NF-κB、Ki-67和E-cad在皮膚鱗狀細胞癌和基底細胞癌的表達及相關分析

施佳音,夏鈺弘

(南京醫科大學附屬無錫市人民醫院,江蘇無錫 214023)

皮膚鱗狀細胞癌(SCC)和基底細胞癌(BCC)為皮膚科常見腫瘤。本研究應用免疫組化EnVision二步法檢測NF-κB、Ki-67和E-cad在正常皮膚組織、皮膚SCC和BCC的表達,并進行差異比較和相關性分析,以探討此三者的相關性及其與皮膚SCC和BCC惡性程度之間的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 石蠟包埋標本來源于我院病理科1990～2005年存檔標本,其病理診斷標準參照世界衛生組織腫瘤診斷標準。其中BCC 30例(男 17例、女 13例,平均年齡 59.6歲,發生于面部 19例、軀干1l例)、SCC 50例(男32例、女18例,平均年齡61.7歲,發生于面部33例、軀干 17例)及正常皮膚標本20例(分別來自頭、面、軀干)。皮膚SCC標本根據Broders法判斷分級：其中Ⅰ級26例,Ⅱ～Ⅲ級24例。

1.2 方法 兔抗人NF-κB/p50多克隆抗體,克隆號RAB-0531,即用型;兔抗人Ki-67單抗隆抗體,克隆號MIB-1,即用型;鼠抗人E-cad單抗隆抗體,克隆號MAB-0247;購自福州邁新生物技術開發有限公司。免疫組織化學采用EnVision法,切片經常規二甲苯脫蠟梯度乙醇水化。一抗孵育前切片經0.01 mol/L檸檬酸緩沖液(pH 6.0)煮沸抗原修復。操作步驟按產品說明書進行。二氨基聯苯胺顯色。選用已知陽性的肺癌組織為陽性對照,以PBS液代替一抗作為空白對照。

1.3 結果判斷 NF-κB主要在細胞質著色,蛋白染色陽性信號均呈棕黃色顆粒。Ki-67染色信號定位于細胞核,胞核出現深棕色為陽性標記。E-cad陽性判斷以細胞質、細胞膜出現棕黃色顆粒為陽性,無著色為陰性。根據顯色強度和陽性細胞數兩項指標判斷陽性等級。按顯色強度分為無色、黃色、棕黃色和棕色,分別計分為 0、1、2、3分,按陽性細胞占同類細胞的比例分為：0、＜1/3、1/3～2/3、＞2/3,分別計分為 0、1、2、3分。然后根據兩項乘積計分判斷其結果。兩者定性積分表達≤3分為陰性表達,4～5分為弱陽性(+),6～7分為陽性(++),8～9分為強陽性(+++)。每張切片隨機選擇5個視野在100倍視野下計數,取其平均值以避免隨意性。

1.4 統計學方法 采用SPSS11.0統計軟件進行分析,數據以率表示,比較采用 χ2檢驗。相關性分析用Spearman相關。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 NF-κB在各種組織中的表達 NF-κB在1例正常皮膚中弱陽性表達,陽性率為 5%(1/20)。在BCC和SCC的陽性率分別為60%(18/30)、92.0% (46/50),(χ2=12.0,P＜0.05),表現為腫瘤細胞核出現棕黃色顆粒。在SCCⅠ級和Ⅱ～Ⅲ級的總陽性率分別為92.3%(24/26)、91.7%(22/24)(P＞0.05),但在SCCⅠ級和Ⅱ～Ⅲ級中的強陽性(++～+++)率分別為30.8%(8/26)、83.3%(20/24),兩者比較有統計學差異(χ2=13.9,P＜0.01)。

2.2 Ki-67在各種組織中的表達 Ki-67在1例正常皮膚中弱陽性表達,陽性率為10.0%(2/20)。在BCC和SCC的陽性率分別為66.7%(20/30)、94.0% (47/50),兩者比較有統計學差異(χ2=8.383,P＜0.05),表現為腫瘤細胞核出現棕黃色顆粒。在SCCⅠ級和Ⅱ～Ⅲ級的總陽性率分別為 92.3%(24/26)、95.8%(23/24),兩者比較無統計學差異(χ2=0.000, P＞0.05),但在SCCⅠ級和Ⅱ～Ⅲ級中的強陽性率分別為34.6%(9/26)、91.7%(22/24),兩者比較有統計學差異(χ2=17.241,P＜0.01)。

2.3 E-cad在各種組織中的表達 E-cad在正常皮膚陽性率為80%(16/20)。在BCC和SCC的陽性率分別為60%(18/30)、30%(15/50),兩者比較有統計學差異(χ2=6.963,P＜0.05),陽性表達主要以胞膜為主.部分伴胞質陽性,強度深淺不等。在SCCⅠ級和Ⅱ～Ⅲ級的強陽性率分別為34.6%(9/26)、25%(6/24),兩者比較有統計學差異(χ2=4.120,P＜0.05)。

