不同溶劑的芫荽提取物對菜蚜生物活性的影響

陳 惠，徐 莉，葛 紅，顧國華 （江蘇沿江地區農業科學研究所，江蘇如皋22654）

芫荽 （CoriadrumsativumL．）又名胡荽，俗稱香菜。芫荽屬傘形科植物，英文名Coriander，為一年生香辛葉類蔬菜，由于具有調味和多種保健功效而在世界范圍內倍受青睞［1］。除了食用功能之外，芫荽提取物還對魚油具有抗氧化作用［2］，對沙門氏菌、大腸桿菌等具有抗菌作用［3］等。徐漢虹等［4］研究表明：芫荽對蚜蟲具有活性作用，但其活性成分的粗提方法及作用方式的系統研究還未見報道。本研究探索芫荽殺蟲活性成分的提取方法，明確它的主要作用方式，為將芫荽進一步開發成新型植物源農藥提供科學依據。

1 材料與方法

1．1 材料

（1）芫荽原粉 芫荽來自江蘇沿江地區農業科學研究所試驗田，用清水洗凈后，自然陰干，粉碎、過篩 （20目）得芫荽原粉，待用。

（2）供試昆蟲 蚜蟲捕自江蘇沿江地區農科所附近農戶種植的青菜田，選擇健康、大小均勻的蚜蟲，以鮮嫩青菜葉飼養。室內溫度 （25±1）℃，相對濕度60%～75%，光周期12D∶12L。

（3）試劑 乙醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯均為分析純 （AR），吐溫-80。

1．2 方法

1．2．1 活性成分的提取與藥劑配制

稱取200g植物原粉，倒入1000ml的燒瓶中，分別加入不同的溶劑500ml，浸泡24h，超聲30min，抽濾，共浸提3次，合并濾液后減壓濃縮至油狀為止 （A：芫荽的乙醇提取物；B：芫荽的氯仿提取物；C：芫荽的丙酮提取物；D：芫荽的乙酸乙酯提取物）。分別加入1g吐溫-80，用水稀釋后定容到50ml作為藥劑，稀釋為0、25、50、100、200mg／ml的溶液，備用。

1．2．2 活性作用方式的研究

（1）觸殺活性測試 采用點滴法。在每頭蟲體的腹背處點滴0．1μl各處理溶液［5］，然后將試蟲轉入墊有保濕濾紙的培養皿中，喂飼新鮮青菜葉片，每處理30頭，重復3次，對照為1%吐溫-80的水溶液，將培養皿放置于養蟲室。72h后分別記錄各處理蚜蟲的死亡數，以軟毛筆尖觸及蟲體無反應為死亡標準。計算毒力回歸線、半致死濃度（LC50）、LC50的95%置信限等。

（2）胃毒活性測試 采用載毒葉片法，參照xenou-Kokoletsi［6］的方法，先將藥液倒進抽氣瓶中，再將帶葉柄的完整青菜葉片浸入抽氣瓶的藥液中，然后抽氣，直到葉片表面無氣泡冒出時，松開抽氣瓶的放氣活塞放氣，使葉片將藥液吸入。把葉片從藥液中取出，放在自來水中漂洗2min，將葉片表面的藥液洗去。用吸水紙吸干葉片上的水，放入9cm培養皿中，每皿放葉片3張，用濕棉球包裹葉柄保濕。用軟毛筆將大小一致的無翅成蚜接入培養皿的葉片上，每皿接蟲30頭，重復3次。將培養皿養蟲室中飼養。72h后檢查死亡率，以軟毛筆尖觸及蟲體無反應為死亡標準。計算指標及方法同上。

（3）驅避活性測試 選取新鮮干凈青菜葉片，剪成大小一致的葉碟 （直徑2cm），以中間主葉脈為界用毛筆將葉碟一側均勻涂上植物提取物［7-8］，對照為1%吐溫-80的水溶液，靜置陰干；在培養皿底部放3張保濕濾紙，加水，然后將葉碟置于濾紙上。將大小一致的試蟲接于葉脈中部，每處理重復3次，每重復30頭試蟲，置于養蟲室內。分別于處理后72h調查處理和對照活蟲數。按下式計算驅避率。

驅避率= ［（對照邊試蟲數-處理邊試蟲數）／對照邊試蟲數］×100%。

根據驅避率的不同，將驅避效果分為6個等級 （0～V），分級標準為：0級，無驅避作用；I級，0．1%～20%驅避率；Ⅱ級，20．1%～40%驅避率；Ⅲ級，40．1%～60%驅避率；Ⅳ級，60．1%～80%驅避率；V級，80．1%～100%驅避率［9］。

