麝香保心丸對(duì)心梗后心衰家兔心肌細(xì)胞外間質(zhì)重構(gòu)及MMP-9/TIMP-1mRNA表達(dá)的影響

黃婧娟， 洪小蘇， 徐衛(wèi)亭， 陳建昌， 張?jiān)娨?/p>

（1.上海第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院，上海200003；2.蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇蘇州215004；3.浙江省湖州市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科，浙江湖州 313000）

麝香保心丸對(duì)心梗后心衰家兔心肌細(xì)胞外間質(zhì)重構(gòu)及MMP-9/TIMP-1mRNA表達(dá)的影響

黃婧娟1， 洪小蘇2*， 徐衛(wèi)亭2， 陳建昌2， 張?jiān)娨?

（1.上海第二軍醫(yī)大學(xué)長征醫(yī)院，上海200003；2.蘇州大學(xué)附屬第二醫(yī)院心內(nèi)科，江蘇蘇州215004；3.浙江省湖州市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科，浙江湖州 313000）

目的 探討麝香保心丸（HMP）對(duì)心梗后心衰家兔心肌細(xì)胞外間質(zhì)重構(gòu)的影響及其可能機(jī)制。方法 結(jié)扎家兔冠狀動(dòng)脈左前降支建立心梗心衰模型。術(shù)后2周隨機(jī)分為心衰4周（CHF 4 W）及8周組（CHF 8 W）、麝香保心丸4周（HMP 4 W）及8周組（HMP 8 W）、依那普利4周（ENA 4 W）及8周組（ENA 8 W），同時(shí)設(shè)假手術(shù)組（Sham）為對(duì)照。測(cè)定血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)、左室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）、心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF），RT-PCR檢測(cè)心肌基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）及其內(nèi)源性組織抑制因子-1（TIMP-1）mRNA表達(dá)。結(jié)果 與CHF組比較，經(jīng)HMP和ENA治療后CO、CI、全心射血分?jǐn)?shù)（GEF）升高（P＜0.05），全心舒張末期容積指數(shù)（GEDI）、LVMI及CVF降低（P＜0.05），以HMP8W和ENA8W組改善為著。CHF組MMP-9 mRNA表達(dá)水平升高，MMP-9/TIMP-1 mRNA比值增大。經(jīng)HMP及ENA治療后，心肌MMP-9及TIMP-1 mRNA表達(dá)水平下降，兩者比值保持動(dòng)態(tài)平衡。結(jié)論 HMP與ENA一樣，具有遏制和減輕心梗后心衰心肌細(xì)胞外間質(zhì)重構(gòu)作用，其機(jī)制可能與降低心肌MMP-9和TIMP-1 mRNA表達(dá)水平，保持兩者比值動(dòng)態(tài)平衡相關(guān)。

麝香保心丸；心力衰竭；心肌間質(zhì)重構(gòu)；基質(zhì)金屬蛋白酶；組織型基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物

中成藥麝香保心丸（HMP）是治療冠心病心絞痛的有效藥物［1］，同時(shí)發(fā)現(xiàn)，HMP能顯著降低大鼠心梗模型的梗死面積，改善心室重構(gòu)［2-3］。心室重構(gòu)是心力衰竭的基本機(jī)制。心室重構(gòu)中的一個(gè)重要組成部分是心肌細(xì)胞外間質(zhì)（ECM）重構(gòu)，表現(xiàn)為膠原的合成與降解之間的動(dòng)態(tài)平衡。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）與其內(nèi)源性組織型抑制劑（TIMPs）是目前發(fā)現(xiàn)的最重要的調(diào)節(jié)ECM合成與降解的蛋白酶類［4-5］。本研究通過觀察HMP對(duì)心梗后心衰家兔心肌細(xì)胞外間質(zhì)重構(gòu)的影響并探討其可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥 86只雄性新西蘭大白兔，體質(zhì)量（2.5±0.5）kg，由蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。74只家兔結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支為心梗模型組，12只家兔于相同位置穿線但不結(jié)扎作為對(duì)照組（Sham組）。術(shù)后2周從Sham組和心梗后心衰組各隨機(jī)選取4只家兔作一般狀態(tài)觀察和有創(chuàng)血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)，確定心梗后心衰模型成功。再將心梗后心衰組隨機(jī)分為6組：心衰4周組（CHF 4 W）及8周組（CHF 8 W），予生理鹽水（NS）2 mL灌胃常規(guī)飼養(yǎng)4周或8周。依那普利4周組（ENA 4 W）及8周組（ENA 8 W），將ENA（江蘇揚(yáng)子江藥業(yè)公司惠贈(zèng)，批號(hào)09051601）按5 mg/（kg·d）+NS 2 mL灌胃4周或8周。麝香保心丸4周組（HMP4W）及8周組（HMP 8 W），將HMP（上海和黃藥業(yè)有限公司惠贈(zèng)，批號(hào)080604）按11 mg/（kg·d）+NS 2 mL灌胃4周或8周。Sham組予NS 2 mL灌胃4周。

