HPLC法測定鹽酸二甲雙胍緩釋片中鹽酸二甲雙胍的含量

李 藝 ，王 紅 ，張良珂，趙春景，張景勍#.重慶醫科大學高校藥物工程研究中心和生物化學與分子藥理重點實驗室，重慶市 40006；.重慶醫科大學附屬第二醫院，重慶市 40000）

鹽酸二甲雙胍為雙胍類降糖藥，具有提高2型糖尿病患者的血糖耐受性，降低基礎和餐后血糖的作用[1]，是飲食和運動不能控制的2型糖尿病患者的首選處方藥物，也是國家基本藥物目錄中收載的品種。鹽酸二甲雙胍除降低血糖外，還具有降低甘油三酯、膽固醇、極低密度脂蛋白，增加纖維蛋白溶解的作用，可預防及減少糖尿病的并發癥，利于糖尿病的長期治療[2]。2010年版《中國藥典》（二部）[3]中鹽酸二甲雙胍原料藥和片劑均采用紫外分光光度法測定其含量，筆者則嘗試采用高效液相色譜（HPLC）法測定鹽酸二甲雙胍緩釋片中二甲雙胍的含量。

1 儀器與試藥

LC-2010A HT HPLC儀（日本島津公司）；pHS-3C型pH測定儀（上海精科儀器有限公司）；AB204-E分析電子天秤（瑞士Mettler Toledo儀器公司）；KQ2200超聲清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）。

鹽酸二甲雙胍對照品（天津中新藥業有限公司）；二甲雙胍緩釋片（海南海力制藥有限公司，批號：090502、100801、100102）；乙腈、庚烷磺酸鈉為色譜純，試驗用水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.05%庚烷磺酸鈉溶液（用磷酸溶液調節pH至4.0）-乙腈（84∶16）；檢測波長：233 nm；流速：1.0 mL·min－1；進樣量：20 μL；柱溫：30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱量干燥至恒重的鹽酸二甲雙胍對照品10.70 mg，加流動相溶解后，轉移至10 mL容量瓶中，定容。精密量取上述溶液1.0 mL，置于100 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為10.70 μg·mL－1的貯備液，臨用時用流動相稀釋。

2.2.2 樣品溶液的制備 取二甲雙胍緩釋片20片，精密稱定，研細，精密稱取細分適量（約含鹽酸二甲雙胍5.25 mg），加流動相溶解后，轉移至1000 mL容量瓶中，定容，再用0.22 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2.3 空白溶液的制備 另按處方比例制備不含鹽酸二甲雙胍的空白樣品，按“2.2.2”項下方法制成空白溶液。

2.3 系統適用性試驗

分別精密吸取“2.2.1，2.2.2，2.2.3”項下溶液各20 μL，注入HPLC儀中，按“2.1”項下色譜條件進樣分析，記錄色譜圖。結果，樣品溶液在與對照品溶液相同位置有吸收峰，而輔料對被測成分無干擾。色譜見圖1。

2.4 線性關系考察

圖1 高效液相色譜圖A.空白 ；B.樣品 ；C.對照品；1.鹽酸二甲雙胍（tR＝7.6 min）Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank；B.sample；C.reference substance；1.metformin hydrochloride（tR＝7.6 min）

精密量取“2.2.1”項下貯備液0.1、0.5、2.5、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，并用流動相稀釋至刻度。取上述溶液和貯備液20 μL，注入HPLC儀中，按“2.1”項下色譜條件進樣分析，記錄峰面積。以峰面積（A）對濃度（C，μg·mL－1）繪制標準曲線，得線性回歸方程A＝94291C－35840（r＝0.9997）。結果表明，鹽酸二甲雙胍檢測濃度在0.11～10.70 μg·mL－1范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

2.5 精密度試驗

取鹽酸二甲雙胍對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別連續進樣5次，記錄峰面積。結果，RSD＝0.67%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一批號樣品溶液，分別放置0、2、4、8、12、24 h后進樣測定，記錄峰面積。結果，RSD＝1.50%，表明樣品溶液在24 h內穩定性良好，詳見表1。

表1 穩定性試驗（n＝3）Tab 1 Results of stability tests（n＝3）

2.7 重復性試驗

取同一批號樣品溶液5份，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，計算含量。結果，RSD＝0.75%，說明重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的同批樣品細粉適量，加入流動相溶解后，轉移至100 mL容量瓶中，用流動相稀釋并定容至刻度，用0.22 μm微孔濾膜過濾，取續濾液作為樣品加樣回收率貯備液。取樣品加樣回收率貯備液1 mL，分別置于9個10 mL容量瓶中，并分別加入鹽酸二甲雙胍對照品溶液3、4、5 mL各3份，用流動相稀釋并定容至刻度。按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算回收率，結果見表2。

2.9 樣品含量測定

取3批樣品各20片，按“2.2.2”項下方法制備成樣品溶液，精密量取20 μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，并計算樣品中鹽酸二甲雙胍含量。測得3批樣品中主藥含量為每片524.83、524.96、524.76 mg，標示含量為 99.95%、100.13%、99.87%，RSD分別為1.05%、0.37%、0.52%。

表2 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 2 Results of recovery tests（n＝9）

3 討論

取鹽酸二甲雙胍對照溶液在200～400 nm波長處掃描，發現在233 nm波長處有最大吸收，所以選233 nm為檢測波長。本試驗考察了乙腈-庚烷磺酸鈉溶液、乙腈-磷酸系統、乙腈-磷酸鹽緩沖系統等不同流動相，結果發現以0.05%庚烷磺酸鈉溶液（用磷酸溶液調節pH至4.0）-乙腈（84∶16）為最優，柱效高，保留時間適中[4～8]。

綜上所述，本試驗采用HPLC法測定鹽酸二甲雙胍緩釋片中鹽酸二甲雙胍的含量，與紫外分光光度法比較[9]，測定結果更準確可靠，重復性好，可用于鹽酸二甲雙胍緩釋片的質量控制。

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