2.4 相關性分析 皮膚BCC和SCC組織中NF-κB和Ki-67的陽性細胞表達呈正相關(r=0.31,P＜0.05),NF-κB和E-cad的表達呈負相關(r=-0.25,P＜0.05)。

3 討論

在細胞分化、增殖及正常平衡的維持中,基因對凋亡的控制起關鍵作用。NF-κB是普遍存在于細胞質中的一種快反應轉錄因子,是由P50和P65(Rel-A)兩個亞單位構成的異源二聚體。以往的研究主要集中在 NF-κB在免疫反應和炎癥反應中的作用[1]。最近研究發現,NF-κB在腫瘤的發生、發展中也起重要作用,它可調控細胞的增殖、分化、凋亡及惡性轉化[2]。本研究結果顯示,NF-κB在皮膚BCC和SCC的陽性表達率顯著高于正常對照組,且在皮膚SCC的陽性表達率顯著高于BCC。在SCCⅠ級和Ⅱ～Ⅲ級中的 NF-κB的總陽性率比較差異無統計學意義,但其強陽性率比較差異有統計學意義。說明NF-κB通過對凋亡基因的控制,參與調控腫瘤細胞的侵襲性生長,隨著腫瘤分化程度的降低,NF-κB的表達有明顯增高趨勢。提示NF-κB有助于鑒別腫瘤良惡性及其生長行為方式。

Gerdes等在1983年提出Ki-67是人類所有增殖細胞核中普遍存在的標志性抗原。Ki-67蛋白已用于臨床腫瘤的輔助診斷,并與腫瘤的惡性度、轉移及預后有關。本研究中,Ki-67的表達與年齡、性別、組織類型均無顯著相關性,但在皮膚BCC和SCC的陽性表達率顯著高于正常皮膚,且在皮膚SCC的陽性表達率顯著高于BCC。雖然在SCCⅠ級和Ⅱ～Ⅲ級中的總陽性率表達比較差異無統計學意義,但在SCCⅠ級和Ⅱ～Ⅲ級中的強陽性率的進一步比較中差異有統計學意義。說明 Ki-67參與了腫瘤細胞的異常增殖過程,與惡性程度有關,Ki-67的高表達與組織的分化程度有關,能較準確地反映出腫瘤組織的增殖活性,有助于判斷腫瘤組織的生物學行為。

許多研究表明在腫瘤的浸潤和轉移過程中有E-cad丟失,主要機制是E-cad丟失導致細胞間黏附性降低致細胞脫落,細胞間的接觸抑制減弱致細胞過度增殖[3],E-cad對維持組織結構形態起重要作用。本組中E-cad在BCC的表達水平較高,因為BCC不具有轉移性。也有學者提出E-cad主要起到抑制腫瘤轉移的作用[4]。本組中E-cad在正常皮膚中呈陽性表達,但在腫瘤組織中的表達下降,尤以SCC下降明顯;其中在SCCⅡ～Ⅲ級中的表達較SCCⅠ級下降明顯。表明其表達與腫瘤細胞的惡性程度有關,與魏志平等[5]的報道一致。

本研究證實了隨著腫瘤細胞分化程度的降低, NF-κB、Ki-67的表達有增高趨勢,E-cad的表達有下降趨勢。提示BCC和SCC侵襲性生長與NF-κB、Ki-67的表達增高有關,SCC易發生轉移的特性與E-cad的低表達有關。由此可見,NF-κB、Ki-67和E-cad的表達與皮膚SCC和BCC的惡性程度、生物學行為密切相關。NF-κB信號轉導通路可能通過對凋亡基因的控制來對Ki-67、E-cad進行調節,進而控制腫瘤。

[1]Aggarwal BB,Takada Y,Shishodia S,et al.Nuclear transcription actor NF-kappa B;role in biology and medicine[J].Indian Journal of Experimental Biology,2004,42(4)：341-353.

[2]Dong QG,Sc labasGM,Fujioka S,et a1.The function ofmultiple IκB：NF-κB complexes in the resistance of cancer cells to Taxol-induced apoptosis[J].Oncogene,2002,21(42)：6510-6519.

[3]張麗霞,途亞庭.鈣黏素在某些皮膚病發病機制中的意義[J].國外醫學：皮膚性病學分冊,2005,31(2)：108-109.

[4]Koseki S,Ansai S,Aoki T,et a1.E-cadherin expression in skin tumors using an AMeX immunohistostaining method[J].JDermatol,2000,27(5)：307-311.

[5]魏志平,李艷,劉彥群.上皮型鈣黏附素和基質金屬蛋白酶-9在皮膚鱗狀細胞癌的表達及其意義[J].臨床皮膚科雜志,2007, 36(7)：426-428.