1.2 家兔心梗后心衰模型制備 家兔稱質(zhì)量后經(jīng)耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉（30 mg/kg）麻醉后固定，描記12導(dǎo)聯(lián)心電圖。手術(shù)區(qū)去毛消毒后開胸，在左室流出道與左心室之間，于左冠狀動(dòng)脈起源點(diǎn)1～2 mm，距主動(dòng)脈根部2～3 mm處用6—0絲線結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，連同一小束心肌一起結(jié)扎。結(jié)扎后左室壁變蒼白，并出現(xiàn)室壁運(yùn)動(dòng)減弱，同時(shí)心電圖可見相鄰2個(gè)或2個(gè)以上胸導(dǎo)聯(lián)R波振幅明顯增高，ST段抬高持續(xù)30 min以上，證實(shí)結(jié)扎成功。Sham組開胸打開心包后，于左前降支相同位置穿線不結(jié)扎。術(shù)后5 d，每日青霉素40萬U肌注預(yù)防感染，常規(guī)飼養(yǎng)。

1.3 血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定 家兔稱質(zhì)量麻醉、固定，常規(guī)頸部、腹股溝區(qū)備皮消毒。切開右側(cè)頸內(nèi)靜脈向心方向插入充滿24號(hào)靜脈留置針約5～8 cm并固定，連接Philips PiCCO Module CVP探頭，調(diào)零后測(cè)定CVP，再連接溫度傳感器。切開股動(dòng)脈向心方向插入PiCCO動(dòng)脈導(dǎo)管5～8 cm后固定，連接PiCCO Module溫度及壓力傳感器。通過注入3次冰鹽水（每次約2 mL），利用經(jīng)肺溫度稀釋法測(cè)定血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)心率（HR）、心輸出量（CO）、心臟指數(shù)（CI）、全心射血分?jǐn)?shù)（GEF）及全心舒張末期容積指數(shù)（GEDI），取3次平均值作為測(cè)定結(jié)果。

1.4 心肌標(biāo)本采集 完成實(shí)驗(yàn)將家兔處死，開胸取出心臟，稱量后剪去兩心房、主肺動(dòng)脈、右心室游離壁。剩余部分為左心室質(zhì)量（LVM），計(jì)算左室質(zhì)量指數(shù)（LVWI=LVW/BW），取部分非梗死區(qū)心肌組織置于凍存管中，－80℃低溫冰箱保存，待逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)。

1.5 心肌間質(zhì)膠原定性和定量分析 部分心肌組織以10%中性福爾馬林液固定，石蠟包埋，5 μm切片后行Van Gieson（V.G）染色。染色后光鏡下心肌膠原纖維呈鮮紅色，心肌纖維和紅細(xì)胞呈黃色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。應(yīng)用微機(jī)圖像處理系統(tǒng)對(duì)切片進(jìn)行圖像攝取和轉(zhuǎn)換。每個(gè)標(biāo)本100倍視野隨機(jī)選取5個(gè)不同視野，測(cè)量切片中膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）。CVF為每視野中膠原組織面積與該視野中心肌組織面積之比。

1.6 逆轉(zhuǎn)錄 PCR（RT-PCR）檢測(cè)心肌 MMP-9及TIMP-1 mRNA表達(dá)水平 取100 mg心肌組織加入Trizol試劑1 mL，按產(chǎn)品說明步驟提取心肌總RNA。引物序列為（由上海英駿公司合成）：

