CD1a、Caspase-3在暈痣皮損表皮內表達的研究

王愛學，李玉平，趙子申，盧會秀

（河北醫科大學第二醫院皮膚科，河北石家莊 050000）

CD1a、Caspase-3在暈痣皮損表皮內表達的研究

王愛學，李玉平*，趙子申，盧會秀

（河北醫科大學第二醫院皮膚科，河北石家莊 050000）

目的檢測CD1a、半胱氨酸蛋白水解酶-3（CaSpaSe-3），探討暈痣發病機制及細胞凋亡在其中的作用。方法采用免疫組織化學SP法檢測CD1a、CaSpaSe-3在暈痣患者23例和皮內痣患者15例皮損表皮內的表達。結果暈痣皮損表皮內CD1a、CaSpaSe-3的表達水平顯著高于皮內痣（P＜0.05）。結論CD1a、CaSpaSe-3在暈痣皮損表皮內中的高表達可能與暈痣發病有關。

暈痣；半胱氨酸內肽酶類；細胞凋亡

暈痣又名離心性后天性白斑［1］，是臨床上常見的色素性皮膚病，主要特征為以痣細胞痣為中心，周圍出現色素減退斑，中央痣細胞痣通常為混合痣或皮內痣，大都呈良性［2］。其發病機制至今未完全明了，目前較為一致的看法傾向于細胞免疫，特別是以CD S+為主的細胞毒性T細胞清除痣細胞是關鍵環節，郎格漢斯細胞協同黑素細胞激發T細胞，介導痣細胞的破壞［3］。本文旨在研究CD1a、半胱氨酸蛋白水解酶-3（CaSpaSe-3）在暈痣皮損內的表達，探討郎格漢斯細胞及細胞凋亡在暈痣發生機制中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料：標本為我科病理室1993年1月—200S年12月存檔的石蠟包埋組織，均為經臨床和病理學診斷確診的暈痣和皮內痣。暈痣患者23例，男性9例、女性14例，年齡S～35歲，平均（16.S7± 6.30）歲。皮內痣患者15例，男性6例，女性9例，年齡10～35歲，平均（16.2±6.3）歲。2組年齡、性別比較差異無統計學意義（P＞0.05）。具有可比性。

1.2 主要試劑：鼠抗人CD1a單克隆抗體和兔抗人CaSpaSe-3多克隆抗體、試劑盒SP-9002和濃縮型DAB試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 方法：將石蠟切片脫蠟至水化；以3%過氧化氫溶液滅活內源性過氧化物酶的活性；微波修復抗原15min，滴加5%正常山羊血清封閉液，依次滴加一抗（CD1a工作濃度為1∶20稀釋，CaSpaSe-3工作濃度為1∶300稀釋）、生物素標記的二抗工作液、辣根酶標記鏈酶卵白素工作液；DAB染色，蘇木精復染，脫水，透明，封片。以PBS代替一抗為陰性對照。

1.4 結果判定

1.4.1 CD1a的表達：細胞膜呈黃褐色的樹枝狀突起的細胞為CD1a陽性的郎格漢斯細胞，每例取3張切片，每張切片選取CD1a陽性細胞分布最密集的5個區，在光鏡高倍視野下（×400）計數CD1a陽性細胞的數目。取平均值作為郎格漢斯細胞數。

1.4.2 CaSpaSe-3的表達：細胞漿伴核內有黃色至棕黃色顆粒沉積者為陽性染色細胞，參照Shimizu［4］和Garcia［5］等的方法對標記物的表達結果進行半定量分級。根據染色強度評分，不著色（-）為0分，淺黃色（+）為1分，深黃色（++）為2分，棕黃色（+++）為3分；根據表達范圍評分，表皮無表達（-）為0分，表皮偶有表達（+）為1分，表皮中下層表達（++）為2分，表皮全層表達（+++）為3分。以上兩項相加結果等于0或1為陰性（-），2為弱陽性（+），3為陽性（++），≥4為強陽性（+ ++）。

1.5 統計學方法：采用SPSS13.0統計軟件進行處理。計量資料以±s表示，組間比較用t檢驗；等級資料比較采用秩和檢驗（Wilcoxon W法）。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 CD1a在暈痣和皮內痣皮損表皮內的表達：CD1a在郎格漢斯細胞膜著色呈黃褐色（圖1，2），暈痣和皮內痣皮損表皮內CD1a陽性細胞數（每高倍視野）分別為（23.6±3.75）個、（20.1±4.14）個，2組差異有統計學意義（P＜0.05）。

圖1 CD1a在暈痣皮損表皮內的表達（SP×400）Figure 1 The expreSSion of CD1a in the epidermiS of halo nevuS（SP× 400）

圖2 CD1a在皮內痣皮損表皮內的表達（SP×400）Figure 2 The expreSSion of CD1a in the epidermiS of intradermal nevuS （SP×400）

2.2 CaSpaSe-3在暈痣和皮內痣皮損表皮內的表達：根據染色強度評分，表達結果見表1；根據表達范圍評分，表達結果見表2；2組表達強度等級的結果見表3。用PBS代替一抗的陰性對照未見陽性信號。CaSpaSe-3在暈痣組皮損表皮內的表達高于皮內痣組（圖3，4），2組差異有統計學意義（P＜0.05）。

