眼針對腦缺血再灌注損傷大鼠血清BDNF含量的影響

， ， ，，，德山，

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 沈陽 110032)

眼針療法是彭靜山教授根據(jù)中醫(yī)學(xué)基本理論結(jié)合長期的臨床實踐所創(chuàng)立的一種微針療法，眼針對于腦血管性疾病特別是腦卒中等具有顯著的療效，但是其作用機制至今尚不清楚。本研究通過建立大鼠腦缺血再灌注損傷的動物模型，觀察眼針對大鼠神經(jīng)功能缺損評分、血清腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)表達的影響，旨在探究眼針治療腦缺血再灌注損傷的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組 健康SD(SPF級)大鼠80只，雌雄不限，體重(280±20) g，由北京維通利華實驗動物中心提供，許可證編號：SCXK(京)2007-0001。分籠適應(yīng)性飼養(yǎng)，室內(nèi)溫度22 ℃，相對濕度45%。將標準顆粒飼料喂養(yǎng)7 d以后按隨機數(shù)字法分為：正常對照組；3、24、72 h假手術(shù)組；3、24、72 h模型組；3、24、72 h眼針組，共計10組，每組8只。

1.2 模型制備與評價 在文獻[1]基礎(chǔ)上,采用改良的線栓法復(fù)制大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷模型，并于缺血2 h進行再灌注，再灌注后3、24、72 h進行神經(jīng)功能缺損評分。模型評價參照ZeaLonga 5分制評分標準:0分為無癥狀；1分為不能完全伸展對側(cè)前爪；2分為向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈；3分為向?qū)?cè)傾倒；4分為不能自發(fā)行走，意識喪失。評分為1～3分者納入實驗組，未達標準者排除。假手術(shù)組術(shù)式同模型、眼針組，區(qū)別在于釣魚線插入動脈深度為0.5～1 cm，其他同手術(shù)組。正常組未做處理。經(jīng)過預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)在保證大鼠體質(zhì)量、環(huán)境溫度的條件下，由手術(shù)熟練的技術(shù)人員操作，動物不會發(fā)生死亡。

1.3 眼針取穴及刺法 眼針組:用31號13 mm毫針，于大鼠眶周2 mm處針刺，參照人體取穴方法，取肝區(qū)、上焦區(qū)、下焦區(qū)、腎區(qū)。手法：平刺，進針3 mm。留針20 min，留針期間捻轉(zhuǎn)行針3次，每次1 min。治療時機:3、24、72 h眼針組大鼠均于腦缺血再灌注即刻及取材前30 min，分別進行眼針刺激，并且24、72 h組每隔12 h分別針刺1次，方法同上。

1.4 指標測定 用ELISA方法檢測大鼠血清BDNF含量。眼針結(jié)束后,麻醉狀態(tài)下腹主動脈取血3 mL，離心分離血清供檢測備用；ELISA試劑盒由美國R&D公司進口分裝試劑盒，按照試劑盒說明書進行檢測。利用全自動酶標儀，在450 nm處測定各孔的OD值，采用CurveExpert 1.3進行標準曲線的繪制，并計算出對應(yīng)的濃度值。

2 結(jié)果

2.1 眼針對腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經(jīng)功能缺損影響 見表1。

2.2 眼針對腦缺血再灌注損傷大鼠血清中BDNF含量的影響 見表2。

表1 眼針對腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經(jīng)功能缺損評分的影響 分

表2 眼針對腦缺血再灌注損傷大鼠血清中BDNF含量的影響 OD值

3 討論

腦缺血和再灌注損傷發(fā)生時，BDNF[2-3]可作為一種保護劑抵抗腦缺血損傷，對神經(jīng)元損傷后修復(fù)具有重要意義[4-6]。眼針療法是由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院著名老中醫(yī)彭靜山教授于70年代首創(chuàng)，在眼眶周圍用針刺等刺激防治疾病的一種微針療法。應(yīng)用于臨床30余年來，療效顯著。

BDNF為神經(jīng)營養(yǎng)因子家族中的一員，由神經(jīng)細胞合成并廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，以大腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體分布最為豐富[4-7]。BDNF對神經(jīng)元生長發(fā)育及神經(jīng)元缺血損傷后修復(fù)具有重要意義。有研究[8]表明，腦缺血和再灌注損傷均可導(dǎo)致腦組織BDNFmRNA的廣泛表達，而且其表達水平與局部神經(jīng)元抵抗損傷的能力呈正相關(guān)，腦損傷后BDNFmRNA的表達增加是神經(jīng)元對腦損傷的自身保護。本研究結(jié)果表明大鼠腦缺血再灌注后,腦組織受損，機體出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損的癥狀。同時血清中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達減少，進一步加重腦組織的損傷。應(yīng)用眼針的治療方法，可通過提高大鼠血清中BDNF的含量，促進神經(jīng)元缺血損傷后的修復(fù)，使大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀得到一定的緩解。

本實驗通過建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型，明確了眼針治療可以使大鼠血清中BDNF的含量增加，進而促進大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)，揭示了眼針治療腦缺血再灌注損傷作用的相關(guān)機制。

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