1．2．3 數據處理方法

參照賈春生［10］的方法，試驗結果采用SPSS 17．0軟件計算毒力回歸方程、半致死濃度（LC50）、LC50的95%置信限等。

2 結果與分析

2．1 不同溶劑的芫荽提取物對蚜蟲的觸殺活性的影響

室內72h的觸殺活性測定結果表明，不同溶劑的芫荽提取物對蚜蟲均有觸殺作用，其結果見表1。由表1可知，B的觸殺活性LC50最高，為124．207mg／ml，A、D的LC50相近，C的LC50最低，為64．470mg／ml，其95%的置信區間為 ［49．406，83．340］，即芫荽的丙酮提取物觸殺活性最高。

表1 不同溶劑的芫荽提取物對蚜蟲觸殺活性分析結果 （72h）

2．2 不同溶劑的芫荽提取物對蚜蟲的胃毒活性的影響

蚜蟲是刺吸式、吸汁類的害蟲，所以采用xenou-Kokoletsi的方法對其進行胃毒活性測定，結果見表2。由表2可知，芫荽的不同溶劑提取物對蚜蟲均有胃毒活性作用，其中，B的觸殺活性LC50最高，為195．242mg／ml，其次分別為 A、D，C的LC50最低，為103．496mg／ml，95%的置信區間為 ［76．004，159．265］，毒力回歸方程為y=1．810x-3．647。

表2 不同溶劑的芫荽提取物對蚜蟲胃毒活性分析結果 （72h）

2．3 不同溶劑芫荽提取物對蚜蟲的驅避活性的影響

根據Malik等的分級方法，對4種提取物不同濃度的驅避率進行分級，結果見表3。由表3可知，這4種提取物對蚜蟲均有驅避活性，當藥劑濃度達200mg／ml時，B、D的驅避活性等級最高，為V級。

表3 芫荽不同溶劑的提取物對蚜蟲驅避活性測定結果 （72h）

3 討論

由上述試驗結果可知，4種提取物對菜蚜均有觸殺、胃毒、驅避活性作用，其中丙酮提取的芫荽活性物質對菜蚜的觸殺、胃毒作用最大；氯仿、乙酸乙脂的提取物則對菜蚜的驅避活性相對較高，這是由于溶劑的化學性質不同，導致提取物中活性物質的質量不一樣，故而毒力測定的結果有差異，這一結果與楊玉英等［11］的研究是一致的。本研究中沒有對芫荽提取物活性組分進行分離、提純、鑒定，尚需今后進一步研究。

全球生物農藥市場銷量已達到農藥總量的20%，而目前我國生物農藥年產量僅占農藥總量的1%左右［12］。本研究為芫荽的進一步開發利用和仿生合成新型植物源農藥奠定了一定基礎。

［1］郭紅轉，陸占國，李 健 ．芫荽的研究開發現狀 ［J］．食品研究與開發，2005，26（2）：104-106．

［2］田迪英，楊榮華 ．幾種香辛料對魚油抗氧化及消臭作用的研究 ［J］．糧油加工與食品機械，2002，（4）：48-50．

［3］李興鳴，徐學明 ．芫荽抑菌成分的提取及其抑菌性能的研究 ［J］．食品科技，2006，（10）：89-91．

［4］徐漢虹 ．殺蟲植物與植物性殺蟲劑 ［M］．北京：中國農業出版社，2001：406-407．

［5］湯麗梅，李保同 ．莰酮對蚜蟲生物活性的研究 ［J］．熱帶作物學報，2002，23（4）：85-88．

［6］Xenou-Kokoletsi M，Christias C．A simple and rapid technique for assaying toxicants in aphids ［J］．J Appl Ent，2002，126：108-113．

［7］陸永躍，梁廣文，邵婉婷，等 ．異源植物提取物對香蕉交脈蚜的控制作用 ［J］．華中農業大學學報，2002，21（4）：334-337．

［8］姚英娟，薛 東，楊長舉．21種植物提取物對玉米象的生物活性 ［J］．昆蟲學報，2005，48（5）：692-698．

［9］Malik M M，Mujtaba Naqvi S H．Screening 0fsome indigenous plants as repellents of antifeedants for stored gain insect ［J］．Stord Products Research，1984，20：45-48．

［10］賈春生 ．利用SPSS軟件計算殺蟲劑的LC50［J］．昆蟲知識，2006，43（3）：414-417．

［11］楊玉英，賀達漢，王 婧 ．草麻黃提取物對菜蛾幼蟲的拒食活性研究 ［J］．植物保護，2006，32（5）：35-38．

［12］徐凱宏 ．基于植物源提取綠色農藥的研究現狀與發展 ［J］．林業科技，2009，34（3）：37-39．