MMP-9（490bp）：P1上游5'-TCGTGCTGGGCTGTTGCTC-3'；P2下游5'-CGTGATGTTGTGGTGGTGCC-3'。

TIMP-1（319bp）：P1上游5'-ATGCTGCTGCTGCTGTGGCT-3'；P2下游5'-AGAGCCCGTTCCGCAGTTGT-3'。

β-actin（295bp）：P1上 游 5'-TGGCTCTAA-CAGTCCGCCTAG-3'；P2下游5'-AGTGCGACGTGGACATCCG-3'。

RT-PCR 反應(yīng)體系：10×PCR Buffer 2.5 μL；dNTP Mix 2 μL；P1 0.5 μL；P2 0.5 μL；cDNA 0.5 μL；rTaq 0.25 μL；H2O 18.75 μL；總體系 25 μL。

β-actin反應(yīng)條件：94℃ 5 min；94℃ 40 s，55℃40 s，72 ℃ 40 s，30 個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min，4 ℃ Pause。MMP-9反應(yīng)條件：94℃ 5 min；94℃ 40 s，63℃ 40 s，72 ℃ 40 s，30 個(gè)循環(huán)，72 ℃ 延伸 5 min，4 ℃Pause。TIMP-1反應(yīng)條件：94℃ 5 min；94℃ 40 s，61 ℃ 40 s，72 ℃ 40 s，30 個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸5 min，4℃Pause。

體外反轉(zhuǎn)錄步驟：取 11 μL RNA、1 μL Oligo（dT）18Primer進(jìn)行混勻；70℃ 5 min；立即放在冰上；取 4 μL 5 × reaction buffer、2 μL 10 mM dNTP Mix、1 μL RNase inhibitor 于上步反應(yīng)管中進(jìn)行混勻；37℃ 5 min；向管中加入1 μL M-MuLV；42℃ 60 min；72℃ 5 min。所得即為cDNA。

PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像系統(tǒng)成像，計(jì)算相對(duì)比值作為其相對(duì)表達(dá)量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS-17.0處理。計(jì)量資料均用（±s）表示，單因素方差分析進(jìn)行組間比較，組間兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)。相關(guān)分析用Pearson相關(guān)檢驗(yàn)。P＜0.05認(rèn)為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性，均為雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 心梗心衰家兔模型成功標(biāo)志 前降支結(jié)扎成功并存活至2周家兔共65只，均出現(xiàn)明顯心力衰竭癥狀：活動(dòng)量明顯減少，食欲不同程度下降，口唇及四肢末端紫紺，遠(yuǎn)端肢體可見局部水腫。造模過程中及成功后死亡家兔21只，原因?yàn)槁樽硪馔狻⑶锌诟腥尽⒐辔钢舷ⅰ⑿乃ゼ又亍盒孕穆墒С＃ㄊ宜佟⑹翌潱┑取ham組未見上述征象出現(xiàn)。

造模成功后2周，從Sham組和心梗后心衰組各隨機(jī)選取4只測(cè)定血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)。造模成功組家兔 CI均小于2.5 L/（min·m2），GEDI均大于350 mL/m2；Sham 組 CI均大于2.5 L/（min·m2），GEDI均小于350 mL/m2，說明心梗心衰模型制作成功。

2.2 Sham組、CHF組和各藥物干預(yù)組血流動(dòng)力學(xué)測(cè)定結(jié)果（見表1） 從表1中可見，CHF組血流動(dòng)力學(xué)狀況明顯差于Sham組，心衰時(shí)間越長，收縮和舒張功能越差。HMP組血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)較CHF組明顯改善，隨著干預(yù)時(shí)間的延長，改善效果越明顯，其結(jié)果與ENA相似。表明HMP與ENA一樣可明顯改善心梗后心力衰竭血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，緩解心臟收縮和舒張功能異常。

表1 各組血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較 （±s）Tab.1 Comparison of hemodynamic parameters in each group （ˉx ± s）

表1 各組血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較 （±s）Tab.1 Comparison of hemodynamic parameters in each group （ˉx ± s）

注：與 Sham組比較，▲P ＜0.05；與同期 CHF組比較，★P ＜0.05；與同期 ENA 組比較，◆P ＜0.05。▲P ＜0.05，vs Sham group；★P ＜0.05，vs CHF4W or CHF8W group；◆P ＜0.05，vs ENA4W or ENA8W group.

