Syk及HER2基因在胃癌組織中的表達及意義*

劉泓基 彭 艷 廖 玲 薄曉通 王宏偉 肖勝軍

胃癌是全球范圍內患病率排第4位的常見惡性腫瘤，占全部癌癥的10%[1]。迄今為止，胃癌的發病機制尚未闡明。目前認為在腫瘤發生、發展、轉移過程中，至少由兩個或兩個以上功能不同的異常激活的癌基因和（或）抑癌基因發揮作用。脾酪氨酸激酶（Syk）表達缺失可能與乳腺癌、肝癌、胃癌、結直腸癌、胰腺癌、膽囊癌等形成和轉移有關，人表皮生長因子受體2（HER2）基因和蛋白在胃癌、卵巢癌、輸卵管癌、食管癌、結腸癌和肺癌等惡性腫瘤中均有廣泛表達。在胃癌患者中，Syk基因和HER2基因表達的關聯性尚少見報道。本研究旨在探討Syk及HER2在胃癌發生發展、浸潤轉移等臨床病理特征及預后中的作用，以期為Syk及HER2在胃癌表達的靶向治療提供理論參考依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取桂林醫學院附屬醫院2010年9月—2011年2月外科手術切除的資料完整的胃癌患者55例。男32例，女23例，年齡38~77歲，全部患者術前均未行放療、化療及生物制劑治療。其中腺癌高分化23例，中分化18例，低分化14例。新鮮標本均經10%甲醛固定,石蠟包埋，并經HE染色組織學確診。根據2009年國際抗癌聯盟（UICC）第7版及美國腫瘤聯合會（AJCC）聯合制定的TNM分期標準進行臨床分期。腫瘤TNM分期T1+T2期23例,T3+T4期32例。另在55例胃癌患者中隨機選取20例癌旁（距癌灶5 cm以上）非腫瘤性組織作為對照。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 所用抗體克隆號為Syk（P04S066785E）、HER2（RAB-0156），即用型二抗試劑盒購自福州邁新（KIT-5010）檢測 Syk及HER2蛋白表達。（1）蠟塊4 μm連續切片，53℃孵育60 min，切片常規脫蠟和水化，PBS沖洗3次，每次3 min。（2）Syk及HER2經檸檬酸鈉加熱法修復2 min，冷卻至室溫，切片置3%過氧化氫中10 min，PBS沖洗3次；10%血清孵育10 min。（3）一抗室溫下孵育60 min，PBS沖洗3次，每次5 min。（4）二抗試劑37 ℃孵育15 min，PBS沖洗3次。（5）DAB顯色，顯微鏡下觀察3~5 min，經蘇木素復染、PBS返藍、分化脫水、透明封片、顯微鏡下觀察。

1.2.2 判定標準 HER2陽性染色呈棕黃色顆粒，定位于細胞膜。Syk以細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性，腫瘤細胞不著色或<10%為陰性，≥10%的腫瘤細胞著色為陽性。每例切片至少計數10個400倍視野，根據腫瘤陽性細胞數所占比例分為：10%~25%（+），26%~50%（++），51%~75%（+++），>75%（++++）。染色強度判定：不著色（-），淺棕黃色（+），棕黃色（++），棕褐色（+++）。每批染色均設陰性空白對照，以PBS代替一抗做陰性對照。綜合陽性細胞數和染色強度對染色結果進行分析。

1.3 統計學分析 應用SPSS 17.0統計軟件，計數資料比較用卡方（χ2）檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Syk蛋白、HER2蛋白在胃癌中的表達 Syk、HER2在胃癌中的陽性表達率分別為21.8%（12/55）和29.1%（16/55）。在癌旁組織的中的陽性表達率分別為85.0%（17/20）和0。Syk和HER2蛋白在胃癌與癌旁組織中的陽性表達率差異有統計學意義（χ2分別為24.688和7.396，P<0.05或P<0.01）。

2.2 Syk與HER2蛋白表達與胃癌臨床病理特征間的關系 不同性別、年齡患者的Syk和HER2蛋白表達差異無統計學意義（P>0.05），而不同組織學分類、TNM分期以及有無淋巴結轉移、漿膜浸潤及遠處轉移者，其Syk和HER2蛋白表達差異均有統計學意義（P<0.05）。分化程度越差、有漿膜浸潤、出現淋巴結轉移及遠處轉移、TNM分期越高，其HER2陽性率越高，Syk陽性率越低；在低分化胃癌中，Syk表達缺失，見表1。

