浸潤性乳腺癌組織ADAM-17蛋白表達的臨床意義

楊星飛，張雪鵬*，趙光明，孫 影，韓 旭

(1河北聯合大學附屬醫院，河北唐山063000;2河北聯合大學基礎醫學部病理教研室)

乳腺癌是婦女最常見惡性腫瘤，近年來其患病率有升高趨勢。以往判斷乳腺癌患者預后的指標有腫瘤大小、臨床分期、組織學分類與分級及淋巴結轉移等。近年研究發現，表皮生長因子受體(EGFR)參與乳腺癌的發生，發展。解聚素—金屬蛋白酶17(ADAM-17)是新近發現的ADAM蛋白家族成員，是EGFR 的配體［1～3］。為探討 ADAM-17 在浸潤性乳腺癌組織中的表達及其與臨床病理的關系，我們進行了相關研究。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2008年10月～2010年1月在河北聯合大學附屬醫院行乳腺癌切除手術的108例女性患者的癌組織標本，患者年齡22～77歲、中位年齡45歲，術前均未進行放、化療及免疫治療。依據2003年WHO制定的乳腺癌組織學分類，診斷為非特殊型浸潤性導管癌82例，非特殊型浸潤性小葉癌13例，特殊型浸潤性乳腺癌13例;82例導管癌的組織學分級為Ⅰ級32例、Ⅱ級36例，Ⅲ級14例。有淋巴轉移52例。根據國際抗癌協會制定的TNM分期，臨床分期為Ⅰ期36例、Ⅱ期49例、Ⅲ期23例。患者行病灶切除手術后，切取其腫瘤組織20 g左右，迅速凍存于－80℃冰箱中。

1.2 檢測方法 應用免疫印跡方法檢測癌組織中的ADAM-17蛋白表達，分別取凍存乳腺癌組織65 mg，稱重、粉碎，低溫下 1 2000 r/min、4 ℃ 離心 20 min，取上清液。實驗設標準管、樣品管、空白管，在波長650 nm條件下測定總蛋白的OD值后計算出其濃度。取50 μl蛋白樣品，7.5%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，150 V、1.5 h。轉膜至聚偏氟乙烯膜上，用TBS液洗膜，5%脫脂奶粉封閉1 h。Tween20三羥甲基氨基甲烷溶液洗滌3次，5 min/次，分別加入兔抗人ADAM-17多克隆一抗、羊抗兔IgG二抗，室溫孵育，加入堿性磷酸酶底物，顯色液顯色，用掃描儀掃描成像。ADAM-17蛋白在100 kD(活性蛋白)和120 kD(前體蛋白)處顯示特異性條帶;設分子量為42 kD的β-actin為內參。實驗所得Western blot條帶由Photoshop軟件處理，在Bandscan分析軟件中測得100 kD的灰度值，進行定量比較分析，且采用自身β-actin灰度值校正。

1.3 統計學方法 采用SPSS15.0統計軟件，數據以±s表示。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

乳腺癌組織中ADAM-17蛋白表達及其與臨床病理特征的關系見表1。

表1 乳腺癌組織中ADAM-17蛋白表達及其與臨床病理特征的關系(±s)

表1 乳腺癌組織中ADAM-17蛋白表達及其與臨床病理特征的關系(±s)

臨床病理特征 n ADAM-17P組織學分型108非特殊型浸潤性導管癌 82 0.383±0.026非特殊型浸潤性小葉癌 13 0.382±0.021 ＞0.05特殊型浸潤性乳腺癌 13 0.387 ±0.025組織學分級 82Ⅰ級 32 0.382 ±0.016Ⅱ級 36 0.384 ±0.019 ＜0.05Ⅲ級 14 0.387 ±0.029臨床分期 108Ⅰ期 36 0.372 ±0.015Ⅱ期 49 0.385 ±0.016 ＜0.01Ⅲ期 23 0.398 ±0.029淋巴結轉移 108無56 0.377 ±0.016 ＜0.01有52 0.393 ±0.029

3 討論

ADAM-17是ADAMs家族成員，因其參與TNF-α、轉化生長因子-α(TGF-α)、解聚素、肝素—表皮生長因子、雙調蛋白等生物配體釋放，且這些生物配體的形成、脫落在腫瘤發生、發展、轉移方面發揮重要作用，故ADAM-17是ADAMs家族成員中研究最廣泛的因子。Suganuma等研究證明，在致癌因素暴露下，缺乏TNF-α的大鼠易患皮膚癌。EGFR在癌細胞轉移、分化和血管生成起重要作用，目前，臨床上已經有以EGFR為靶點的抗癌治療藥物。Gschwind等［4］發現，ADAM-17 可脫落像 TGF-α、肝素—表皮生長因子一樣的因子，故認為ADAM-17是表皮生長因子家族受體，尤其是EGFR轉化激活劑。ADAM-17可介導釋放特異性EGFR配體，配體與表皮生長因子結合后激活EGFR，導致組織上皮過度增生紊亂，進而發展成癌癥［5］。體外實驗證明，激活的EGFR可促進腫瘤細胞分化增殖和不同細胞株轉移［6］。現已證實［7］，ADAM-17蛋白在肝癌、卵巢癌、大腸癌等惡性腫瘤組織中過度激活及表達。

目前，對ADAM-17蛋白在乳腺腫瘤組織中的表達研究較少。本研究顯示，乳腺癌組織ADAM-17蛋白表達與其組織學分級、臨床分期和有無淋巴結轉移相關，與組織學類型無關。提示ADAM-17蛋白表達上調可能對促進乳腺細胞異常增殖、惡性轉化起重要作用，ADAM-17蛋白持續表達可能參與乳腺癌的惡性發展過程，成為反映乳腺癌惡性程度的參考指標之一。

綜上所述，本研究認為ADAM-17蛋白可能促進浸潤性乳腺癌的發生、發展，檢測其表達水平可作為乳腺癌轉移、復發的預測指標之一，對腫瘤的預防、早期診斷、治療和預后評定均有重要意義。

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