組別 動(dòng)物/只 CO/（L/min） CI/（L/min·m2） GEF/% GEDI/（mL/m2）Sham 組 7 0.81 ±0.13 3.91 ±0.46 33.42 ±5.50 225.14 ±31.38 CHF4W 組 7 0.45 ±0.10▲ 2.22 ±0.32▲ 18.43 ±2.76▲ 382.29 ±70.91▲CHF8W 組 7 0.34 ±0.06▲ 1.74 ±0.35▲ 13.00 ±2.31▲ 474.71 ±47.37▲ENA4W 組 8 0.59 ±0.10▲★ 2.98 ±0.40▲★ 27.50 ±4.10▲★ 319.13 ±26.68▲★ENA8W 組 7 0.69 ±0.10▲★ 3.77 ±0.53★ 31.71 ±4.82★ 240.00 ±33.44★HMP4W 組 7 0.62 ±0.06▲★ 3.10±0.33▲★ 23.00±2.94▲★◆ 314.86±11.58▲★HMP8W 組 7 0.75 ±0.13★ 3.84 ±0.48★ 31.29 ±2.81★◆ 260.57 ±41.71★

2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組家兔BW、LVM和LVMI的比較（見表2） 從表2中可見，CHF組LVM、LVMI較Sham組明顯增加（P＜0.05）。ENA和 HMP組LVM、LVMI值均較同期 CHF組減低（P＜0.05），與Sham組比較無差別。表明HMP與ENA具有明顯的減輕心梗后心衰心臟的左室重構(gòu)作用。

2.4 心肌間質(zhì)膠原定性和定量分析 V.G染色可見光鏡下可見CHF組梗死區(qū)心肌細(xì)胞大部分消失，為膠原纖維所取代，間質(zhì)可見大量鮮紅色膠原沉積，以8周時(shí)為著。經(jīng)HMP治療后膠原纖維增生受到明顯抑制，膠原面積減少，以8周時(shí)更明顯，ENA組與HMP組相似（見圖1～4）。

各組CVF變化見表2。CHF組CVF明顯高于Sham組，而 HMP組和 ENA組雖然也明顯高于Sham組，但明顯低于CHF組；HMP組還低于同期ENA組。相關(guān)分析表明：LVM與LVMI與CVF呈強(qiáng)正相關(guān)關(guān)系（相關(guān)系數(shù)分別是r=0.804，P=0.000；r=0.616，P=0.000）。表明 HMP 和 ENA 干預(yù)后可明顯減輕梗死后心衰心肌細(xì)胞外間質(zhì)側(cè)膠原沉積，抑制心肌纖維化。

表2 各組家兔體質(zhì)量、左室質(zhì)量、左室質(zhì)量指數(shù)、CVF比較（±s）Tab.2 Comparison of body weight，left ventricular mass，left ventricular mass index and CVF in each group （ˉx ± s）

表2 各組家兔體質(zhì)量、左室質(zhì)量、左室質(zhì)量指數(shù)、CVF比較（±s）Tab.2 Comparison of body weight，left ventricular mass，left ventricular mass index and CVF in each group （ˉx ± s）

注：與 Sham組比較，▲P ＜0.05；與同期 CHF組比較，★P ＜0.05；與同期 ENA 組比較，◆P ＜0.05。▲P ＜0.05，vs Sham group；★P ＜0.05，vs CHF4W or CHF8W group；◆P ＜0.05，vs ENA4W or ENA8W group.

