HBV對IFN-α產生耐藥性機制的研究進展

徐丙發，秦 侃，范魯雁

(安徽醫科大學第三附屬醫院，合肥230061)

我國是乙肝病毒(HBV)高流行區，有1.1～1.2億為HBV攜帶者，其中部分有不同程度的肝細胞受損，并可能發展成肝硬化和肝癌。慢性乙型肝炎(CHB)療程一般較長，隨著療程的延長，抗HBV藥物的療效隨之減低，即HBV對藥物產生了耐藥性。近年來關于HBV耐藥性機制研究很多，本文對其研究進展綜述如下。

1 HBV的耐藥現狀

目前臨床用于抗HBV的藥物有干擾素類、核苷(酸)類似物及免疫調節劑等。核苷(酸)類似物以拉米夫定為代表，通過抑制HBV-DNA逆轉錄酶和DNA多聚酶的活性而發揮抗HBV作用。由于可口服給藥，不良反應低微，被廣泛用于CHB治療。但若治療超過1 a以上，HBV對其耐藥性也隨之增加(耐藥比例每年增加14% ～20%)［1］，這樣就限制了其臨床應用。

干擾素(IFN)-α具有抗病毒及免疫調節雙重作用，是CHB的首選藥物之一。近年來開發的長效干擾素克服了普通干擾素半衰期短的缺點，提高了患者的依從性。但不管是普通干擾素還是長效干擾素，長期應用后其抗HBV、HCV作用會出現明顯下降，肝炎病毒容易對之產生耐藥性，只有26%的CHB患者獲得穩定的療效［2］，而PEG-IFN-α的穩定療效率也只有29%［3］。rHSA-IFN-α對CHB的長期療效還不確切，但有HCV對rHSA-IFN-α產生耐藥性的報道［4］。

2 HBV耐藥性產生的基因變異

HBV逆轉錄酶缺乏校對功能，持續感染過程中HBV容易發生自身變異，如S基因區587 G→A、前C基因中1896 G→A、X基因BCP區1762 A→T與1764 G→A突變、P基因區酪氨酸(Y)-蛋氨酸(M)-天門冬氨酸(D)-天門冬氨酸(D)中的552位蛋氨酸(M)被纈氨酸(V)或異亮氨酸(I)取代，生成YVDD或YIDD等不同位點的突變。不同位點的突變可能導致HBV免疫逃逸的發生及耐藥性的改變。如HBV的X基因BCP區1762 A→T與1764 G→A突變、前C基因中1896 G→A突變可增強HBV對干擾素的耐藥性［5］。

HBV不僅可以通過自身突變，還可通過影響宿主細胞某些基因表達而減低藥物的抗HBV作用。Liu等［6］通過微點陣技術比較HepG2.2.15細胞和HepG2細胞的基因差異，發現11個miRNA顯著上調，7個miRNA顯著下調，說明HBV基因組導入后會影響宿主細胞基因表達。IFNα干預后也會引起宿主細胞的一些基因發生改變，如 2＇-5＇-OAS、IFI 17、RING4等基因表達上調，MxA、Cig5表達完全受抑制，IFITM1、IFITM2、IFITM3 等表達部分受抑制［7］。上述基因改變有些是IFN-α對宿主細胞的直接作用，有些是宿主細胞對IFN-α的抵抗(即機體耐藥)。

3 信號傳導通路在HBV耐藥性產生中的作用

3.1 IFN-α抗HBV的過程 IFN-α發揮抗HBV作用主要通過 JAK-STAT信號通路，轉錄激活干擾素刺激基因(ISGs)，誘導抗病毒蛋白2'-5'-寡腺苷酸合成酶(2'-5'-OAS)等表達，產生抗病毒效應。參與IFN-α信號轉導的負調控物質主要有3個:細胞因子信號轉導家族的抑制因子(SOCS)、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)與激活的STAT蛋白抑制因子1(PIASl)。

人IFN-α受體由IFNARl與IFNAR2兩個亞基組成。IFNAR2亞基又分 IFNAR2a、IFNAR2b、IFNAR2c 3種形式，其中IFN-α通過與細胞表面IFNARl與IFNAR2c亞基相互作用而下傳信號，受體表達下降可致IFN-α治療失敗。Zhao等［8］報道肝內高水平的 IFNARlmRNA、IFNAR2cmRNA 與IFN-α治療的持久反應呈正相關，抑制IFNAR的表達是病毒產生耐藥性的重要機制之一。

3.2 STATl在HBV產生耐藥性中的作用 STATl是JAKSTAT信號傳導途徑中的關鍵分子，通常情況下主要以非活化單體形式存在于胞質中。細胞受刺激后，IFN-α與IFN受體的胞外部分結合，通過一系列過程，STAT1、STAT2被磷酸化激活后形成異源二聚體而被轉移到核內，調節基因轉錄，誘導抗病毒蛋白的表達。隨后STAT1在核內被酪氨酸磷酸酶去磷酸化，從DNA上脫離下來與CRM1出核載體結合并轉出至胞質。

STAT1的磷酸化在HCV對干擾素產生耐藥性中發揮重要作用。體外實驗表明，通過多種手段影響STAT1和STAT2的磷酸化可使其入核受阻，從而使HCV對IFN-α產生耐藥性［9］。對STAT1的SH2區修飾后，可促進其磷酸化，入核能力增強，使HCV對干擾素的耐藥性降低［10］。這說明STAT1的磷酸化狀態對HCV的耐藥性產生有重要影響。對慢性乙肝患者來說，對IFNα-2b不敏感患者肝臟組織STAT1的表達量比對IFNα-2b敏感患者明顯減少［11］，STAT1的磷酸化狀態也可能是影響HBV對干擾素產生耐藥性的重要因素。

STAT1的甲基化程度對干擾素的抗病毒作用也會產生影響。PIAS1是STAT的負性調節子，其通過與細胞核內的pSTAT1結合而抑制ISG的轉錄，從而抵抗IFN-α的抗HBV作用［12］。當STAT1被催化而甲基化后，STAT1與PIAS1解離而活化，從而發揮調節ISGs轉錄的作用。Christen等［13］發現Huh7細胞產生的HBsAg可使STAT1甲基化受阻，導致干擾素的抗HBV作用減弱。

4 外界因素對HBV耐藥性的影響

某些疾病(如肥胖癥、糖尿病等)、生活習慣(酗酒、吸煙)及環境污染等均可能影響干擾素對慢性肝炎的療效。類似環境濃度(非毒性濃度)的丙烯醛可促進HCV對IFN-α產生耐藥性，它主要通過抑制STAT1、STAT2的磷酸化，減少抗病毒蛋白OAS的分泌而減弱IFN-α的抗HCV作用［14］。

S-腺苷甲硫氨酸(SAM)是調節肝細胞生長、分化和死亡的關鍵代謝的甲基供體，在體內轉甲基和轉硫基化過程中起著關鍵作用。國外臨床試驗表明，SAM可明顯增加聚乙二醇干擾素聯用拉米夫定后的抗HCV作用，而這種作用與其抑制PIAS1與STAT1結合、促進STAT1甲基化有關。SAM也可作為甲基供給體增強HepG2.2.15細胞中STAT1的甲基化，促進STAT1與PIAS1解離，從而增強IFN-α的抗HBV作用，延緩其耐藥性的產生［15］。

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