高效液相色譜法測(cè)定注射用奧拉西坦的含量

姜衛(wèi)東，盧凱旋 ，萬 順，周 玲，任榮軍

(1.湖南健朗藥業(yè)有限責(zé)任公司，湖南 岳陽 414000; 2.湖南省岳陽市藥品檢驗(yàn)所，湖南 岳陽 414000)

奧拉西坦為新一代腦代謝改善藥，屬新型吡咯烷酮類(環(huán)GABOB)衍生物，對(duì)腦血管病、腦損傷、腦瘤(術(shù)后)、顱內(nèi)感染、癡呆、腦變性疾病等均有良好療效。目前其已在歐洲、美國(guó)、日本和韓國(guó)上市并廣泛應(yīng)用于臨床，現(xiàn)行藥品標(biāo)準(zhǔn)采用氮測(cè)定法測(cè)定奧拉西坦含量[1]，方法專屬性不強(qiáng)，為有效控制本品質(zhì)量，筆者采用反相高效液相色譜法，建立了奧拉西坦的含量測(cè)定方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津L－20AT系列高效液相色譜儀(Slution色譜工作站，二極管陣列檢測(cè)器);電子分析天平(梅特勒托利多儀器上海有限公司)。奧拉西坦對(duì)照品(由湖南健朗藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，純度為99.8%);注射用奧拉西坦(湖南健朗藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)分別為20091001，20091002，20091003);甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Ultimate XB－C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－水(5∶95);檢測(cè)波長(zhǎng):214 nm;流速:0.8 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按奧拉西坦計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液制備

取奧拉西坦對(duì)照品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。取本品約相當(dāng)于奧拉西坦20 mg的量，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。取本品輔料適量，同供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取注射用奧拉西坦約20 mg，置錐形瓶中，按下列方法進(jìn)行處理。酸破壞性試驗(yàn):加0.1 mol/L鹽酸10 mL溶解后，水浴中回流30 min，冷卻，用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至近中性;堿破壞性試驗(yàn):加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液5 mL溶解后，水浴中加熱5 min，冷卻，用0.1 mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至近中性;高溫破壞試驗(yàn):置105℃恒溫干燥箱中5 h;氧化破壞試驗(yàn):加3%過氧化氫2 mL溶解后，放置2 h;光照試驗(yàn):于4 700 lx下光照破壞2 d。然后均加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，該色譜條件可將奧拉西坦與降解產(chǎn)物及輔料完全分離，分離度大于1.5。從二級(jí)管陣列檢測(cè)器提取的色譜圖上可知奧拉西坦峰的純度角小于閾值，表明該峰為單一峰，該方法專屬性良好。見圖1。

圖1 方法專屬性考察色譜圖

2.4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察與定量限確定:精密稱取奧拉西坦對(duì)照品16.16 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備溶液。精密量取對(duì)照品貯備溶液稀釋一定體積，制成質(zhì)量濃度分別為 0.040 4，0.080 8，0.161 6，0.242 4，0.323 2 g/L 的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對(duì)照品質(zhì)量濃度 C(g/L)為橫坐標(biāo)、峰面積 A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=7.98×106C+20 923.74，r=0.999 8(n=5)。結(jié)果表明奧拉西坦對(duì)照品質(zhì)量濃度在0.040 4～0.323 2 g/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。另精密稱取奧拉西坦對(duì)照品10.1 mg，置50 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，精密量取適量，加流動(dòng)相逐步稀釋至信噪比 S/N約為10，進(jìn)樣量為10 μL，測(cè)得奧拉西坦的最低檢出限為1.28 ng。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μL。結(jié)果奧拉西坦對(duì)照品平均峰面積為1 630 382，RSD為0.64%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液，分別在 0，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣10 μL。結(jié)果奧拉西坦峰面積的 RSD=0.4%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果(n=6)

重復(fù)性試驗(yàn):取本品約相當(dāng)于奧拉西坦20 mg，同時(shí)稱取6份，分別置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取奧拉西坦對(duì)照品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。按上述色譜條件測(cè)定，分別精密量取10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果注射用奧拉西坦的平均含量為104.2%，RSD 為 0.6%(n=6)。

加樣回收試驗(yàn):稱取奧拉西坦對(duì)照品約16，20，24 mg各3份，精密稱定，確定分別置100 mL量瓶中，各加空白輔料適量，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;另稱取對(duì)照品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取上述溶液各10 μL，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.5 樣品含量測(cè)定

取3批不同批號(hào)的樣品，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為20091001，20091002，20091003的樣品中奧拉西坦含量分別為101.6，101.2，101.8 mg/g，含量平均值為101.5 μg/g。

3 討論

奧拉西坦極性較大，易溶于水，不溶于乙腈，常規(guī)測(cè)定方法為氮測(cè)定法[1]，文獻(xiàn)報(bào)道多采用氰基柱[2－3]、氨基柱[4]的高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。筆者通過考察不同的色譜柱，發(fā)現(xiàn)Ultimate C18柱與氰基柱均能對(duì)奧拉西坦進(jìn)行分離，但對(duì)于與類似結(jié)構(gòu)化合物吡拉西坦的分離及峰形對(duì)稱性，前者效果更好。并且，采用Ultimate C18柱分離奧拉西坦，出峰時(shí)間快，方法耐用性較好。

奧拉西坦在紫外區(qū)無吸收，選用示差析光檢測(cè)器，檢測(cè)靈敏度太低;采用紫外檢測(cè)器的末端吸收，經(jīng)考察奧拉西坦在210～220 nm波長(zhǎng)之間，檢測(cè)靈敏度隨檢測(cè)波長(zhǎng)的增長(zhǎng)而降低，同時(shí)因流動(dòng)相中甲醇在末端也有吸收，故測(cè)定波長(zhǎng)也不宜選擇過小。因此，選擇214 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

[1]WS－1005(X－750)－2002，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].

[2]閆小燕，胡 欣，曹國(guó)穎.等.高效液相色譜法測(cè)定奧拉西坦氯化鈉注射液中主藥的含量[J].中國(guó)藥房，2006，17(8):618－620.

[3]劉 萍，夏 釗，彭艷梅.高效液相色譜法測(cè)定奧拉西坦口服液中奧拉西坦的含量[J].中南藥學(xué)，2008，6(6):304－306.