真菌對 UF-1000i全自動尿沉渣分析儀白細胞檢測的影響

莫 筠，陳玉蓮，譚洪揚，黃碧紅

(臺山巿人民醫院，廣東臺山 529200)

全自動尿沉渣分析儀因其操作簡便、快捷、重復性好等優點，在臨床檢驗上廣泛應用。但在實際工作發現，真菌可影響全自動尿沉渣分析儀對尿中白細胞的檢測。2010年 1～12月，我們對此問題進行了研究。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 Sysmex-UF-1000i全自動尿沉渣分析儀及其配套試劑(日本 Sysmex公司生產，含其質控和校正試劑，校正及每日質控在有效范圍內);CH-20雙目顯微鏡(日本 Olympus公司);改良牛鮑計數板。

1.2 方法

1.2.1 底液及各母液的制備 選擇 pH 5.5～7.0、尿液密度 1.010～1.025 kg/L，其余尿十項檢查均為陰性的尿標本，用 4 000 r/min離心 10 min，取上清液作為底液 A。取 3份同血型正常血常規標本各 1 ml混合，用生理鹽水離心洗滌 3次，3 000 r/min離心 3 min，去其上清，作為紅細胞母液BR。取 2份化膿性腦膜炎患者新鮮腦脊液標本，用生理鹽水進行離心，1 500 r/min離心 2 min，去上清，作為白細胞母液 BW。取白色念珠菌 ATCC90028作為標準菌株，經培養后，取 10個以上菌落，用生理鹽水洗滌 3次，3 000 r/min離心 3 min去上清，作為真菌母液BY。

1.2.2 實驗分組及檢測指標 將上述 3種母液用底液 A重懸，使用牛鮑計數板進行充池計數 5次，調整其中各成分，使 3種純母液中各自成分濃度接近 4 000個 /μl，分別記為 BR、BW、BY。將實驗組分為白細胞—紅細胞(WBC-RBC)混合尿組、白細胞—紅細胞—真菌(WBC-RBC-YLC)混合尿組。按實驗設計用不同量的底液 A和不同量的 BR、BW、BY進行混合，使上述各組中 WBC、RBC、白色念珠菌含量理論值接近 50/μl、100/μl、200/μl、500/μl、1 000/μl、2 000/μl(WBC-RBC-YLC混合組為 1 333/μl)，總量為 5 ml。將各組中不同濃度的實驗標本輕輕混勻，用 UF-1000i對每份標本進行 5次平行檢測，記錄其 WBC、RBC、YLC(酵母樣菌 )、細菌 (BACT)檢測結果。整個實驗在 3 h內完成。

1.3 統計學方法 采用 SPSS11.0統計軟件，結果以±s表示，兩樣本的比較采用t檢驗，多個樣本均數比較用方差分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 WBC-RBC混合尿各有形成分的檢測 UF-1000i對無真菌的 WBC-RBC混合尿中各細胞計數準確可靠，儀器無報警提示，出現 BACT不排除是上述 WBC母液中含有所致。結果見表1。

2.2 WBC-RBC-YLC混合尿的檢測 當混合尿中各成分濃度較低時，真菌主要對 RBC計數有干擾，在理論值≥500個/μl濃度組中，YLC對 WBC計數有干擾，使 WBC計數假性升高，且在理論值1 000個 /μl和 1 333個 /μl(因各成分母液為 4 000個/μl，三者混合時最高濃度為 1 333個 /μl)兩組中，均出現真菌計數為 0個/μl。結果見表2。

表1 WBC-RBC混合尿中各成分比較(個 /μl，±s)

表1 WBC-RBC混合尿中各成分比較(個 /μl，±s)

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表2 WBC-RBC-YLC混合尿標本檢測結果(個 /μl，±s)

表2 WBC-RBC-YLC混合尿標本檢測結果(個 /μl，±s)

理論值 WBC RBC YLC BACT 50 44.45±1.18 83.30±3.25 20.88±1.55 18.34±3.52 100 92.60±2.39 152.72±4.64 42.72±4.74 35.64±4.82 200 180.62±7.05 312.28±10.08 64.34± 3.37 52.64±8.65 500 528.70±5.38 743.38±15.98 154.48±11.24 121.02±10.88 1 000 1 054.36±15.64 1 470.18±20.82 0 227.32±18.56 1 333 1 336.46±19.60 1 835.34±29.02 0 269.65±20.45

