血管緊張素轉換酶基因多態性對肥胖兒童脂質代謝的影響

郎 瓊，劉長云，朱海玲，李 梅，陳 雪

(濰坊醫學院臨床學院，山東濰坊 261031)

2000年肥胖癥被 WHO定義為全球范圍的流行病。眾多學者認為，與肥胖有關的代謝紊亂、心血管疾病的早期改變可能從兒童時期就已經開始[1]。2009年 8月 ～2010年 7月，我們觀察了肥胖兒童血管緊張素轉換酶(ACE)基因的多態性及其與脂質代謝的關系，旨在進一步探討兒童肥胖癥的發病機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇 2009年 8月 ～2010年7月在我院兒科就診、住院及學生體檢時發現的 6～14歲肥胖兒童 116例(觀察組，男 68例，女 48例)及健康兒童 78例(對照組，男 42例，女 361例)。臨床均排除與遺傳、內分泌、代謝及中樞神經系統有關的肥胖及肥胖綜合征，血脂異常所致的全身性疾病。采用WHO推薦的兒童標準身高、體質量值為參照人群。凡體質量超過按身高計算的平均標準體質量 20%者定為肥胖。

1.2 方法

1.2.1 血脂水平測定 受試者禁食 12 h，抽取外周靜脈血 7 ml，其中 2 ml應用日本產 AU600 Olympus自動生化分析儀測定 TC、TG、LDL-C及 HDL-C。另外 5 ml用于提取 DNA。

1.2.2 ACE基因檢測 ACE基因序列引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。抽取靜脈血5 ml，0.5%EDTA-Na21 ml抗凝。常規方法提取基因組 DNA，并用島津 UA-150可見紫外分光光度計檢測基因組 DNA的濃度和純度。反應體系包括:10×Buffer 5 μl，2 mmol/L dNTP 5 μl，引物各 1 μl，TaqDNA多聚酶 0.125 μl，25 mmol/L MgCl23 μl，模板 DNA 1μl，加 ddH2O至 50μl?；靹虿⑤p輕震蕩后放入 PCR擴增儀(9600型擴增儀)，94℃預變性5 min，94℃變性 1 min，58℃變性 1 min，72℃延伸1 min，30個周期的循環，最后 72℃延伸 5 min。PCR產物檢測用 2%的瓊脂凝膠電泳鑒定提取物，用 DL2000Marker做核酸相對分子質量標準，EB染色，將擴增產物和 Marker放入不同凝膠孔并在恒壓120 V電泳 20 min。然后在波長紫外燈下觀察目的條帶，將所需條帶拍照。DNA序列分析根據電泳結果，取 ACE基因的 3種基因型樣本的 PCR產物各100μl作為測序標本，在 ABI-377測序儀上進行，由上海生工生物工程技術服務有限公司完成 。

1.3 統計學方法 采用 SPSS13.0統計軟件。組間計數資料比較采用 χ2檢驗，計量資料采用 t檢驗或F檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血脂水平 兩組血脂水平比較見表1。

表1 兩組血脂水平比較(mmol/L，±s)

表1 兩組血脂水平比較(mmol/L，±s)

注:與對照組比較，*P＜0.01，△P＜0.05

觀察組1161.58±0.47*3.89±0.63△ 1.20±0.45*2.03±0.42△對照組 781.36±0.52 3.68±0.49 1.42±0.43 1.89±0.36

2.2 ACE基因及其多態性 PCR擴增后的產物經酶切后發現有 2個基因片段，分別為 190 bp(D)和490 bp(I)。構成 3種基因型 ，分別為 DD、DI、II。詳見表2。

2.3 不同 ACE基因型肥胖兒童的血脂水平 見表3。

表2 兩組ACE基因型及基因頻率(%)

表3 不同ACE基因型肥胖兒童血脂水平(mmol/L，±s)

表3 不同ACE基因型肥胖兒童血脂水平(mmol/L，±s)

注:與 II型比較，*P＜0.01，△P＜0.05

基因分型 n TG TC HDL-C LDL-C DD型 45 1.73±0.53* 4.09±0.51* 1.09±0.46* 2.17±0.48*DI型 37 1.67±0.59* 3.92±0.48△ 1.16±0.47△ 2.13±0.41*II型 34 1.32±0.55 3.65±0.53 1.42±0.50 1.67±0.51

3 討論

高脂血癥是高血壓、冠心病等心腦血管疾病的獨立危險因素[2]。本研究發現肥胖兒童較健康兒童 TC、TG、LDL-C水平明顯升高，HDL-C水平降低，與國外眾多研究一致[3，4]。提示肥胖兒童已有明顯脂質代謝紊亂。

人類 ACE基因位于 17q23，全長 21 kb，含 26個外顯子和 25個內含子。近年研究發現 ACE基因存在多態性，其中具有生物學意義的是第16內含子 I/D多態性。ACE是一種哺乳動物組織中普遍存在的 Zn2+依賴型羧基二肽酶，為膜整合單鏈蛋白，分子量為 13～16萬。傳統觀點認為 ACE基因多態性影響高血壓、冠心病等心腦血管疾病發生率的可能機制為 ACE基因多態性導致血清 ACE水平不同，ACE是腎素—血管緊張素系統和緩激肽系統的關鍵酶，可將 AngⅠ轉化為 AngⅡ，使緩激肽失活從而導致血管收縮，加壓作用增強，局部組織的血流減少;心肌和血管平滑肌內的蛋白合成增多、增生肥厚，進而促使動脈粥樣硬化的發生。另外，可直接作用于腎上腺皮質，促進醛固酮的分泌，進而影響腎小管和集合管對 Na+的重吸收，促進對 K+的分泌，調節水鹽代謝。在心血管疾病的發病中起關鍵作用[5]。多項研究證明，ACE基因 I/D多態性與血清ACE水平顯著相關，基因型為 DD者血清 ACE含量顯著高于 II基因型者，基因型為 DI者介于二者之間[6]。

本研究結果顯示，ACE不同基因型者的血脂水平存在差異，表現為 DD型肥胖兒童具有較高的血脂水平，與張賽丹等[7]研究結果一致，提示 ACE不同基因型影響心血管疾病的發生率可能是通過調節血脂水平進行的。對 D等位基因的肥胖患兒的血脂水平應盡早干預。

[1]聶景蓉，高清源，譚章喜，等.常德市少年兒童肥胖癥及相關疾病的流行病學調查[J].衛生職業教育，2010，28(7):110-112.

[2]周海歌.單純性肥胖癥對兒童健康的損害[J].中國臨床康復，2006，10(12):157-159.

[3]Park KS，Lee YS，Park HW，et al.Factors associated or related to pathological severity of nonalcoholic fatty liver disease[J].Korean J Intern Med，2004，19(1):19-26.

[4]Rita KA，Andre T，Khosrow A.Emergence of the metabolic syndrome in children an epidemiological overview and mechanistic link to dyslipdemia[J].Clin Biochem，2003，36(4):413-420.

[5]Kim K.Association of angiotensin-converting enzyme insertion/deletion polymorphism with obesity，cardiovascular risk factor and exercise-mediated changes in Korean women[J].Eur J Appl Physiol，2009，105(6):879-887.

[6]劉麗華，徐波，徐應軍，等.血管緊張素轉換酶基因多態性與血管緊張素轉換酶和血管緊張素Ⅱ水平的關系[J].中國醫藥，2007，2(4):195-197.

[7]張賽丹，桂慶軍，裴志芳，等.血管緊張素轉換酶基因多態性對血管緊張素轉換酶水平及血脂的影響[J].中國動脈硬化雜志，2004，12(3):343-346.