杜仲雄花茶對D-半乳糖衰老模型小鼠SOD、GSH-Px活性和MDA水平的影響

杜紅巖， 婁麗杰， 傅建敏， 杜蘭英， 陳百泉， 李 欽

(1.中國林業科學研究院經濟林研究開發中心，河南 鄭州 450003;2.河南大學中藥研究所，河南 開封 475004)

杜仲Eucommia ulmoidesOliv.是我國特產的名貴中藥材。我國杜仲資源約占世界杜仲資源總量的99%以上［1］。杜仲自古以皮入藥，至今已有2000多年的歷史，杜仲皮具有補肝腎，強筋骨，安胎，抗衰老的功效，但對于杜仲雄花的藥用卻報道很少。杜仲為雌雄異株樹種，其中雄株占40% ～60%［2］。近年來研究發現，杜仲雄花與葉，皮含有相類似的有效成分，富含總黃酮，桃葉珊瑚苷，綠原酸等，其中黃酮類化合物的含量高于皮和葉［3］。杜仲雄花茶形狀與普通茶葉十分相似，不需要和其它茶種配合，具有湯色黃綠透亮，滋味濃而爽口，香氣獨特而持久，回味甜的特點，它充分利用了杜仲雄花資源，開拓了杜仲綜合利用的新途徑，已獲得國家發明專利［4］。為探討杜仲雄花茶的保健作用，本實驗就杜仲雄花茶對D－半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老、抗氧化作用進行了初步研究。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 ♂性昆明種小白鼠50只，體重(26±2)g，由河南省實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號:SCXK(豫)2005－0001，購進適應 3 d。

1.2 藥材及儀器 杜仲雄花茶(由靈寶市天地科技生態有限責任公司提供，批號20090407;專利號為ZL98117579.1);超氧化物岐化酶(SOD)試劑盒，谷胱苷肽過氧化物酶(GSHPx)試劑盒，丙二醛(MDA)試劑盒(均由南京建成生物工程研究所提供，批號均為20080918);D－半乳糖(國藥集團化學試劑有限公司，批號20061025);JY10001電子天平(上海精密科技儀器有限公司);HHS－11－2電熱恒溫水浴鍋(上海博迅醫療器械廠);PL2002型電子精密天平(上海特勒－托利多儀器公司);UV－754紫外－可見分光光度計(上海精密科技儀器有限公司)。

2 實驗方法

2.1 藥材的處理 取杜仲雄花茶(由靈寶市天地科技生態有限責任公司提供，批號:20090407)200g，加一定量的清水浸泡30 min，加水沒過藥面1 cm，煎煮3次，時間分別為60，40，20 min，合并3次濾液蒸發濃縮至200 mL(1 mL含生藥1 g)，裝瓶備用［5］。

2.2 動物分組給藥及組織樣品的制備 小鼠60只，隨機分為6組，每組10只，分別為空白對照(等體積生理鹽水)組，模型(等體積生理鹽水)組，維生素E(25 mg/kg)組及杜仲雄花茶高、中、低劑量組。每天上午空白對照組和D－半乳糖模型組灌胃生理鹽水20 mL/kg，實驗組分別灌胃杜仲雄花茶水煎液，下午空白對照組皮下注射生理鹽水5 mL/kg，其它5組均皮下注射1%D－半乳糖5 mL/kg。

連續給藥42 d，最后一次給藥后，禁食不禁水12 h，眼眶取血，分離血清。并迅速取肝臟，并將其置于4°C生理鹽水中，洗凈表面殘留血液，用濾紙吸干，稱濕重，然后加入預冷的生理鹽水，高速勻漿，制備成10%的組織勻漿備用。

2.3 數據處理 所有數據用計算機SPSS 10.0軟件進行處理，均以(±s)表示。組間差異采用t檢驗。

3 實驗結果

3.1 杜仲雄花茶對小鼠血清SOD、GSH－Px活性和MDA含量的影響 杜仲雄花茶水煎液能增加小鼠血清SOD和GSH－Px的活性，減少MDA的產生，并呈一定的量效關系。結果見表1。

3.2 杜仲雄花茶對小鼠肝臟SOD、GSH－Px活性和MDA含量的影響 杜仲雄花茶水煎液能增加小鼠肝臟SOD和GSH－Px的活性，減少MDA的產生，并呈一定的量效關系。結果見表2。

表1 杜仲雄花茶對小鼠血清中SOD，GSH-Px活力和MDA含量的影響

表2 杜仲雄花茶對小鼠肝臟中SOD，GSH-Px活力和MDA含量的影響

4 結論與討論

自由基的產生和機體對自由基的清除功能的動態平衡同機體的衰老有著密切的關系，而酶類是機體清除自由基的一種主要物質，主要有超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱苷肽過氧化物酶(GSH－Px)等［6］。隨著年齡的增長，機體清除自由基的能力下降，產生自由基和清除自由基的平衡被破壞，自由基堆積，產生大量代謝產物MDA，對機體產生損害，進而加速機體衰老［7］。因此SOD，GSH－Px含量的高低可以間接反映機體清除自由基的能力，MDA含量的高低可以間接反映細胞的衰老程度。

給小鼠連續注射D－半乳糖，可引起小鼠的糖代謝紊亂，進而使多種組織細胞發生衰老時的退行性變化，而這些變化與自然衰老時出現的自由基代謝紊亂及抗氧化功能降低的特征都極為相似。衰老的自由基學說認為，機體在生理情況下不斷產生自由基的同時，也被體內SOD、GSH－Px、CAT等抗氧化系統所清除，隨著機體的衰老，清除自由基的能力減弱，自由基的產生與清除失去平衡［6］。本實驗證實杜仲雄花茶水煎液可以增加由D－半乳糖引起的衰老小鼠的SOD，GSHPx的活性，減少MDA的產生。從而增強對氧自由基的清除作用，減少體內氧自由基的產生，改善D－半乳糖引起的氧化應激損傷，防止細胞內Ca2+超載從而起到抗氧化，抗衰老的作用。杜仲入藥雖已有2000多年的歷史，但是對杜仲雄花的試驗研究卻很少，對抗氧化抗衰老的研究也鮮有報道，進一步研究有待繼續。

［1］杜紅巖.杜仲優質高產栽培［M］.北京:中國林業出版社，1996.

［2］王丙武，王雅清，莫 華，等.杜仲雌雄株細胞學、頂芽及葉含膠量的比較［J］. 植物學報，1999，41(1):11－15.

［3］張康健，董娟娥，馬柏林，等.杜仲次生代謝物部位差異性的研究［J］.林業科學，2002，38(6):12－16.

［4］杜紅巖，李芳東，杜蘭英.杜仲雄花茶及其加工方法:中國，ZL 98117579.1［P］.2001－10－24.

［5］程郁昕，寧康健，呂錦芳，等.杜仲葉對小鼠中樞鎮靜作用的實驗研究［J］.中國中醫藥科技，2007，14(2):98－99.

［6］陳 瑾，李榮亨.衰老的自由基機制［J］.中國老年學雜志，2004，24(7):677－679.

［7］Das N，Levine R L，Orr W C，et al.Selectivity of protein oxidative damage during aging in Drosophila melanogaster［J］.Biochem J，2001，360:209－216.