組別 動(dòng)物/只 體質(zhì)量/（BW/g） 左室質(zhì)量/（LVW/mg） 左室質(zhì)量指數(shù)/（LVW/BW） CVF/%Sham 組 7 2 488.57 ±174.78 2 220.00 ±170.78 0.90 ±0.08 2.64 ±0.71 CHF4W 組 7 2 053.86 ±365.62▲ 2 625.71 ±145.01▲ 1.31 ±0.20▲ 13.40 ±0.95▲CHF8W 組 7 2 000.00 ±280.89▲ 2 804.29 ±123.40▲ 1.43 ±0.24▲ 17.62 ±1.32▲ENA4W 組 8 2 083.75 ±415.38▲ 2 286.25 ±117.59★ 1.14 ±0.23▲ 7.51 ±1.14▲★ENA8W 組 7 1 977.14 ±359.48▲ 2 212.86 ±117.01★ 1.15 ±0.19▲★ 5.20 ±0.64▲★HMP4W 組 7 2 250.00 ±272.82 2 302.86 ±131.49★ 1.03 ±0.11★ 9.94 ±0.72▲★◆HMP8W 組 7 2 150.02 ±348.02 2 138.57 ±39.34★ 0.99 ±0.19★ 7.23 ±0.90▲★◆

圖1 Sham組 ×100，V.G染色Fig.1 Sham group（×100），V.G staining

圖2 CHF8W組 ×100，V.G染色Fig.2 CHF8W group（×100），V.G staining

圖3 ENA8W組 ×100，V.G染色Fig.3 ENA8W group（×100），V.G staining

2.5 各組心肌組織MMP-9和TIMP-1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平比較 CHF組心肌MMP-9和TIMP-1mRNA表達(dá)水平較Sham組增高。經(jīng)HMP及ENA治療后，四組心肌MMP-9和TIMP-1 mRNA表達(dá)水平均下降。HMP及ENA組MMP-9/TIMP-1 mRNA比值與Sham組一樣，均在1左右波動(dòng)，兩者呈現(xiàn)同向性變化，且保持著一種平衡狀態(tài)。CHF組MMP-9/TIMP-1mRNA比值大于1，處于失衡狀態(tài)，雖呈同向性變化，但以MMP-9 mRNA表達(dá)占優(yōu)勢(shì)（見圖5～圖7及表3）。

圖4 HMP8W組 ×100，V.G染色Fig.4 HMP8W group（×100），V.G staining

圖5 家兔心肌組織MMP-9mRNA表達(dá)情況Fig.5 The mRNA expression levels of MMP-9 in myocardial tissue

圖6 家兔心肌組織TIMP-1mRNA表達(dá)情況Fig.6 The mRNA expression levels of TIMP-1 in myocardial tissue

圖7 家兔心肌組織MMP-9/TIMP-1mRNA比值比較Fig.7 Comparison of the mRNA expression levels of MMP-9/TIMP-1 ratio in myocardial tissue

3 討論

HMP長期以來作為治療胸痹（冠心病、心絞痛）的代表藥物，通過芳香通溫快速緩解胸悶、胸痛等癥狀。其成分中蘇合香、冰片具有減慢心率，解除冠脈痙攣的作用；麝香提取物有擴(kuò)張血管和強(qiáng)心的功效；人參皂苷有抗氧化，正性肌力等作用；蟾酥具有強(qiáng)心的功效［1］。

本研究發(fā)現(xiàn)，家兔心梗后心衰模型經(jīng)過HMP治療，可取得與ENA治療相似的血液動(dòng)力學(xué)改善效應(yīng)，無論是反映心臟收縮功能的CO、CI、GEF等指標(biāo)，還是反映心臟舒張功能的GEDI，均較CHF組明顯改善，而且隨著治療時(shí)間的延長，改善效果更顯著。這從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)角度肯定了HMP對(duì)心衰心臟確有明顯提高心肌收縮力，減輕心臟前負(fù)荷，改善心功能的作用。這在以往文獻(xiàn)中鮮有報(bào)道。

表3 各組家兔MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1mRNA比值比較（±s）Tab.3 Comparison of the mRNA expression levels of MMP-9，TIMP-1 and MMP-9/TIMP-1 ratio in myocardial tissue （ˉx ± s）

表3 各組家兔MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1mRNA比值比較（±s）Tab.3 Comparison of the mRNA expression levels of MMP-9，TIMP-1 and MMP-9/TIMP-1 ratio in myocardial tissue （ˉx ± s）

注：與 Sham組比較，▲P＜0.05；與同期 CHF組比較，★P＜0.05；與同期 ENA組比較，◆P＜0.05。▲P ＜0.05，vs Sham group；★P ＜0.05，vs CHF4W or CHF8W group；◆P ＜0.05，vs ENA4W or ENA8W group.

