高效液相色譜法測定維C銀翹片溶出度的研究

郭懷忠， 龐曉敏， 王進文， 姜文月， 張春梅

（1.河北大學藥學院，河北保定071002；2.河北省藥物質量分析控制重點實驗室，河北保定 071002）

高效液相色譜法測定維C銀翹片溶出度的研究

郭懷忠1，2， 龐曉敏1， 王進文1， 姜文月1， 張春梅1

（1.河北大學藥學院，河北保定071002；2.河北省藥物質量分析控制重點實驗室，河北保定 071002）

目的 建立維C銀翹片（金銀花、連翹、維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏等）中維生素C、對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏3種西藥成分的溶出度測定方法。方法 采用槳法，以0.1 mol/L HCl溶液為溶出介質，轉速為75 r/min，90 min 取樣。液相色譜柱為 Welchrom-C18柱（4.6 mm ×150 mm，5 μm），流動相為 A 0.05 mol/L 磷酸二氫鉀（含0.5% 四丁基溴化銨，磷酸調pH至3.5）；B乙腈，梯度洗脫。體積流量為0.8 mL/min，檢測波長為260 nm。結果 維生素 C、對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏分別在 19.8 ～118.8 μg/mL、42 ～252 μg/mL、0.42 ～2.52 μg/mL 范圍內呈良好的線性關系，平均回收率均不低于98%。不同廠家維C銀翹片的溶出度差異較大。結論 該方法簡便快捷、結果準確可靠，可用于維C銀翹片中3種西藥成分的溶出度測定。

高效液相色譜法；維C銀翹片；溶出度；維生素C；對乙酰氨基酚；馬來酸氯苯那敏

維C銀翹片是一種常用的中西藥復方制劑，主要由金銀花、連翹等中藥成分與維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏3種西藥成分制成。具有辛涼解表、清熱解毒之功效，常用于緩解流行性感冒引起的發熱頭痛、咳嗽口干、咽喉疼痛等癥。《中國藥典》2010年版一部收載了維C銀翹片［1］，采用高效液相色譜法（HPLC）分別測定3種西藥成分的量，但對溶出度并未做出規定。目前中國藥典對中藥固體制劑沒有溶出度的測定要求，這不僅影響中藥制劑體內生物利用度的評價，不能保證臨床用藥的安全有效，也可能給生產帶來一定盲目性。有文獻報道［2-5］維C銀翹片的溶出度測定，但只測定了單一組分對乙酰氨基酚，而未對其它成分進行測定。本實驗建立了HPLC法同時測定維C銀翹片中維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏3種西藥成分的溶出度，并進行了方法學驗證。實驗考察了國內不同廠家11個批次的維C銀翹片，為改進生產工藝，評價產品內在質量提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 P3000高效液相色譜儀（北京創新通恒科技有限公司）；溶出儀（D-800L型智能溶出儀，天津大學無線電廠制造）；超聲波清洗器（QT系列，天津市瑞普電子儀器公司）；真空泵（SHD-Ⅲ型循環水式多用真空泵，保定高新區陽光科教儀器廠）；PHS-3C型酸度計（上海理達儀器廠）；電子天平（AG204，瑞士METTLER TOLEDO）。

1.2 試藥 磷酸、鹽酸、磷酸二氫鉀和四丁基溴化銨均為分析純；乙腈（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；蒸餾水；對乙酰氨基酚、維生素C、馬來酸氯苯那敏對照品均由保定長天藥業提供。

市售維C銀翹片（規格：維生素C 49.5 mg、對乙酰氨基酚105 mg、馬來酸氯苯那敏1.05 mg）：A廠（糖衣片，批號 090946）；B廠（糖衣片，批號09115353）；C廠（糖衣片，批號20090801）；D廠（糖衣片，批號091102）；E廠（糖衣片，批號20090301）；F廠（糖衣片，批號090837）；G廠（糖衣片，批號20091102）；H廠（糖衣片，批號100203）；I廠（糖衣片，批號091118）；J廠（薄膜衣片，批號091202）；K廠（薄膜衣夾心片，批號M00044）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Welchrom-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動相為 A：0.05 mol/L 磷酸二氫鉀（含0.5% 四丁基溴化銨，磷酸調pH至3.5）；B：乙腈。進樣量為20 μL，柱溫為室溫。梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序Tab.1 Gradient elution program

