CXCR4及其配體SDF-1在甲狀腺乳頭狀癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用

李佩瑞，孫瑞美，李曉輝，李樹欣

(1濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東濰坊261031;2安丘市中醫(yī)院)

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌中最常見的病理類型，較早即發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但機(jī)制目前不甚明了。近年來研究顯示，趨化因子受體4(CXCR4)及其配體基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)在腫瘤器官特異性轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，但其在甲狀腺乳頭狀癌頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用鮮見報(bào)道。1999年9月～2010年2月，我們采用免疫組化方法檢測(cè)了53例甲狀腺乳頭狀癌患者癌組織中CXCR4蛋白及頸部淋巴結(jié)組織中SDF-1蛋白表達(dá)情況，初步探討CXCR4/SDF-1在甲狀腺乳頭狀癌頸部淋巴轉(zhuǎn)移中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 53例于我院手術(shù)治療的甲狀腺乳頭狀癌患者，均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)診斷。均為首次發(fā)病，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，術(shù)前未接受過放、化療及其他抗腫瘤治療;病理檢查證實(shí)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例，其中男7例，女15例;年齡37～69歲，平均51歲，AJCC分期為Ⅰ～Ⅱ期12例，Ⅲ～Ⅳ期10例;無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，均為Ⅰ～Ⅱ期，其中男10例，女21例;年齡35～70歲，平均48歲。

1.2 CXCR4蛋白及SDF-1蛋白表達(dá)測(cè)定 采用免疫組化SP法分別檢測(cè)癌組織、癌旁組織CXCR4蛋白表達(dá)及頸部淋巴結(jié)組織SDF-1蛋白表達(dá)。鼠抗人CXCR4單克隆抗體、鼠抗人SDF-1單克隆抗體、SP試劑盒均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本均經(jīng)常規(guī)石蠟包埋，制備4 μm厚連續(xù)切片;二甲苯及梯度乙醇脫蠟水化，抗原修復(fù)，加30 ml/L過氧化氫溶液室溫20min;100 ml/L山羊血清室溫封閉10min;加一抗4℃冰箱中過夜;加二抗室溫30min;加SP復(fù)合物30min;二氨基聯(lián)苯胺(DAB液)顯色，蘇木素復(fù)染脫水、透明、封片，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。結(jié)果判定:由兩位高級(jí)病理醫(yī)師進(jìn)行染色結(jié)果評(píng)定。CXCR4、SDF-l陽性細(xì)胞均為細(xì)胞質(zhì)或胞膜出現(xiàn)淡黃至棕黃色著色顆粒，分別按染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞率計(jì)分。染色強(qiáng)度:陰性為0分，弱陽性為1分，陽性為2分，強(qiáng)陽性為3分。陽性細(xì)胞率:無陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞率＜25%為1分，25% ～50%為2分，＞50%為3分。二者得分之和為3～6分為陽性，＜3分為陰性。分析CXCR4蛋白及SDF-1蛋白表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關(guān)系及二者表達(dá)的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS13.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，率的檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CXCR4蛋白表達(dá) 癌旁組織及癌組織CXCR4蛋白陽性率分別為 3.8%(2/53)、73.6%(39/53)，P＜0.01。相關(guān)性分析顯示，CXCR4蛋白表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌患者性別、年齡、腫瘤直徑無明顯相關(guān)性;與臨床分期及頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，P均＜0.05，r=0.832 1、0.798 2。

2.2 SDF-1蛋白表達(dá) 有、無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者中，SDF-1蛋白陽性率分別為 86.4%(19/22)、5.8%(2/31)，P ＜0.01。相關(guān)性分析顯示，SDF-1 蛋白表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌性別、年齡、腫瘤直徑均無明顯相關(guān)性;僅與頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，P＜0.05，r=0.812 1。

2.3 CXCR4蛋白及SDF-1蛋白表達(dá)的相關(guān)性CXCR4蛋白及SDF-1蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=－0.320 7，P= －0.017 1)。

