酸棗仁總黃酮抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究*

趙啟鐸，舒樂(lè)新，王 穎，牟佳佳，宋志國(guó)，李金梅

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津300193；2.吉林敖東集團(tuán)大連藥業(yè)股份有限公司，大連 116043）

酸棗仁總黃酮抗抑郁作用的實(shí)驗(yàn)研究*

趙啟鐸1，舒樂(lè)新1，王 穎1，牟佳佳1，宋志國(guó)2，李金梅2

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津300193；2.吉林敖東集團(tuán)大連藥業(yè)股份有限公司，大連 116043）

[目的]研究酸棗仁總黃酮對(duì)行為絕望小鼠抑郁模型的影響。[方法]采用小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)等抑郁模型，小鼠行為絕望的不動(dòng)時(shí)間作為指標(biāo)，考察酸棗仁總黃酮抗抑郁活性。[結(jié)果]酸棗仁總黃酮低、中、高劑量組均能減少小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾不動(dòng)時(shí)間，與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與陽(yáng)性藥組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。[結(jié)論]酸棗仁總黃酮具有顯著的抗小鼠實(shí)驗(yàn)性抑郁作用。

酸棗仁；總黃酮；抗抑郁；行為絕望

酸棗仁（Semen Ziziphi Spinosas)為鼠李科植物酸棗[ZiziphusjujubaMill.var.Spinosa(Bunge)HUexH.F.Chow]的干燥成熟種子，具有補(bǔ)肝、斂汗、寧心、生津的功能，用于虛煩不眠、體虛多汗、驚悸多夢(mèng)、津傷口渴等證，《本草綱目》將其列為上品。酸棗仁是一種療效確切，不良反應(yīng)小的中藥材，臨床用于治療多種類(lèi)型失眠癥和神經(jīng)衰弱[1]。目前中醫(yī)治療抑郁癥以疏肝健脾、養(yǎng)心安神復(fù)方為主，臨床研究表明：抑郁癥患者在情緒低落的同時(shí)，常表現(xiàn)出心煩意亂，甚至焦慮、躁狂等特征。有80%的患者還可出現(xiàn)嚴(yán)重的失眠，因此采用安神開(kāi)竅中藥治療實(shí)屬必要[2]。近年來(lái)的研究表明酸棗仁具有抗抑郁的藥理活性[3-5]。本研究采用國(guó)際通用的行為絕望小鼠抑郁模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，從行為學(xué)角度觀察酸棗仁總黃酮的抗抑郁作用。

1 材料與方法

1.1 一般材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性昆明種小鼠（20±2）g，SPF級(jí)，購(gòu)自天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司，合格證號(hào)：SCXK（津）2009-0001，在飼養(yǎng)環(huán)境下適應(yīng)1周后使用。

1.1.2 藥品及試劑 炒酸棗仁購(gòu)自天津中新藥業(yè)集團(tuán)有限公司，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室張麗娟教授鑒定；鹽酸氯米帕明片，北京諾華制藥有限公司產(chǎn)品，批號(hào)X0026，規(guī)格25mg/片，用前用2%吐溫-80水溶液配制成1 g/L，備用。

1.1.3 儀器及裝置 XZC-4小鼠自主活動(dòng)測(cè)定儀，黑龍江省牡丹江市中華電器廠產(chǎn)品，實(shí)驗(yàn)材料懸尾裝置自制，木棒上用木板隔離成4個(gè)分區(qū)，用膠帶固定鼠尾。強(qiáng)迫游泳所需的2 000mL燒杯7個(gè)。BP211D 1/105分析天平，上海君達(dá)儀器廠；秒表，瑞士霍耶爾-奧利達(dá)斯廠。

1.2 方法

1.2.1 酸棗仁總黃酮的制備 酸棗仁藥材，粉碎過(guò)20目篩，4倍量乙醇超聲提取3次，每次40min，合并提取液，回收溶劑至浸膏，浸膏分散于水，分別用石油醚、氯仿、正丁醇萃取，取正丁醇萃取部分，溶于水經(jīng)D101型大孔樹(shù)脂純化，15%乙醇、35%乙醇、65%乙醇洗脫，取35%乙醇洗脫液回收，真空干燥，得總黃酮粉末。經(jīng)含量測(cè)定[6]，提取物中總黃酮的含量為60.86%。總黃酮粉末用2%吐溫-80溶液分別配制成一定濃度，備用。