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取維生素C、對乙酰氨基酚與馬來酸氯苯那敏對照品適量，精密稱定，加0.1 mol/L HCl溶液溶解并稀釋成每1 mL含維生素C 99 μg、對乙酰氨基酚210 μg與馬來酸氯苯那敏2.10 μg 的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，精密稱定，研勻后精密稱取細粉適量（約相當于一片量），置于100 mL量瓶中，加0.1 mol/L HCl溶液適量，超聲使其溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品貯備液。精密量取供試品貯備液5 mL置于25 mL量瓶中，用0.1 mol/L HCl溶液稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.3 系統適應性 分別取2.2項下的對照品溶液和供試品溶液，在2.1項色譜條件下進行色譜分析，HPLC譜圖見圖1，結果維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏三者的分離度均大于1.5，理論塔板數以對乙酰氨基酚計不低于5 000。

圖1 對照品（A）、對照品局部放大（B）和樣品局部放大（C）的HPLC色譜圖Fig.1 Chromatograms of reference substance（A）、enlarged reference substance（B）and enlarged sample（C）

2.4 線性關系考察 取2.2項下對照品貯備液，分別 精密量取1、2、3、4、5、6mL分置于25mL量瓶中，用0.1mol/LHCl溶液稀釋至刻度，搖勻，制成一系列不同質量濃度的溶液，按照2.1項下的色譜條件測定。結果表明，3種組分的峰面積與溶液質量濃度之間線性關系良好。見表2。

表2 3種組分的回歸方程、相關系數和線性范圍Tab.2 Regression equation，correlation coefficients and linear ranges of the three components

2.5 精密度試驗 取2.2項下的對照品溶液，連續進樣5次，計算維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏3種成分峰面積的 RSD分別為0.7%，0.3%，1.3%。表明精密度良好。

2.6 檢測限與定量限 維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏三者的檢測限分別為2.57 μg/L，1.98 μg/L，8.34 μg/L（S/N=3）；定量限分別為8.55 μg/L，6.59 μg/L，27.8 μg/L（S/N=10）。

2.7 穩定性試驗 取2.2項下的供試品溶液，于4℃避光冷藏放置，分別于 0、0.5、1.0、2.5、4.5、6.5、8.0、10.0、12.0 h 進行測定，經計算在 12 h 時對乙酰氨基酚和馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD分別為0.8%和0.7%，表明這兩種成分在12 h內穩定。維生素C在0～12.0 h內峰面積的RSD呈遞增趨勢，6.5 h時 RSD 即為2.1%，降解率達5.3%，表明維生素C穩定性較差，待測溶液需在6 h內進樣分析。

2.8 回收率試驗 精密稱取已測定的樣品適量（約相當于對乙酰氨基酚10.5 mg）共5份，分別精密加入10 mL 2.2項下的對照品貯備液，置于100 mL量瓶中，用0.1 mol/L HCl溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過。按2.1項色譜條件測定，計算回收率。測定結果見表3。

表3 3種組分回收率測定結果 （n=5）Tab.3 Recovery results of three components （n=5）

2.9 溶出度實驗條件的選擇

2.9.1 轉法的選擇 《中國藥典》2010年版二部附錄中收載的溶出度測定方法有轉籃法、槳法及小杯法［6］。維C銀翹片中馬來酸氯苯那敏規格雖小，但對乙酰氨基酚規格較大，不宜采用小杯法；轉籃法和槳法，都可用于片劑，但考慮到本品含有大量中藥成分，且含中藥浸膏，在溶出過程中可能會使轉籃篩網堵塞，故采用漿法。

2.9.2 轉速的選擇 漿法轉速一般為50～75 r/min［7］，通過對比50 r/min 與 75 r/min 發現，轉速為50 r/min時，片劑存在堆積現象，影響藥物溶出，故采用轉速75 r/min。

2.9.3 溶出介質的選擇 常用的溶出介質［8］有：水、0.1 mol/L HCl溶液及磷酸鹽緩沖液。通過參考文獻［9-10］，且考慮到3組分的溶解性，采用500 mL 0.1 mol/L HCl溶液作為溶出介質。

2.9.4 溶出曲線的繪制 取本品，按照溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄XC第二法），以0.1 mol/L HCl溶液500 mL為溶出介質，轉速為75 r/min，分別在 15、30、45、60、75 和 90 min 定點取樣5 mL，（同時補充相同溫度下的溶出介質5 mL），用0.45 μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。同時取2.2項下的對照品溶液，按2.1項下色譜條件測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算各個時間點的累積溶出度，溶出曲線見圖2。

