冬凌草分散片溶出度測定方法的研究

2011-05-26 01:13:44李其鳳馮柏康李衛民

中成藥 2011年3期

李其鳳，馮柏康，李衛民，肖飛

(廣州中醫藥大學，廣東廣州 510405)

冬凌草分散片是由冬凌草片經改劑型而來，原劑型收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準》［1］中藥成方制劑第3冊，功能主治:清熱消腫，用于急慢性扁桃體炎、咽炎、喉炎、口腔炎，試用于抗癌。大量的實驗與文獻證明［2-5］，冬凌草中的有效活性成分為二萜類，其中以冬凌草甲素、冬凌草乙素抗癌作用最為突出。由于冬凌草甲素、冬凌草乙素在水中的溶解度極低，冬凌草片在服用后很難被身體消化吸收、發揮作用，因此開發其為適用于難溶性成分的分散片劑型。本文以HPLC法測定冬凌草甲素的含量［6-7］，對冬凌草分散片的體外溶出度進行了研究，為冬凌草分散片的快崩速溶作用提供試驗依據，也為進一步臨床研究提供理論依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 ZRS-8G智能溶出試驗儀(天津市天大天發科技有限公司 );Waters 2695泵(美國Waters);Waters 2996二極管陣列檢測器(美國Waters);EMPOWER數據處理軟件系統(美國Waters)。

1.2 試藥冬凌草分散片(自制，批號:090703、090707、090711)。

1.3 對照品冬凌草甲素對照品(中國藥品生物制品檢定所)。

1.4 試劑甲醇為色譜純(德國默克)，水為制備純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 RP-18e(5 μm)LiChroCART 250-4色譜柱，200 mm ×4.6 mm，5 μm;流動相:甲醇-水(50∶50);檢測波長:240 nm;按冬凌草甲素色譜峰計算，理論塔板數不低于3 500。

2.2 線性關系的考察稱取冬凌草甲素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，精密量取1 mL至10 mL量瓶中，加0.1 mol/L的鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，微濾，精密吸取上述對照品溶液 1、2、5、10、15、20 μL，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以對照品進樣量

X(μg)為橫坐標、峰面積值Y為縱坐標，繪制標準曲線，結果冬凌草甲素對照品在0.019 64～0.392 8 μg范圍內具有良好的線性關系，回歸方程為:Y=1 375 484.31X－19 258.69，r=0.999 9。

2.3 系統適應性試驗取冬凌草甲素對照品溶液、供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，可見供試品中冬凌草甲素與其他組分能達到基線分離，見圖1、2。

圖1 冬凌草甲素對照品HPLC圖

圖2 供試品HPLC圖

2.4 溶出方法的選擇［8-9］

2.4.1 溶出方法的選擇

諸暨市的檢調對接工作不僅成效顯著，也得到學界的肯定。有研究者指出，諸暨市人民調解組織介入刑事和解的探索表明，檢察機關與人民調解組織相互發力、優勢互補，凝聚成推動刑事和解內在推動力，不僅避免了檢察機關在調解過程中既當裁判員又當運動員的尷尬局面，而且一定程度上緩解了檢察機關的“人案矛盾”，提高了刑事訴訟效率。[7]

根據藥典要求，溶出方法分為轉籃法與槳法，取冬凌草分散片分別以轉籃法與槳法進行溶出度的測定，溶出介質為0.1 mol/L的鹽酸900 mL，轉速為100轉，分別于45 min取樣，微濾，依法進樣測定。結果見表1。轉籃法測定的溶出度較槳法低，且相對標準平均偏差較大。

表1溶出方法的選擇

結論:試驗結果表明，選擇《中國藥典》2005年版二部附錄X C溶出測定法第二法槳法作為溶出測定方法。

2.4.2 轉速的選擇

取冬凌草分散片按照《中國藥典》2005年版二部附錄X C溶出測定法第二法槳法分別以60、80、100、120 r/min進行溶出度的測定，溶出介質為0.1 mol/L的鹽酸900 mL，分別于45 min取樣，微濾，依法進樣測定。結果見表2、圖3。轉速越大，溶出度越高，當轉速達到100 r/min后，溶出度基本不再增加。選擇100 r/min作為溶出測定的轉速。測定，溶出介質為0.1 mol/L的鹽酸900 mL，轉速為100 r/min，分別于 5、10、15、30、45、60、90、120 min取樣1 mL，微濾，依法進樣測定。結果見表3。冬凌草分散片隨時間的增加，溶出量亦相應增加，但在45 min后，溶出度增加很少，因此，確定溶出時間為45 min。

表2 不同轉速下溶出度的比較/%

圖3 不同轉速下溶出度的比較

2.4.3 溶出曲線

取冬凌草分散片按照《中國藥典》2005年版二部附錄XC溶出測定法第二法槳法進行溶出度的

表3 不同取樣時間的溶出度測定/%

2.5 空白試驗精密稱取缺冬凌草的陰性樣品，按溶出供試品溶液制備方法操作，依法進樣測定，記錄色譜圖。結果在與冬凌草甲素對照品相同保留時間處無吸收峰。表明樣品中無干擾冬凌草甲素的成分存在。

2.7 重復性試驗取一批樣品，按上述溶出度測定方法，測定6次，計算溶出度，求得冬凌草甲素平均溶出度為96.10%，相對標準偏差RSD為1.14%。

2.8 穩定性試驗精密吸取供試品溶液，在室溫下，分別于配制后 0、2、4、6、8、12 h 進行冬凌草甲素峰面積測定，每次進樣10 μL，測得供試品中冬凌草甲素的平均峰面積值為238 214，RSD為1.99%。試驗結果表明，供試品溶液在12 h內基本穩定。

2.9 回收率測定取已知含量的同一批號樣品，除去包衣，研細，取約16 mg，精密稱定，精密加入冬凌草甲素對照品溶液(0.196 4 mg/mL)2 mL，置50 mL量瓶中，加入0.1 mol/L鹽酸溶液約20 mL，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)10 min，放冷，加0.1 mol/L鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，微濾，取續濾液。吸取10 μL，按色譜條件方法，進樣，測定，計算，求得冬凌草甲素平均回收率為100.49%，RSD為1.73%。

2.10 樣品溶出度測定取本品，照溶出度測定法(《中國藥典》2005年版二部附錄X C第二法)，以0.1 mol/L的鹽酸溶液900 mL為溶出介質，轉速為100 r/min，依法操作，經45 min時，取溶液5 mL，微濾，作為供試品溶液。另稱取冬凌草甲素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，精密量取 1 mL至 10 mL量瓶中，加 0.1 mol/L的鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，微濾，作為對照品溶液。吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，進樣測定，計算每片的溶出量。結果見表4。