1.2.2 動(dòng)物分組及處理 取小鼠60只，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為空白對(duì)照組、鹽酸氯米帕明組、酸棗仁總黃酮低、中、高劑量組。鹽酸氯米帕明劑量為25mg/kg；酸棗仁總黃酮低、中、高劑量分別為 50、100、200mg/kg；空白對(duì)照組灌服同體積的2%吐溫-80水溶液，連續(xù)灌胃7 d，每天1次。于末次給藥后1 h，進(jìn)行小鼠行為學(xué)測(cè)試實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 小鼠自主活動(dòng)實(shí)驗(yàn) 于給藥前和末次給藥后1 h，分別測(cè)小鼠的自主活動(dòng)。方法采用XZC-4小鼠自主活動(dòng)測(cè)定儀，將小鼠放入測(cè)定儀適應(yīng)5min后開(kāi)始測(cè)定，以10min內(nèi)小鼠于給藥前后的活動(dòng)次數(shù)之差為指標(biāo)，比較各組小鼠自主活動(dòng)強(qiáng)度。

1.2.4 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[7]。將單個(gè)小鼠放入水深10 cm燒杯（直徑13 cm，高19.5 cm）中，水溫（25±2）℃。觀察 6min，記錄后 4min小鼠游泳的不動(dòng)時(shí)間（指小鼠在水中停止掙扎，或顯漂浮狀態(tài)，僅有微小的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束將小鼠放在取暖設(shè)備下烘干，放回籠內(nèi)。

1.2.5 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[8]。強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)小鼠飼養(yǎng)3 d，每天灌胃給藥1次，末次給藥后1 h，將單個(gè)小鼠尾端（在距尾2 cm處）用膠布粘在木棒上部，使其成倒掛狀態(tài)，頭部離臺(tái)面15 cm，中間以擋板隔離小鼠視線。小鼠為了克服不正常體位而掙扎活動(dòng)，但活動(dòng)一段時(shí)間出現(xiàn)間斷性不動(dòng)，顯示失望狀態(tài)。觀察6min，記錄后4min內(nèi)小鼠不動(dòng)時(shí)間為失望時(shí)間。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，正態(tài)分布計(jì)量資料的比較采用單因素方差分析，偏態(tài)分布計(jì)量資料的比較采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 酸棗仁總黃酮對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可以看出，與空白對(duì)照組比較，鹽酸氯米帕明組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)無(wú)顯著減少和增加，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），酸棗仁總黃酮高、中、低劑量組小鼠自主活動(dòng)次數(shù)明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

表1 酸棗仁總黃酮對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響（±s）Tab.1 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on autonom icmovement test（±s）

表1 酸棗仁總黃酮對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響（±s）Tab.1 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on autonom icmovement test（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05。

組別 n 劑量（mg/kg） 自主活動(dòng)（次數(shù)）空白對(duì)照組 12 — 24±71*鹽酸氯米帕明組 12 25 34±69*總黃酮低劑量組 12 50 94±71*總黃酮中劑量組 12 100 121±90*總黃酮高劑量組 12 200 124±99*

2.2 酸棗仁總黃酮對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響 結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可以看出，與空白對(duì)照組比較，鹽酸氯米帕明組小鼠后4min的不動(dòng)時(shí)間縮短，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），酸棗仁總黃酮高、中、低劑量組小鼠后4min的不動(dòng)時(shí)間明顯縮短，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；與鹽酸氯米帕明組比較，酸棗仁總黃酮高、中、低劑量組對(duì)縮短小鼠后4min的不動(dòng)時(shí)間，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；從小鼠不動(dòng)減少時(shí)間趨勢(shì)上看，和給藥劑量呈一定相關(guān)性。

表2 酸棗仁總黃酮對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響（±s）Tab.2 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the forced sw imm ing test（±s）

表2 酸棗仁總黃酮對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響（±s）Tab.2 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the forced sw imm ing test（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01；與陽(yáng)性藥組比較，ΔP<0.05，ΔΔP<0.01。

不動(dòng)減少時(shí)間（%）空白對(duì)照組 12 — 152.10±29.31 —鹽酸氯米帕明組 12 25 114.00±19.00* 25.05總黃酮低劑量組 12 50 75.00±30.89**Δ 50.69總黃酮中劑量組 12 100 68.90±13.88**ΔΔ 54.70總黃酮高劑量組 12 200 65.30±23.88**ΔΔ 57.07組別 n 劑量（mg/kg）不動(dòng)時(shí)間（s）

2.3 酸棗仁總黃酮對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可以看出，與空白對(duì)照組比較，鹽酸氯米帕明組小鼠后4min的不動(dòng)時(shí)間縮短，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），酸棗仁總黃酮高、中、低劑量組小鼠后4min的不動(dòng)時(shí)間明顯縮短，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）；與鹽酸氯米帕明組比較，酸棗仁總黃酮高、中、低劑量組對(duì)縮短小鼠后4min的不動(dòng)時(shí)間無(wú)顯著差異；從小鼠不動(dòng)減少時(shí)間趨勢(shì)上看，和給藥劑量呈一定相關(guān)性。

