小鼠腹腔吞噬實(shí)驗(yàn)技術(shù)

【摘要】 細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)是醫(yī)學(xué)院校細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)課程所開(kāi)設(shè)的實(shí)驗(yàn)必修項(xiàng)目之一。實(shí)際教學(xué)過(guò)程中，對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行改革和經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，采用適合的實(shí)驗(yàn)條件，實(shí)驗(yàn)效果較好

【關(guān)鍵詞】 細(xì)胞吞噬；巨噬細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)技術(shù)

高等動(dòng)物體內(nèi)具有防御功能的吞噬細(xì)胞系，它是由單核細(xì)胞核粒細(xì)胞等白細(xì)胞構(gòu)成的，是機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)的重要組成成分。單核細(xì)胞穿出血管進(jìn)入組織后逐漸演變成巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞主要靠吞噬作用來(lái)處理異物。當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌等病原體或其他異物入侵時(shí)，巨噬細(xì)胞首先在趨化因子的作用下向異物移動(dòng)，然后細(xì)胞表面伸出偽足包裹異物，將異物吞入細(xì)胞內(nèi)形成吞噬泡，隨后溶酶體與吞噬泡融合并消化異物。

小鼠腹腔吞噬實(shí)驗(yàn)是臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)本科層次醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)課程開(kāi)設(shè)的實(shí)驗(yàn)必修項(xiàng)目。我們對(duì)該實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行了一系列的改進(jìn)，增強(qiáng)了學(xué)生的實(shí)踐操作能力，同時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果更直觀，便于學(xué)生理解細(xì)胞吞噬現(xiàn)象。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1動(dòng)物小白鼠（8周大）。

1.2試劑6%淀粉肉湯，4%臺(tái)盼藍(lán)溶液，1%綿羊紅細(xì)胞懸液，生理鹽水。

1.3材料解剖剪，鑷子，載玻片，蓋玻片，注射器，塑料滴管。

1.4儀器顯微鏡。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1實(shí)驗(yàn)第一天向小鼠腹腔內(nèi)注射1ml（6%）淀粉肉湯（含適量臺(tái)盼藍(lán)），已誘導(dǎo)腹腔產(chǎn)生巨噬細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)第二天再次向小鼠腹腔注射1ml（6%）淀粉肉湯（含適量臺(tái)盼藍(lán)），加強(qiáng)誘導(dǎo)，使產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞。

2.2實(shí)驗(yàn)第三天，向小鼠腹腔內(nèi)注射0.5ml(1%)綿羊紅細(xì)胞懸液，然后輕揉小鼠腹部使分散均勻。綿羊紅細(xì)胞作為異物侵入小鼠機(jī)體，巨噬細(xì)胞向綿羊紅細(xì)胞靠近并伸出偽足吞噬。

2.330分鐘后，頸椎脫位法處死小鼠。

2.4打開(kāi)小鼠腹腔，滴入一滴生理鹽水稀釋腹腔積液。

2.5吸取腹腔積液，用30%的甘油作為封片劑制備臨時(shí)裝片，顯微鏡下觀察。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在40倍物鏡下，視野中淺藍(lán)色是小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，較小的透明細(xì)胞是綿羊紅細(xì)胞，能夠觀察到小鼠腹腔巨噬細(xì)胞伸出偽足正在包圍綿羊紅細(xì)胞（如圖1），也能夠觀察到在小鼠腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi)被吞噬進(jìn)去的幾個(gè)綿羊紅細(xì)胞（如圖2）。

圖1 小腹腔巨噬細(xì)胞吞噬紅細(xì)胞

（1.小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 2.綿羊紅細(xì)胞）

圖2小腹腔巨噬細(xì)胞吞噬紅細(xì)胞

（1.小鼠腹腔巨噬細(xì)胞 2.綿羊紅細(xì)胞）

4討論分析

本實(shí)驗(yàn)是學(xué)生在理論課上學(xué)習(xí)過(guò)細(xì)胞膜吸收大分子和顆粒物質(zhì)的吞噬作用后，要求學(xué)生觀察細(xì)胞吞噬現(xiàn)象。細(xì)胞吞噬也是醫(yī)學(xué)免疫學(xué)中的重要內(nèi)容，因此也對(duì)學(xué)生以后的學(xué)習(xí)打下基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠也是學(xué)生首次接觸的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，用小鼠來(lái)觀察細(xì)胞吞噬現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)效果較好，并能提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)操作技能和動(dòng)手能力，增強(qiáng)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣和積極性。

5注意事項(xiàng)

本實(shí)驗(yàn)中要掌握好小鼠腹腔注射綿羊紅細(xì)胞懸液到處死小鼠吸取腹腔積液觀察的時(shí)間，時(shí)間太短看不到吞噬現(xiàn)象；處死小鼠以及打開(kāi)小鼠腹腔的過(guò)程，不能使小鼠的血液進(jìn)入腹腔，否則很難觀察到吞噬現(xiàn)象。

參考文獻(xiàn)

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