時間18.1 min未出現分子質量為303.2的色譜峰。

2.4 沉香偽品藥材的LC/MS分析

圖2 松香酸對照品的一級和二級質譜圖Fig.2 The LC/MS and LC/MS/MS chromatogram of abietic acid

圖3 沉香正品藥材的TIC和EIC圖Fig.3 The TIC and EIC chromatogram of agalloch

其總離子流圖(TIC)以及提取離子流圖(EIC)見圖4，在保留時間18.1 min均出現相對分子質量為303.2的色譜峰，其一級、二級質譜(圖5)與松香酸對照品一致。

圖4 沉香偽品藥材的TIC和EIC圖Fig.4 The TIC and EIC chromatogram of counterfeit agalloch

2.5 沉香正品藥材加樣松香酸對照品的LC/MS分析

其總離子流(TIC)以及提取離子流(EIC)，在保留時間18.1 min出現分子質量為303.2的色譜峰，其一級、二級質譜均與松香酸對照品一致。

2.6 質譜數據

松香酸對照品、松香藥材、沉香正品、4批偽品藥材以及沉香正品藥材加樣松香酸對照品的質譜數據見表1。

從上表中可見，松香藥材、4批沉香偽品藥材以及沉香正品藥材加樣松香酸對照品在保留時間18.1 min處均有一級、二級質譜圖與松香酸一致的色譜峰，而沉香正品藥材未出現該色譜峰，可以判斷4批沉香偽品藥材中均添加了含有松香酸類的物質。

2.7 質譜數據解析

見表2。

3 討論

液質聯用技術將液相色譜的高分離效能與質譜對結構解析的強大功能結合起來，近年來隨著各種離子化技術的不斷出現，液質聯用技術已廣泛應用于醫藥領域，在中藥及中成藥非法添加方面亦起著重要的作用。目前，國內對沉香藥材真偽鑒別方法的研究報道較多［11-12］，主要集中在性狀、理化、導數光譜、薄層色譜方面［13］，而液質聯用技術的運用未見報道，將其與傳統方法相結合，有利于我們控制藥材質量，規范市場，保障人民群眾合理用藥。

表2 松香酸的MS和MS2數據歸屬Tab.2 The data adscription for MS/MS of abietic acid

本試驗利用液質聯用技術對沉香藥材中是否添加松香酸類物質進行了檢測，其方法較為簡便快速，結果判定較為可靠。目前從文獻報道中可見，松香酸主要存在于松香中，為其主要成分，但要確認添加的是否為松香類物質，還需輔以藥材性狀鑒別及顯微鑒別等手段。

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