表3 酸棗仁總黃酮對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響（±s）Tab.3 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the tailsuspension test（±s）

表3 酸棗仁總黃酮對(duì)小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響（±s）Tab.3 Effectof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae on the tailsuspension test（±s）

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別 n 劑量（mg/kg）不動(dòng)時(shí)間（s）不動(dòng)減少時(shí)間（%）空白對(duì)照組 12 — 115.60±26.72 —鹽酸氯米帕明組 12 25 70.00±26.49* 39.45總黃酮低劑量組 12 50 69.20±33.41* 40.14總黃酮中劑量組 12 100 66.50±25.44* 42.47總黃酮高劑量組 12 200 64.40±24.02** 44.29

3 討論

酸棗仁盛產(chǎn)于中國(guó)北方地區(qū)，中醫(yī)常作為養(yǎng)心安神藥用于鎮(zhèn)靜催眠，臨床上則多以復(fù)方形式用于虛煩不眠，驚悸多夢(mèng)等癥。目前中醫(yī)治療抑郁癥以疏肝健脾、養(yǎng)心安神復(fù)方為主，臨床研究表明：抑郁癥患者在情緒低落的同時(shí)，常表現(xiàn)出心煩意亂，甚至焦慮、躁狂等特征，這與傳統(tǒng)中藥酸棗仁的功效主治相符。通過(guò)對(duì)抗抑郁方劑進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示42首方劑中安神藥出現(xiàn)頻率最高。而單味藥中，使用最多的是酸棗仁、遠(yuǎn)志[9]。已有研究表明，酸棗仁總提取物具有顯著的抗抑郁作用，但有關(guān)酸棗仁抗抑郁有效部位的研究報(bào)道僅有關(guān)于總生物堿的研究[3-5]。酸棗仁中的脂肪油類(lèi)、黃酮類(lèi)、皂苷類(lèi)，是酸棗仁藥材含有的主要成分，有必要對(duì)其抗抑郁作用進(jìn)行研究。

本實(shí)驗(yàn)采用小鼠強(qiáng)迫游泳和小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)、研究酸棗仁總黃酮的抗抑郁作用。小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（FST）和懸尾實(shí)驗(yàn)（TST）是用于篩選和觀察抗抑郁藥物常用的實(shí)驗(yàn)方法[10-11]。動(dòng)物在強(qiáng)迫這一應(yīng)激條件下，經(jīng)掙扎后出現(xiàn)絕望表現(xiàn)即不動(dòng)狀態(tài)，而抗抑郁劑可以減少動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間，提高對(duì)應(yīng)激的耐受性。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)表明：酸棗仁總黃酮能明顯減少小鼠自主活動(dòng)次數(shù)，具有鎮(zhèn)靜作用；酸棗仁總黃酮能明顯縮短強(qiáng)迫游泳小鼠和懸尾絕望小鼠后4min內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間，從小鼠不動(dòng)減少時(shí)間趨勢(shì)上看，和給藥劑量呈一定相關(guān)性。說(shuō)明酸棗仁總黃酮能夠增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的應(yīng)激耐受性，減少絕望動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間，具有明顯的抗小鼠實(shí)驗(yàn)性抑郁作用。關(guān)于酸棗仁總黃酮中具體發(fā)揮作用成分及作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究[12-13]。

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Study on the antidepressanteffectof total flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae

ZHAOQi-duo,SHU Le-xin,WANGYing,etal
（Schoolof TraditionalChineseMateriaMedica,Tianjin University of TraditionalChineseMedicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To observe the antidepressanteffectof total flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae inmice.[Methods]To investigate the antidepressantactivity of total Flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae by the forced swimming testand the tailsuspension test,with behavioraldespairmice in the immobility time asan indicator.[Results]Differentdose groupsof total flavonoids from Semen Ziziphi Spinosae could significantly reduce the immobility time ofmice during the forced swimming testand the tail Suspension test,compared with thatof the controlgroup(P<0.05);comparedwith thatof the positivegroup(P<0.05).[Conclusion]The total flavonoids from Semen ZiziphiSpinosae possesshad significantantidepressanteffects.

Semen ZiziphiSpinosae;total flavonoids;antidepressanteffect;behavioraldespair

R285.5

A

1672-1519(2011)04-0335-03

天津市高等學(xué)校發(fā)展項(xiàng)目基金（20070305）。

趙啟鐸（1976-），男，碩士，講師，主要研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)成分及活性研究。

2011-03-30）