圖2 樣品溶出度曲線Fig.2 Dissolution curves of sample

2.10 樣品溶出度測定 取國內11個廠家的維C銀翹片各一個批次，按2.9項下的方法測定各組分90 min時的溶出度，結果見表4。

表4 11批樣品的溶出度測定結果 （n=6）Tab.4 Dissolution results of samples （n=6）

3 討論

根據文獻報道［11-12］，為保證檢測靈敏度，采用規格最小的馬來酸氯苯那敏的吸收波長為檢測波長。馬來酸氯苯那敏的最大吸收波長為219 nm和260 nm。經實驗發現，在219 nm檢測時，雜峰較多，干擾待測組分測定。故采用260 nm作為檢測波長。

《中國藥典》2010年版一部采用HPLC法分別測定維C銀翹片中維生素C、對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏3種西藥成分的量，樣品前處理復雜，且不適用于同時測定3種西藥成分的溶出度。實驗曾采用甲醇-乙腈-0.02% 磷酸（5 ∶10 ∶85）；甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.2）；0.05 mol/L磷酸二氫鉀（含1% 三乙胺，pH 3.0）-乙腈（75∶25）等作為流動相，但維生素C與溶劑峰重疊。加入0.5%四丁基溴化銨，與維生素C形成離子對，可降低其極性，延長保留時間，使其避免受溶劑峰的干擾，而四丁基溴化銨對堿性化合物（氯苯那敏）作用很小或幾乎無作用［13］。同時考察了不同pH值的磷酸鹽緩沖液對各待測組分的影響，結果當pH值為3.5時，各組分峰形較好。此外，氯苯那敏極性弱，保留時間過長，故采用梯度洗脫，使三組分在15 min內全部出峰，不僅可以縮短分析時間，還可以改善峰形，提高柱效。

4 結論

本實驗結果表明，同是糖衣片，不同廠家的維C銀翹片溶出度存在明顯差異；薄膜衣片比糖衣片的溶出要好；某些廠家可能考慮到維生素C易氧化和吸潮，做成薄膜夾心片，但工藝不成熟，片心的溶出緩慢。由此可知，不同廠家的生產工藝是影響藥物溶出的重要因素。維C銀翹片是中西藥復方制劑，中藥成分多，使其黏度較大，這勢必會影響藥物溶出情況，從而影響藥物的吸收和臨床療效。因此，對維C銀翹片進行溶出度研究具有重要意義，并為生產廠家改進生產工藝提供依據。利用本法測定維C銀翹片的溶出度，簡便易行，準確可靠，可用于維C銀翹片的質量控制。

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Dissolution determination of Vitamin C Yinqiao Tablet by HPLC

GUO Huai-zhong1，2， PANG Xiao-min1， WANG Jin-wen1， JIANG Wen-yue1， ZHANG Chun-mei1

（1.College of Pharmacy，Hebei University，Baoding 071002，China；2.Hebei Provincial Key Laboratory of Drug Quality Research，Baoding 071002，China）

AIMTo establish a method for determining the dissolution of Vitamin C，paracetamol and chlorphenamine maleate in Vitamin C Yinqiao Tablet（Lonicerae japonicae Flos，Forsythiae Fructus，Vitamin C，paracetamol，chlorphenamine maleate，etc）.METHODSPaddle method was applied，and 0.1 mol/L HCl solution was used as the dissolvent，the rotation speed was kept at 75 r/min，90 min sampling time.HPLC conditions included Welchrom-C18column（4.6 mm × 150 mm，5 μm），mobile phase of A 0.05 mol/L potassium dehydrogenized phosphate（containing 0.5%tetra butyl ammonium bromide，phosphoric acid adjusted pH to 3.5）；B acetonitrile.Gradient elution was employed.The flow rate was 0.8 mL/min and the detection wavelength was set at 260 nm.RESULTSIt presented a good linearity of Vitamin C，paracetamol and chlorphenamine maleate in the ranges of 19.8-118.8 μg/mL、42-252 μg/mL、0.42-2.52 μg/mL，respectively.Their average recoveries were not less than 98%.Vitamin C Yinqiao Tablet from different pharmaceutical factories had different dissolution.CONCLUSIONThe method is rapid，simple and accurate，and it can be used for the determination of dissolution of Vitamin C Yinqiao Tablet.

HPLC；Vitamin C Yinqiao Tablet；dissolution；Vitamin C；paracetamol；chlorphenamine maleate

R927.2

A

1001-1528（2011）07-1178-05

2010-09-11

國家自然科學基金（20905019；21011140338）；河北省自然科學基金（B2010000209）；河北大學自然科學基金（2007-111）

郭懷忠（1968—），男，博士，主要從事中藥質量控制及其藥效學研究。Tel：（0312）5971107，E-mail：ghuaizh@yahoo.com.cn