組別 動(dòng)物/只MMP-9 mRNA TIMP-1 mRNA MMP-9/TIMP-1mRNA Sham組7 1.05 ±0.33 1.02 ±0.13 1.01 ±0.38 CHF4W 組 7 1.43 ±0.57▲ 1.16 ±0.72▲ 1.27 ±0.43▲CHF8W 組 7 1.08 ±0.42 1.03 ±0.85 1.43 ±0.72▲ENA4W 組 8 0.69 ±0.21▲★ 0.84 ±0.29★ 0.92 ±0.89★ENA8W 組 7 0.88 ±0.67★ 0.95 ±0.33 0.93 ±0.67★HMP4W 組 7 1.07 ±0.18★◆ 0.93 ±0.52◆ 1.08 ±0.21◆HMP8W 組 7 0.96 ±0.07 0.91 ±0.78 0.95 ±0.47★

心室重構(gòu)是心梗后心衰心臟的基本特征，表現(xiàn)為心室擴(kuò)張、變薄，非梗死區(qū)心肌反應(yīng)性增厚；心肌細(xì)胞壞死、凋亡；細(xì)胞外間質(zhì)的膠原沉積和纖維化，結(jié)果導(dǎo)致心臟整體收縮和舒張功能受損［4］。本研究發(fā)現(xiàn)，CHF組LVM和LVMI較Sham組明顯增加，說明心梗后心衰心臟發(fā)生了明顯的心室重構(gòu)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)心衰心臟心肌的CVF明顯高于Sham組，而且CVF與LVM和LVMI呈現(xiàn)強(qiáng)正相關(guān)關(guān)系，表明心衰心臟細(xì)胞外間質(zhì)沉積顯著增加，從而證實(shí)了心衰心臟存在著顯著的心肌細(xì)胞外間質(zhì)纖維化。心臟細(xì)胞外間質(zhì)纖維化正是心室重構(gòu)的重要原因，是心梗后導(dǎo)致心臟收縮和舒張功能障礙的重要機(jī)制之一［5］。經(jīng)過 HMP或 ENA治療后，心梗后心衰心臟的LVM、LVMI和CVF均顯著下降表明HMP和ENA一樣，均可使心衰心臟的心室重構(gòu)包括心肌細(xì)胞外間質(zhì)纖維化得到明顯的遏制和減輕，干預(yù)治療時(shí)間長，改善效果更明顯。心室重構(gòu)得到明顯遏制和減輕，勢(shì)必使心臟的收縮和舒張功能得到改善，血液動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)的結(jié)果也充分證實(shí)了這一點(diǎn)。

心衰時(shí)過度激活的腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）和轉(zhuǎn)化生長因子β（TGFβ）在心室重構(gòu)，尤其是心肌細(xì)胞外間質(zhì)纖維化過程中起著重要的作用［3］。在它們的誘導(dǎo)下MMPs活性增強(qiáng)，表達(dá)增加。只要MMPs活性增加，就會(huì)破壞現(xiàn)有的正常膠原，同時(shí)又促進(jìn)了交聯(lián)較差的新膠原的合成［6-7］。MMPs的膠原破壞作用受到TIMPs的抑制。在MMPs和TIMPs眾多亞型中，MMP-9和TIMP-1對(duì)膠原的降解和增生起著重要作用。在生理狀態(tài)下 MMP-9/TIMP-1處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，精密調(diào)節(jié)細(xì)胞外纖維蛋白的降解。一旦MMP-9/TIMP-1的平衡被破壞，就會(huì)有利于MMP-9的活性增強(qiáng)，從而導(dǎo)致膠原破壞和膠原交聯(lián)變性，造成心肌細(xì)胞外間質(zhì)纖維化［5-8］。本研究發(fā)現(xiàn)，CHF4W組心臟MMP-9mRNA表達(dá)水平較Sham組明顯增高，TIMP-1mRNA表達(dá)水平也增高，但低于 MMP-9mRNA表達(dá)水平，因此，MMP-9mRNA/TIMP-1mRNA比值增大。CHF8W組雖然MMP-9mRNA和TIMP-1mRNA表達(dá)水平有所下降，但其比值仍較Sham組高，與Peterson等人［9］報(bào)道相一致。表明CHF時(shí)，心肌MMP-9mRNA表達(dá)水平的增高明顯高于TIMP-1mRNA表達(dá)水平，有利于心肌細(xì)胞外間質(zhì)膠原的降解，同時(shí)又促進(jìn)了交聯(lián)較差的新膠原的合成，導(dǎo)致心肌細(xì)胞外間質(zhì)纖維化［8］，與之相一致的變化是CVF的明顯增高。

