雷公藤多甙對(duì) DN大鼠腎組織中Ⅳ型膠原表達(dá)的影響

陳運(yùn)芬，宋 軍

(貴州省人民醫(yī)院，貴陽(yáng) 550002)

近年研究認(rèn)為[1]，炎癥反應(yīng)、免疫因素在糖尿病腎病(DN)發(fā)病中有重要作用。中藥雷公藤多甙具有獨(dú)特抗炎、抗免疫作用，被廣泛用于免疫性疾病的治療中。Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的重要生化成分，也是腎小球基底膜(GBM)的主要構(gòu)成蛋白，Ⅳ-C合成和降解異常參與腎小球硬化的發(fā)生過(guò)程。2006年 6～8月，我們觀察了雷公藤多甙對(duì) DN大鼠腎組織中Ⅳ-C表達(dá)的影響，旨在尋找治療 DN的新途徑。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雄性 SD大鼠 24只，體質(zhì)量(250±20)g;雷公藤多甙，蒸餾水，鏈脲佐菌素(STZ);光學(xué)顯微鏡(100×，400×)、高溫速離心機(jī)、電熱恒溫水浴箱、CM-120透射電子顯微鏡、PCR儀。

1.2 動(dòng)物分組及處理 將 24只 SD大鼠隨機(jī)分為觀察組、模型組及對(duì)照組各 8只，觀察組及模型組均經(jīng)尾靜脈注射 STZ 65 mg/kg，72 h后取大鼠尾靜脈血 、留取 24 h尿 ，血糖 ＞16.65 mmol/L、尿蛋白排泄＞30 mg/24 h為 DN制模成功[2，3]。確定 DN制模成功后觀察組予雷公滕多甙 10 mg/kg+2 ml蒸餾水灌胃，模型組及對(duì)照組予等量(約 2 ml)蒸餾水灌胃 ，均為 1次 /d、連續(xù) 8周 。

1.3 內(nèi)生肌酐清除率(CCr)及 24 h尿蛋白測(cè)定 給藥 8周末，用代謝籠收集各組 24 h尿液，采用放免法測(cè) 24 h尿白蛋白、測(cè)尿肌酐(U)和血肌酐(P)、全部尿量 V(ml)，按公式 U×V/P(ml/min)計(jì)算 CCr。

1.4 腎組織中Ⅳ-C表達(dá)檢測(cè) 各組上述標(biāo)本取畢后處死動(dòng)物，取腎組織固定、脫水、浸蠟、包埋、切片(厚度 4μm)。用免疫組化法檢測(cè)Ⅳ-C表達(dá)，常規(guī)光鏡下組織呈棕褐色者為陽(yáng)性，根據(jù)顯色深淺和陽(yáng)性顆粒分布分為 4級(jí)，陰性指高倍鏡下(400×)下無(wú)陽(yáng)性顆粒，+指高倍鏡下(400×)有極少陽(yáng)性顆粒，2+指低倍鏡(100×)下有少量、散在陽(yáng)性顆粒，3+指低倍鏡下有大量呈片狀分布的陽(yáng)性顆粒。均采用雙盲法，每組各測(cè)不同部位腎小球、腎小管各 40個(gè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料用±s表示、組間比較行 t檢驗(yàn)，等級(jí)資料樣本間比較用秩和檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 CCr及 24 h尿蛋白 三組給藥 8周末 CCr及24 h尿蛋白檢測(cè)情況見(jiàn)表1。

表1 三組給藥 8周末 CCr及 24h尿蛋白比較(n=8，±s)

表1 三組給藥 8周末 CCr及 24h尿蛋白比較(n=8，±s)

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.05;與模型組比較，△P＜0.05

組別 CCr(ml/min) 尿白蛋白 (mg/24 h)觀察組 0.46±0.18*△ 12.21±8.36*△模型組 0.96±0.31* 18.65±6.17*對(duì)照組 0.12±0.21 4.21±1.58

2.2 腎組織中Ⅳ-C表達(dá) 模型組腎小球、腎小管中Ⅳ-C表達(dá)均明顯高于對(duì)照組，觀察組腎小球中Ⅳ-C表達(dá)顯著低于模型組(P均 ＜0.05)，觀察組和模型組腎小管中Ⅳ-C表達(dá)無(wú)顯著差異，見(jiàn)表2。

