甲氧基測(cè)定法影響因素分析

趙文法，李亮亮，孫大贏

（1.山東省聊城市藥品檢驗(yàn)所，山東 聊城 252000； 2.河南省洛陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 洛陽(yáng) 471000）

甲氧基測(cè)定法為《中國(guó)藥典（二部）》附錄收載的法定檢測(cè)方法，自1990年版第1次增訂，至2010年版均采用Zeisel法進(jìn)行測(cè)定[1]。1885年Zeisel最早建立了測(cè)定甲氧基的常量分析方法，后幾經(jīng)改進(jìn)形成了目前應(yīng)用的微量測(cè)定方法。本研究以羥丙甲纖維素為供試品，參照2010年版《中國(guó)藥典（二部）》附錄ⅦF規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)定，重點(diǎn)考察分析反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。

1 儀器與試藥

甲氧基含量測(cè)定儀1套。羥丙甲纖維素（山東阿華制藥有限公司）；苯酚，氫碘酸，冰醋酸，醋酸鉀，溴，甲酸，氮?dú)?，試劑均為市售分析純；硫代硫酸鈉滴定液（自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定法

照2010年版《中國(guó)藥典（二部）》附錄ⅦF規(guī)定的方法進(jìn)行測(cè)定，分別考察反應(yīng)溫度120，130，140，150，160，170℃和反應(yīng)時(shí)間20，30，40，50，60，70min反應(yīng)的完成程度。Zeisel法測(cè)定甲氧基含量的原理為[2－3]：

ROCH3+HI→ROH+CH3I↑ CH3I+Br2→CH3Br+BrI

BrI+Br2+3H2O→HIO3+5HBr Br2+HCOOH→2HBr+CO2

HIO3+5I－+5H+→3I2+3H2O 3I2+6Na2S2O3→6NaI+3Na2S2O3

2.2 反應(yīng)溫度考察

溫度與反應(yīng)速率相關(guān)，一般情況下，溫度越低，反應(yīng)速率越慢?？刂品磻?yīng)時(shí)間為50 min，通過測(cè)定不同反應(yīng)溫度下供試品中甲氧基含量，考察反應(yīng)進(jìn)行的完全程度。結(jié)果見表1?？梢姡瑴囟仍?40℃和150℃時(shí)測(cè)定結(jié)果相當(dāng)。隨著溫度增加，甲氧基含量反而降低，分析其原因可能是反應(yīng)太快，反應(yīng)生成的CH3I未被吸收液完全吸收而造成。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，反應(yīng)溫度在140～150℃之間較合適。

2.3 反應(yīng)回流時(shí)間考察

表1 不同加熱溫度下所測(cè)甲氧基含量

控制反應(yīng)溫度為150℃，反應(yīng)速率相對(duì)固定，反應(yīng)進(jìn)行的完全程度與反應(yīng)時(shí)間有關(guān)。如果反應(yīng)時(shí)間足夠長(zhǎng)，則反應(yīng)比較完全，不同回流時(shí)間所得的供試品中甲氧基含量見表2。可見，回流時(shí)間在40min和50min時(shí)，所得的結(jié)果較接近，反應(yīng)回流時(shí)間越短，誤差越大。說(shuō)明甲氧基與氫碘酸的反應(yīng)速率比較慢，回流50min足夠讓反應(yīng)進(jìn)行完全。以反應(yīng)時(shí)間為橫坐標(biāo)、測(cè)得的甲氧基含量為縱坐標(biāo)繪制反應(yīng)進(jìn)度圖（圖1），可見前30 min所測(cè)得的甲氧基含量變化明顯，反應(yīng)的大部分是在前30 min內(nèi)進(jìn)行的。因此，要想在實(shí)際測(cè)定中降低誤差，前30min的實(shí)驗(yàn)條件控制尤其重要。

表2 不同回流時(shí)間下所測(cè)得的甲氧基含量

圖1 反應(yīng)進(jìn)度圖

2.4 其他因素考察

實(shí)驗(yàn)裝置：甲氧基測(cè)定法的實(shí)驗(yàn)裝置由多個(gè)部分組成，有多個(gè)連接。反應(yīng)生成的CH3I在實(shí)驗(yàn)條件下呈氣態(tài)，應(yīng)采用配套么口裝置，在各個(gè)磨口處涂抹適量凡士林增加氣密性，試驗(yàn)前檢查整套裝置氣密性。任何一個(gè)連接漏氣，結(jié)果都將受影響。

氮?dú)饬魉伲旱獨(dú)饬魉僖钥刂葡礈旃芑蛭展軞怏w出口處，每秒1～2個(gè)氣泡為宜。流速太快可能導(dǎo)致反應(yīng)液中游離的HI和I2被帶出，或是反應(yīng)生成的CH3I未被吸收液完全吸收；流速太慢，反應(yīng)生成的CH3I在到達(dá)吸收管之前便冷凝而損失。因此，氮?dú)饬魉僖獓?yán)格控制，過快或過慢都會(huì)使結(jié)果偏離。

操作者熟練程度：試驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)裝置的鏈接，各實(shí)驗(yàn)條件的控制，試劑加入量加入方法等，都會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生誤差，導(dǎo)致試驗(yàn)重復(fù)性較差。

3 討論

甲氧基含量測(cè)定在藥物分析中十分重要，利用Zeisel方法，在反應(yīng)回流時(shí)間為50min、控制油浴溫度為150℃條件下，測(cè)定甲氧基含量，可以較準(zhǔn)確地得到結(jié)果。反應(yīng)時(shí)間過短或過長(zhǎng)，反應(yīng)溫度過高或過低都會(huì)影響結(jié)果。Zeisel法是測(cè)定甲氧基含量的經(jīng)典方法，但該方法實(shí)驗(yàn)條件要求較高，重復(fù)性較差，試驗(yàn)中用到熔融苯酚及液溴，毒性較大；實(shí)驗(yàn)裝置有待于進(jìn)一步改善，實(shí)驗(yàn)方法有待于進(jìn)一步提高。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（二部）[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：49.

[2]蘭州大學(xué)化學(xué)系，中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所.有機(jī)微量定量分析[M].北京：科學(xué)出版社，1978：295.

[3]孫吉令，徐慧卿.羥丙氧基和甲氧基測(cè)定法原理[J].山東醫(yī)藥工業(yè)，1992，11（2）：17－18.