HMP或ENA治療后，無論是4周或8周組，MMP-9mRNA和TIMP-1mRNA表達(dá)均受到抑制，使其比值接近于Sham組，有利于遏制和減輕心肌細(xì)胞間質(zhì)膠原的破壞和增生。因此可以推測(cè)HMP減輕心肌細(xì)胞外間質(zhì)重構(gòu)的作用，主要與 MMP-9mRNA/TIMP-1mRNA表達(dá)的平衡有關(guān)，可能通過影響MMP-9mRNA和TIMP-1mRNA的表達(dá)，特別是兩者表達(dá)的平衡關(guān)系來減輕心肌細(xì)胞外間質(zhì)的重構(gòu)。

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Effects of Heart-protecting Musk Pill on myocardial interstitium reconstruction and the expression of MMP-9/TIMP-1mRNA in rabbits with heart failure after myocardial infraction

HUANG Jing-juan1， HONG Xiao-su2*， XU Wei-ting2， CHEN Jian-chang2， ZHANG Shi-yin3
（1.Changzheng Hospital，Shanghai No.2 Military Medical University，Shanghai 200003，China；2.The Second Hospital Affiliated to Soochow University，Suzhou 215004，China；3.Department of Cardiology，Huzhou No 1 People’s Hospital，Huzhou 313000，China）

AIMTo investigate the effects and mechanisms of Heart-protecting Musk Pill（HMP）on myocardial interstitium reconstruction in rabbits with heart failure（CHF）after myocardial infraction（MI）.METHODSWe established the CHF models after MI in New Zealand rabbits by ligation of the left anterior descending coronary artery.Rabbits with CHF were randomly divided into CHF 4 W group，CHF 8 W group，Enalapril（ENA）4 W group，ENA 8 W group，HMP 4 W group and HMP 8 W group.Meanwhile sham operation（Sham）group was set up to serve as controls.The effects on such indexes as hemodynamic state，left ventricular mass index（LVMI），myocardial collagen volume fraction（CVF）and the mRNA expression levels of MMP-9 and its endogenous tissue inhibitor-1（TIMP-1）mRNA were determined after treatment for 4 or 8 weeks.RESULTSThe CO，CI and global ejection fraction（GEF）in HMP and ENA groups were higher than these in CHF groups（P＜0.05）.While global end diastolic volume index（GEDI），LVMI and CVF decreased in HMP and ENA groups（P＜0.05），with more significant improvement in HMP 8 W and ENA 8 W groups.The mRNA expression levels of MMP-9 increased and MMP-9/TIMP-1 ratio increased in CHF groups.The mRNA expression levels of MMP-9 and TIMP-1 were decreased in HMP groups and ENA groups than those in CHF groups，with the ratio between the two maintaining a dynamic balance ratio.CONCLUSIONHMP and ENA have the same effect on alleviating myocardial extracellular matrix remodeling in rabbits with heart failure.The mechanism may be related to the reduction of the mRNA expression levels of MMP-9 and TIMP-1，and maintenance of the ratio between the two at a dynamic balance.

Heart-protecting Musk Pill；heart failure；myocardial interstitium reconstruction；matrix metalloproteinases；tissue inhibitors of the MMPs

R285.5

A

1001-1528（2011）07-1116-06

2010-11-11

黃婧娟（1984—），女，碩士，住院醫(yī)師。Tel：13472806827，E-mail：hjj866@yahoo.cn

*通信作者：洪小蘇，男，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：心力衰竭的基礎(chǔ)與臨床。Tel：13962191499，E-mail：hongxiaosu@126.com