表1 Caspase-3在暈痣及皮內痣皮損表皮內染色強度的比較Table 1 The staining intensity of Caspase-3 in epidermis between halo nevus and intradermal nevus（n）

表2 Caspase-3在暈痣及皮內痣皮損表皮內表達范圍的比較Table 2 The expression site of Caspase-3 in epidermis between halo nevus and intradermal nevus （n）

表3 Caspase-3在暈痣和皮內痣皮損表皮內表達強度等級的比較Table 3 The comparison of Caspase-3 expression intensity in epidermis between halo nevus and intradermal nevus（n）

圖3 CaSpaSe-3在暈痣皮損表皮內的表達（SP×400）Figure 3 The expreSSion of CaSpaSe-3 in the epidermiS of halo nevuS （SP×400）

圖4 CaSpaSe-3在皮內痣皮損表皮內的表達（SP×400）Figure 4 The expreSSion of CaSpaSe-3 in the epidermiS of intradermal nevuS（SP×400）

3 討 論

暈痣是白癜風的一種特殊類型［6］，發病率約為1%，發病機制未完全明了。有學者［6］提出大多數暈痣的痣周及真皮可見大量單個核細胞浸潤，其中S0%以上為T淋巴細胞，以CDS+T細胞為主。目前較為一致的看法傾向于細胞免疫。

CD1a是細胞膜表面的一組糖蛋白，屬于第三類抗原提呈分子，是朗格漢斯細胞的標記性抗體［7］。目前主要用CDla陽性細胞的多少來反映郎格漢斯細胞的數量［S～10］。朗格漢斯細胞是存在于表皮中的樹突狀細胞，也是具有免疫功能的抗原遞呈細胞［11］，具有特殊免疫激活能力，具有極強的抗原提呈功能，在人體的防御體系中有著極為重要的作用，其數量的多少可以反映相應的免疫狀態。楊海平等［12］研究認為郎格漢斯細胞可能是由T細胞介導疾病的激發相關細胞和（或）靶細胞。

本研究表明在暈痣皮損表皮內郎格漢斯細胞數較皮內痣皮損中多，推斷郎格漢斯細胞可能是作為抗原提呈細胞介導針對黑素細胞的免疫反應，是引起皮膚黑素細胞破壞的因素，支持郎格漢斯細胞可能在暈痣病變發生發展中起關鍵的調控作用。

暈痣是在郎格漢斯細胞作用下，由CDS+T細胞介導的直接針對痣細胞的自身免疫反應，最終導致痣細胞的毀損。理論上細胞毒性T細胞殺傷靶細胞可以啟動細胞裂解和細胞凋亡2種機制。

CaSpaSe-3為半胱天冬酶家族的重要成員，是細胞凋亡的關鍵蛋白酶，一旦被激活，即發生下游級聯反應，使凋亡不可避免，在細胞凋亡機制網絡中居中心地位［13］。本研究表明CaSpaSe-3在暈痣皮損表皮內高表達，皮損表皮內陽性顆粒較密集，提示暈痣皮損的產生伴隨著細胞凋亡，而CaSpaSe-3在細胞凋亡過程中起著極其重要的作用，故CaSpaSe-3在暈痣發生、發展過程中可能具有重要作用。

總之，暈痣中可能存在由抗原遞呈細胞郎格漢斯細胞促成的表皮內限局性免疫功能異常，進而產生了CaSpaSe蛋白酶級聯反應引起的細胞凋亡，該機制可能導致了痣細胞凋亡，并伴隨有黑素細胞的破壞，形成痣細胞痣周圍出現色素減退斑。

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THE STUDY ON THE EXPRESSION OF CD1a AND CASPASE-3 IN EPIDERMIS OF HALO NEVUS LESION

WANG Ai-xue，LI Yu-ping*，ZHAO Zi-Shen，LU Hui-xiu
（Department of Dermatology，the Second Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China）

ObjectiveTo Study the pathogeneSiS of halo nevuS and the role of apoptoSiS by inveStigating the expreSSion of CD1a and CaSpaSe-3.MethodsThe expreSSion of CD1a and CaSpaSe-3 waS meaSured by immunohiStochemiStry in 23 caSeS of halo nevuS and 15 caSeS of intradermal nevuS. Results The expreSSion of CD1a and CaSpaSe-3 waS Significantly higher in halo nevuS than in intradermal nevuS（P＜0.05）.ConclusionThe higher expreSSion of CD1a and CaSpaSe-3 may play an important role in the development of halo nevuS.

halo nevuS；CD1a；cySteime endopeptidaSeS；apoptoSiS

I75S.51

A

1007-3205（2011）07-0797-03

2011-03-03；

2011-05-10

王愛學（1975-），女，河北秦皇島人，河北醫科大學第二醫院主治醫師，醫學碩士，從事皮膚病、性病診治研究。

*通訊作者

10.3969/j.iSSn.1007-3205.2011.07.021