3 討論

DN是糖尿病的嚴(yán)重并發(fā)癥，也是其重要死因，為我國(guó)終未期腎病第二大病因，治療效果差。研究顯示，DB早期即有 GBM增厚、腎小球結(jié)構(gòu)及濾過(guò)功能改變。Ⅳ-C是 GBM的基本構(gòu)架及主要構(gòu)成蛋白，約占GBM干體質(zhì)量的50%，可決定GBM的強(qiáng)度及孔徑選擇性。故Ⅳ-C合成和(或)降解異常，勢(shì)必影響腎臟結(jié)構(gòu)與功能。蛋白尿是糖尿病、進(jìn)展性腎臟病的一種獨(dú)立危險(xiǎn)因素，直接針對(duì)蛋白尿的干預(yù)性治療已成為目前慢性腎臟病治療的主要方法之一[4]。

表2 三組給藥 8周末腎組織中Ⅳ-C表達(dá)比較(n=8，±s)

表2 三組給藥 8周末腎組織中Ⅳ-C表達(dá)比較(n=8，±s)

組別 腎小球(n=40)腎小管(n=40)- 1+ 2+ 3+- 1+ 2+ 3+對(duì)照組 7 23 9 1 8 32 0 0模型組 4 7 11 18 9 27 4 0觀察組 7 23 8 2 30 7 3 0

雷公藤多甙是自衛(wèi)矛科植物雷公藤的去皮根部經(jīng)提煉和反應(yīng)精制而成，具有較強(qiáng)的抗炎及免疫抑制作用，常用于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征等的治療。石詠軍等[5]運(yùn)用雷公藤多苷治療早中期 DN的臨床研究表明，雷公藤多苷可顯著降低患者 24 h尿蛋白定量、尿 β2微球蛋白和血肌酐;另有研究顯示，對(duì)大量蛋白尿所致 DN患者加用雷公藤治療后蛋白尿明顯減少[6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，觀察組和模型組 CCr及24 h尿蛋白均顯著低于對(duì)照組，其中觀察組顯著低于模型組;模型組腎小球、腎小管中Ⅳ-C表達(dá)均明顯高于對(duì)照組，觀察組腎小球中Ⅳ-C表達(dá)顯著低于模型組。可能機(jī)制:①雷公藤多甙具有獨(dú)特的抗炎及免疫抑制作用，可抑制細(xì)胞周期多個(gè)階段 T淋巴細(xì)胞增生，抑制 IL-2、IL-6、IL-8產(chǎn)生。②雷公藤可能通過(guò)作用于 NF-кB抑制腎小管上皮細(xì)胞合成 MCP-1及血栓素 A2，從而影響共刺激分子表達(dá)、抑制腎小球系膜細(xì)胞增生及分泌Ⅳ-C，并改變腎小球基底膜的電荷狀態(tài)，阻止尿蛋白濾出。

綜上所述，雷公藤多苷可改善 DN大鼠腎功能，可能機(jī)制為降低腎小球組織中Ⅳ-C表達(dá);此為DN治療提供了理論依據(jù)。

[1]Tuttle KR.Linking metabolism and immunology:diabetic nephropathy is an inflammatory disease[J].J Am Soc Nephrol，2005，16(6):1537-1538.

[2]汪深穎，司馬義.薩依木，等.糖尿病腎病大鼠胰基因組 DNA甲基化壯態(tài)的變化[J].北京師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2002，38(3):395-398.

[3]黃頌敏，陳澤君，楊亦彬，等.血管生成素及其受體、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與糖尿病腎臟微血管病變的關(guān)系[J].中華腎臟病雜志，2006，22(9):521-527.

[4]陸再英，鐘南山.內(nèi)科學(xué)[M].7版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:495.

[5]石詠軍，劉征宇，王川，等.雷公藤多苷治療早中期糖尿病腎病的臨床研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，15(8):987-988.

[6]張長(zhǎng)明，周家俊.雷公藤多苷片對(duì)糖尿病腎病患者大量蛋白尿的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志，2005，6(11):654-655.