3 討論

頸部淋巴轉(zhuǎn)移是甲狀腺乳頭狀癌早期轉(zhuǎn)移的主要途徑。近年研究發(fā)現(xiàn)CXCR4/SDF-1能夠控制腫瘤細(xì)胞遷移方向，進(jìn)而達(dá)到器官特異性轉(zhuǎn)移的作用。Salvucci等［1］報(bào)道，CXCR4在乳腺浸潤癌中的表達(dá)(67%)遠(yuǎn)高于導(dǎo)管原位癌(43%);Yoon等［2］報(bào)道，頭頸部原位移植鱗狀細(xì)胞癌小鼠癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中CXCR4表達(dá)水平明顯高于無癌轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié);Muller等［3］報(bào)道，乳腺癌淋巴結(jié)中的淋巴內(nèi)皮細(xì)胞以及基質(zhì)細(xì)胞能夠分泌SDF-1，而SDF-1可與腫瘤細(xì)胞上的CXCR4受體相結(jié)合，促使腫瘤細(xì)胞向淋巴管移動(dòng)，發(fā)生淋巴結(jié)的定向轉(zhuǎn)移。

Zeelenberg等［4］認(rèn)為，CXCR4 是結(jié)直腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移所必須的;CXCR4只能被其惟一的配體SDF-1激活，CXCR4促使腫瘤細(xì)胞定向轉(zhuǎn)移且呈現(xiàn)SDF-1濃度依賴性［5，6］。本研究結(jié)果顯示，甲狀腺乳頭狀癌組織CXCR4表達(dá)呈高水平，甲狀腺乳頭狀癌頸部轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中SDF-l表達(dá)呈高水平，兩者呈負(fù)相關(guān);CXCR4高表達(dá)與性別、年齡無關(guān)，與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而SDF-1高表達(dá)僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。由此可以推測(cè)CXCR4、SDF-1高表達(dá)可能是判斷甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的一個(gè)早期重要指標(biāo)。

Castellone等［7］發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用 CXCR4 抗體能夠抑制SDF-1對(duì)甲狀腺癌遷移的誘導(dǎo)效應(yīng)。Li等［8］研究發(fā)現(xiàn)，CXCR4抑制劑AMD3100通過下調(diào)VEGF等的表達(dá)從而抑制SW480細(xì)胞株的侵襲與轉(zhuǎn)移能力。由此可以推斷，阻斷CXCR4/SDF-1表達(dá)有可能成為甲狀腺乳頭狀癌治療的一個(gè)新途徑。CXCR4、SDF-1抑制劑、單克隆抗體等在甲狀腺乳頭狀癌治療中的作用有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

［1］Salvucci O，Bouchard A，Baccarelli A，et al.The role of CXCR4 receptor expression in breast cancer:a large tissue microarray study［J］.Breast cancer Res Treat，2006，97(3):275-283.

［2］Yoon Y，Liang ZX，Zhang X，et al.CXC chemokine receptor-4 antagonist blocks both growth of primary tumor and metastasis of head and neck cancer in xenograft mouse models［J］.Cancer Res，2007，67(15):7518-7524.

［3］Muller A，Homey B，Soto H，et al.Involvement of chemokine receptors in breast cancer metastasis［J］.Nature，2001，410(6824):50-56.

［4］Zeelenberg IS，Ruuls-Van Stalle L，Roos E.The chemokine receptor CXCR4 is required for outgrowth of colon carcinoma micrometastasis［J］.Cancer Res，2003，63(13):3833-3839.

［5］Libura J，Drukala J，Majka M，et al.CXCR4-SDF-1 signaling is active in rhabdomyosarcoma cells and regulates locomotion，chemotaxis and adhesion［J］.Blood，2002，100(7):2597-2606.

［6］Hwang JH，Chung HK，Kim DW，et al.CXC chemokine receptor 4 expression and function in human anaplastic thyroid cancer cells［J］.J Clin Endocrinol Metab，2003，88(1):408-416.

［7］Castellone MD，Guarino V，De Faleo V，et al.Functional expression of the CXCR4 chemokine receptor is induced by RET/PTC oncogenes and is a common event in human papillary thyroid carcinomas［J］.Oncogene，2004，23(35):5958-5967.

［8］Li JK，Yu L，Shen Y，et al.Inhibition of CXCR4 activity with AMD3100 decreases invasion of human colorectal cancer cells in vitro［J］.World J Gastroenterol，2008，14(15):2308-2313.