3 討論

UF-1000i全自動尿沉渣分析儀利用流式細胞和電阻抗分析的原理，對尿中各有形成分進行熒光染色后，檢測其熒光強度信號，從而區分各有形成分并計數[1]。但尿中有形成分復雜多變，不同成分可有相似之處，故其計數可受干擾。真菌，特別是酵母樣菌，其體積大小和紅細胞相似，紅細胞無細胞核和線粒體呈低熒光強度，而真菌具有高熒光強度的RNA和 DNA，但散射光強度與紅、白細胞相似，故其散點分布在紅、白細胞之間的區域，常和紅細胞散點有交叉重疊。

本研究結果發現，真菌對白細胞計數的干擾可分為 2方面:①當尿液中只含有真菌時，儀器可將真菌誤計為“白細胞”和“紅細胞”，不同濃度的純真菌尿均可出現此現象，甚至將真菌誤計為“0個 /μl”，造成真菌的假陰性和白細胞的假陽性出現。儀器的分類、計數明顯與標本中的成分不符。②當真菌尿液標本中同時含有白細胞或紅、白細胞，在白、紅細胞≤200個 /μl，即白細胞濃度較低時，儀器對白細胞的識別和計數準確無誤，而且不隨著真菌濃度的升高而出現白細胞計數的假性升高，儀器此時主要是在對紅細胞的計數出現錯誤。當白細胞和真菌的濃度≥500個/μl，即白細胞濃度較高時，真菌對混合尿中白細胞計數有干擾，造成其假性升高，故尿中有形成分組成和濃度對白細胞造成的干擾是不同的。

無論是純真菌尿或含紅、白細胞的真菌混合尿，均可出現對真菌計數為 0個/μl，而只計數為“紅細胞”和“白細胞”的情況，且可隨著尿中成分濃度的升高出現次數增加，造成真菌計數的假陰性，這可能與儀器在檢測時真菌的熒光染色失敗或超出儀器的檢測范圍有關，確切原因有待進一步探討。

本實驗不采用靜脈血中的白細胞制備母液，是因為靜脈血經離心后取得的白細胞層中往往含多少不等的紅細胞和大量的血小板，且經離心后尚具活性的白細胞相互黏附成團，經顯微鏡檢查，只有少數白細胞是單個存在，且其中大量的血小板也極可能對尿沉渣的檢測造成干擾。膿尿中雖然有大量的白細胞，但通常同時有大量的細菌存在，為避免其對紅細胞或白細胞造成干擾，本實驗取化膿性腦膜炎患者新鮮腦脊液，鏡檢細胞以中性粒細胞為主，偶見革蘭陰性雙球菌，故經低速離心洗滌，制備白細胞母液。雖然表1中細菌的計數與白細胞計數呈正的直線相關，但其數量極低，對儀器檢測紅、白細胞無影響[2，3]。

綜上所述，對 UF-1000i尿沉渣分析儀的檢測結果，應從其有形成分的測量值和散點圖、直方圖是否相對應來綜合判斷其結果的可靠性。雖然UF-1000i提供白細胞相關檢測參數不多，但當儀器出現報警提示，或雖無報警提示但散點圖上特定位置出現異常散點時，都要對標本進行人工鏡檢復查，確保尿沉渣結果的準確性，避免對臨床的診治工作造成干擾。

[1]熊立凡，李樹仁.臨床檢驗基礎[M].3版.北京:人民衛生出版社，2005:191-193.

[2]黃松音，黃雪瓊，謝文鋒，等.菌尿對兩種全自動尿沉渣分析儀檢測尿紅細胞的影響[J].檢驗醫學與臨床，2010，7(14):1440-1444.

[3]陳忠，鄒曉月，袁立新.UF-100尿沉渣分析儀和干化學檢測尿中紅細胞和白細胞及管型的干擾因素分析[J].中國實驗診斷學，2008，12(4):534-537.