IVF失敗者ICSI效果觀察

劉海萍，王海玉，郝天羽，王建業，李云飛

(濟南軍區總醫院，濟南250031)

在實施體外受精—胚胎移植(IVF-ET)治療的周期中有5% ～15%［1～5］受精失敗，以往常于 IVF后18～20 h行卵胞質內單精子注射(ICSI)治療，但臨床效果并不理想［6，7］。2007年 9月 ～2011年 5月，我們在常規IVF后8 h對65例受精失敗者行ICSI治療，效果滿意。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 在我院生殖醫學中心行IVF治療的原發性不孕患者831例，共獲卵10 893枚;其中65例642枚MⅡ期卵子短時授精后8 h未觀察到第二極體。65例受精失敗患者年齡(32.56±1.81)歲，不孕時間(4.1±2.3)年;不育原因為輸卵管因素28例、盆腔粘連4例、子宮內膜異位癥3例，原因不明30例。

1.2 IVF、ICSI方法 超促排卵采用常規長方案，當至少有3個卵泡直徑達16 mm時注射10 000 U HCG，注射后36～38 h在超聲引導下經陰道取卵。取卵后培養2～4 h授精，精液采用密度梯度離心+上游法處理，精子濃度為5～10萬條/卵，精卵共育4～8 h。IVF后4 h拆卵觀察第二極體，對未出現第二極體的卵子于8 h后再次觀察，若未出現原核或第二極體則判為完全受精失敗，立即對其行ICSI補救，操作過程同常規 ICSI［8］。ICSI后 16 ～18 h 確認受精情況，繼續培養至第3天移植。選擇優質胚胎(Ⅰ、Ⅱ級胚胎)2～3枚進行移植，移植后35 d后超聲觀察到妊娠囊及胎心搏動的判為臨床妊娠。

2 結果

本組ICSI后16 h觀察到541枚卵子出現雙原核及第二極體，判斷為正常受精，正常受精率為84.3%;12枚卵出現3個原核為異常受精，89枚卵未受精。第2天受精卵均出現卵裂，第3天觀察到289個6～8個細胞的優質胚胎，優質胚胎率為53.4%。移植補救ICSI胚胎152個，平均移植2.34個。移植后50 d行B超檢查發現臨床妊娠29例，臨床妊娠率44.6%。

3 討論

導致受精完全失敗的根本原因是精卵不能識別或識別失敗，IVF后18 h行挽救性治療，雖可受精，但受精率、優質胚胎率、5個細胞以上胚胎率均低。其原因可能為卵齡延長及暴露于培養液中的卵母細胞內遺傳物質及染色體發生異常的幾率增加［9］，胚胎發育能力低，而且胚胎發育狀況與子宮內膜不同步，所以妊娠率并不理想。我們以往采用授精后18 h對受精失敗的卵子進行ICSI補救，23例患者中僅2例妊娠。因此，探索早期卵子受精的判斷和最適宜的補救ICSI時間有重要意義。

第二極體的排出是卵子受精的早期表現。Nagy等［10］報道，ICSI授精后 2、4、6 h 約有 23%、68%、90%的受精卵出現第二極體，而46.37%的卵于授精后8 h出現原核［11］。我們發現，授精后4、8 h通過觀察第二極體的出現判斷受精的符合率分別為86.0%和96.8%，所以本研究對8 h未觀察到第二極體或原核的卵子實施 ICSI，可以最大限度減少誤穿，從而避免多精受精的可能。本研究對642枚未出現第二極體的MⅡ期卵子立即行ICSI，ICSI后16 h 541枚卵子出現雙原核及第二極體，判斷為正常受精，正常受精率為84.3%，優質胚胎率53.4%，臨床妊娠率44.6%。這表明IVF后8 h對失敗者實施ICSI補救，可避免卵子老化，其受精率、優質胚胎率、受精和胚胎的發育模式更接近于常規ICSI，且可供冷凍胚胎數多，累積妊娠率也增加，而異常受精率并未增加。值得注意的是，IVF授精8 h后4% ～5%的卵細胞有可能出現延遲受精，ICSI對這部分卵子會造成多精受精。其次，當第一極體出現分裂或碎片時很難與第二極體區別，易造成誤判，實施ICSI后亦可造成多精受精。本結果顯示，有12枚受精卵出現3個原核，所占比例較小。對于極體分裂難于區分是否是第二極體時，通過8 h觀察早期原核的出現可顯著減少誤判。因此，我們認為IVF后8 h對未出現原核或未排出第二極體的卵子及時實施ICSI，可成為預防受精失敗的有效方法。

［1］李明，宋瑋，劉平，等.75例常規IVF失敗后補救ICSI臨床結局分析［J］.中國優生與遺傳雜志，2008，16(6):112-114.

［2］曾勇，胡曉東，宋成，等.體外授精失敗后補行卵胞漿內單精子注射的臨床價值探討［J］.生殖與避孕，2006，26(1):32-34.

［3］Kuczynski W，Dhont M，Grygonik C，et al.Rescue ICSI of unfertilized oocytes after IVF［J］.Hum Reprod，2002，17(9):2423-2427.

［4］蔡令波，馮婷，陳娟，等.卵細胞胞質內單精子注射對體外授精能力缺陷的改善［J］.中華男科學雜志，2005，11(12):895-896，899.

［5］馬學工，黨小紅，紀冰.常規IVF完全失敗后行補救 ICSI 10例［J］.實用婦產科雜志，2007，23(8):501-502.

［6］管群，張琪瑤，孔風云，等.同周期同胞卵研究較早期實施補救ICSI價值的探討［J］.現代婦產科進展，2008，17(8):582-584.

［7］Nagy ZP，Rienzi L，Ubaldi FM，et al.Effect of reduced oocyte aging on the outcome of rescue intracytop lasmic sperm injection［J］.Fertil Steril，2006，85(4):901-906.

［8］陳子江.人類生殖與輔助生殖［M］.北京:科學出版社，2005:373-460.

［9］Pellestor F，Andreo B，Amal F，et al.Matemal aging and chromosom al abnormalities:New data drawn fromin vitrounfertilized human oocytes［J］.Hum Genet，2003，112(2):195-203.

［10］Nagy ZP，Liu J，Joris H，et al.Time course of oocyte activation，pronucleus formation and cleavage in human oocytes fertilized by intracytoplasmic sperm injection［J］.Hum Reprod，1994，9(9):1743-1748.

［11］紀冬梅，張愛軍，孫貽娟，等.短時體外授精后原核形成觀察的相關研究［J］.中國優生與遺傳雜志，2009，17(12):93-95.