表1 Syk、HER2的表達與胃癌臨床病理參數的關系例（%）

3 討論

Syk基因最早是由日本學者于1991年從豬脾cDNA克隆出來的,該基因位于人類染色體9q22，蛋白質分子質量為72 ku，由629個氨基酸組成。Syk是一種候選抑癌基因,且是目前發現的唯一有抑癌作用的酪氨酸激酶（PTKs）。Coopman等[2]首先發現乳腺癌細胞中有Syk表達缺失現象,隨后大量研究表明，在多種腫瘤發病過程中存在Syk表達缺失現象。目前認為Syk可能通過影響細胞遷移、抑制細胞分裂和增殖、干預某些細胞因子的分泌、抑制腫瘤成瘤能力和轉移等機制影響腫瘤發生。

關于Syk基因在胃癌中的表達報道不一致，有文獻報道，Syk在胃癌中的陽性表達率為5.1%~42.4%，本組55例中癌組織中Syk蛋白陽性表達率為21.8%，另研究表明Syk在低分化胃癌中出現表達缺失現象[3-4]，與本研究結果一致。Nakashima等[4]研究認為，Syk的表達缺失與腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移及脈管侵犯相關。Carter等[5]研究認為，Syk基因在胃癌中表達失活的主要原因可能是Syk基因啟動子甲基化，Syk與HER2是一對功能相反的癌或抑癌基因，Syk可以抑制HER2的收縮血管內皮細胞作用而抑制腫瘤的轉移。甲基化可能是腫瘤抑制基因失活的主要原因，Syk基因啟動區CpG島甲基化是其失活的原因之一。

HER2是原癌基因，位于17q21，含1 255個氨基酸，屬于酪氨酸激酶型受體，是表皮生長因子受體家族成員之一[6]。目前認為HER2具有致瘤作用，其作用機制為抑制凋亡，促進增殖；增加腫瘤細胞的侵襲力；促進腫瘤血管新生和淋巴管新生。

最近關于胃癌細胞的研究表明，HER家族激酶的目標是放大成纖維細胞生長因子受體2和抑制HER3導致的細胞增殖損失的成纖維細胞因子[7]。研究數據顯示染色體上的多態性可能致胃癌中基因復制數增加，HER2基因放大是HER2蛋白過度表達的主要原因[8]。觀察胃癌和其他組織癌中HER2表達的陽性率，可以發現轉移灶高于原發灶，同時還與癌組織浸潤的深度有關。

HER2高表達與胃癌預后的關系一直有爭論。在HER3選擇性實驗中，攜帶HER2標記的在腸型胃癌和彌漫性胃癌這兩個組織學類型都和胃癌預后較差強烈相關[9]。研究表明，HER2的基因表達陽性可能是關系胃癌患者預后的一個獨立因素，可以考慮應用新的輔助療法如赫賽汀合并化療，其被視為選擇HER2陽性的胃癌患者或胃食管連接部癌癥的一種新標準[10]。胃癌中Syk失表達及HER2過表達的機制需進一步探討，并為胃癌的早期預警提供理論依據，為臨床選取胃癌靶向治療藥物提供新的策略。

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[3]周建良，張樂鳴，朱挺，等.胃癌hTERT、Syk表達與分子邊界的臨床研究[J].實用腫瘤雜志，2009，24（1）：23-26.

[4]Nakashima H,Natsugoe S,Ishigami S,et al.Clinical significance of nuclear expression of spleen tyrosine kinase(Syk)in gastric cancer[J].Cancer Lett,2006,236(1):89-94

[5]Carter B，Niu G ，Ward D，et al.Mechanisms of HER-2 induced endothelial cell retraction[J].Ann Surg Oncol，2007，14(10):2971.

[6]Scaltriti M，Verma C，Guzman M，et al.Lapatinib，a HER2 tyrosine kinase inhibitor，induces stabilization and accumulation of HER2 and potentiates trastuzumab-dependent cell cytotoxicity[J].Onco?gene，2009，28（6）：803-814.

[7]Kunii K，Davis L，Gorenstein J,et al.FGFR2-ampli-fied gastric cancer cell lines require FGFR2 and Erbb3 signaling for growth and survival[J].Cancer Res,2008,68（7）:2340-2348.

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