不同年限麝香中麝香酮含量GC-MS分析

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(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，吉林 長春 130118；2.陜西省動物研究所，陜西 西安 710032)

麝香(Musk)是鹿科動物林麝(MoschusberezovskiiFlerov.)、馬麝(M.sifanicusPrzewalssi.)和原麝(M.moschiferusLinaeus.)成熟雄體香囊分泌物的干燥品[1-3]。麝香是一種名貴的中藥材，具有開竅醒神、活血通絡(luò)、消腫止痛之功效[4-5]，系多種急救藥及有效中成藥的重要原料。主治熱病神昏、腦卒中痰厥、氣郁暴厥、中惡昏迷、經(jīng)閉、心腹暴痛、癰腫瘰疬、痹痛麻木，療一切虛損惡病[6-9]。麝香的芳香氣味主要來源于其所含的麝香酮。麝香酮是天然麝香重要的生理活性成分[10-12]，檢測麝香酮的含量是控制麝香以及含麝香中成藥的質(zhì)量的重要指標(biāo)[13]。我國藥典規(guī)定天然麝香中麝香酮的含量不低于2.0%[6]。本實(shí)驗(yàn)選用GC-MS法[14]，探討年齡因素對麝香各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)的影響，摸索麝香酮含量隨年齡變化的規(guī)律，為動物藥的研發(fā)和利用開辟新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料 天然麝香：1、3、5、7、9年生麝香各3個樣品，共計(jì)15個樣品(均由陜西省鳳縣養(yǎng)麝基地提供)。

1.1.2 試劑 二氯甲烷、乙醚、甲醇、乙醇、正己烷、苯(北京化工有限責(zé)任公司);麝香酮標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢驗(yàn)所)。

1.1.3 主要設(shè)備 安捷倫5975；漩渦振蕩儀(XW-80A江蘇海門市麒麟醫(yī)用儀器)；分析天平(SHIMADAZU AUY220)；離心機(jī)(星科GL-21LM)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent 19091Z-433 HP-1 Methyl Siloxane;檢測器:氫焰檢測器；進(jìn)樣口溫度:80 ℃；最高溫度：300 ℃；載氣(氮?dú)?流速:1.0 mL/min。

1.2.2 對照品溶液的制備 精密吸取對照品溶液0.190 mL，置25 mL容量瓶中,用乙醚溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得麝香酮標(biāo)準(zhǔn)溶液(麝香酮濃度為6.916 mg/mL)。

1.2.3 供試品溶液的制備 將麝香樣品按不同年限分組編號(1～15)，進(jìn)行冷凍干燥處理。處理后取各樣品0.300 0 g，加5 mL二氯甲烷，充分溶解后,4 000 r/min離心10 min。同法提取4次，合并提取液，自然揮干，乙醚定容至10 mL，用于GC-MS測定。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 準(zhǔn)確吸取麝香酮對照品溶液0.025、0.05、0.1、0.2、0.4 mL，分別置于5 mL容量瓶中用乙醚定容至刻度，相應(yīng)濃度分別為0.034 6、0.069 2、0.138 3、0.276 6、0.553 3 mg/mL，分別吸取1 μL上述濃度對照品溶液進(jìn)行GC-MS分析，測得麝香酮峰面積(Y)，用Y對麝香酮濃度(X)進(jìn)行回歸，得線性方程：Y=241 279 651X-582 812(R2=0.999 7)，線性范圍為0.024～0.384 1 mg/mL。麝香酮出峰時間為19.007 min。

1.2.5 精密度試驗(yàn) 取同一供試樣品(編號4)在1 d內(nèi)5個不同時間及3個不同日期,進(jìn)樣測定麝香酮的含量，結(jié)果見表1。

1.2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品(編號8)按前述方法進(jìn)行平行試驗(yàn)測定,結(jié)果見表2。

表1 日內(nèi)精密度和日間精密度測定結(jié)果

1.2.7 回收率試驗(yàn) 取已知麝香酮含量的天然麝香100 mg (2.52%),按照上述樣品提取方法提取，揮去溶劑得干物質(zhì)，干物質(zhì)加入對照品溶液，揮干溶劑，重復(fù)上述方法處理，進(jìn)樣GC-MS測定，結(jié)果見表3。

2 結(jié)果

將15個供試品溶液和對照品溶液充分搖勻，分別取1 μL進(jìn)樣，計(jì)算麝香酮峰面積,由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出麝香酮濃度，用此濃度計(jì)算麝香酮含量，結(jié)果見表4及圖1。

表2 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

表3 麝香酮回收率試驗(yàn)結(jié)果

表4 麝香酮測定結(jié)果

圖1 不同年限采集麝香麝香酮含量

3 討論

本實(shí)驗(yàn)先后采用乙醇、正己烷、乙醚、苯和二氯甲烷等5種試劑對麝香有效成分進(jìn)行提取，結(jié)果表明，二氯甲烷為最佳提取試劑。麝香酮的分析方法很多，例如：高效液相衍生化法[15]、薄層雙波長掃描法[16]、氣相色譜法[17]、高效液相差示檢測法[18]、薄層比色法[19]等。這些方法必須要求精確的定性、定量每一組分，而且測得結(jié)果對麝香藥理活性的反映不夠完全。比較后認(rèn)為GC-MS方法比較簡潔、易普及、結(jié)果精準(zhǔn)、可靠，回收率高。

通過對所有供試樣品中麝香酮含量的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析可以看出，麝在不同年齡所產(chǎn)麝香中麝香酮的含量存在顯著差異。1～3年生麝所產(chǎn)麝香中麝香酮含量接近藥典中規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)麝香酮含量，有的甚至明顯高于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,3年生的麝所產(chǎn)麝香中麝香酮含量最高。隨著年齡增長,5歲以后的麝所產(chǎn)麝香中麝香酮的含量呈明顯下降趨勢，且明顯低于藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)含量。由此可見,1～3歲是麝產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)麝香的最佳年齡，5歲以后的麝產(chǎn)香質(zhì)量有所下降。所以年齡偏大、產(chǎn)香較差的麝應(yīng)適當(dāng)淘汰。基地在人工取香的時候也可以有所側(cè)重，這樣更有利于獲得優(yōu)質(zhì)麝香。

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