乳腺癌組織中Ki67及血管內皮生長因子的表達

劉小青 李 玉 徐光輝 (連云港市第一人民醫院腫瘤內科，江蘇 連云港 222000)

乳腺癌是中國婦女近年來增長幅度最大的惡性腫瘤之一。Ki67是較為肯定的核增殖標志，其表達、變化可反映腫瘤的增殖活性〔1〕。血管內皮生長因子(VEGF)在腫瘤組織血管形成中發揮重要作用，與腫瘤生長、浸潤和轉移密切相關，本研究用SP免疫組化法檢測乳腺癌組織及乳腺良性病變中Ki67及VEGF的表達，探討其與臨床因素之間的相關性及臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標本及主要試劑 所有49例標本均來自本院2007年5月至2008年9月住院擬手術的病人，入院前均無放化療治療史，并取得患者同意簽署組織樣本使用同意書。其中Ⅰ期13例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，并設乳腺良性疾病對照20例。Ki67、VEGF一抗及SP試劑盒均購自Ⅰnvitrogen公司;

1.2 方法 石蠟切片常規脫蠟，高壓煮沸2 min進行抗原熱修復處理，3%H2O2孵育5 min以消除內源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗 3 min/3次，加入一抗 Ki67、VEGF，4℃過夜，PBS沖洗3 min/3次加入二抗孵育1 h，PBS沖洗，加DAB顯色，自來水充分沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，封片。陽性結果呈棕黃色或棕褐色顆粒，不同生物學指標在細胞中的著色部位不同，Ki67及VEGF陽性細胞分別為細胞核顯色和細胞質顯色，Ki67、VEGF切片隨機觀察5個中倍視野(×200)，每個視野計數200個細胞，將各視野中陽性細胞的平均百分比作為該切片的陽性細胞百分比。

1.3 統計學方法 采用SPSS12.0統計軟件 χ2檢驗及Spearman相關分析進行數據分析。

2 結果

2.1 Ki67、VEGF在乳腺癌組織中陽性表達 見圖1。

2.2 Ki67及VEGF在乳腺組織中的陽性表達情況 49例乳腺癌標本，Ki67陽性37例，VEGF陽性者34例，而在20例乳腺良性病變組織中Ki67及VEGF陽性分別為4例及2例，乳腺癌組織中Ki67、VEGF的表達率與乳腺良性病變組織比較差異顯著(P＜0.01)。

圖1 乳腺癌組織Ki67、VEGF表達(DAB，×100)

表1 Ki67、VEGF陽性表達與乳腺癌臨床病理的關系

2.3 Ki67、VEGF的表達與乳腺癌臨床病理的關系 見表1，Ki67的表達與乳腺癌的臨床分期有關(P＜0.05)，與患者淋巴結轉移狀況無關(P＞0.05)，VEGF與臨床分期及淋巴結轉移狀況均有關(P＜0.05)。

3 討論

Ki67抗原最早在1983年由德國學者Gerdes等在霍奇金淋巴瘤源性細胞系中，使用鼠單克隆抗體抗核抗原的研究中發現，隨后以Gerdes所在學校的名稱Kiel Universily命名，Ki67是目前較為肯定的核增殖標記物，它在細胞周期的G1后期開始表達，S期和G2期表達增加，在M期達到高峰，有絲分裂結束后迅速降解，且不表達于DNA修復狀態的細胞〔2〕。

目前在乳腺癌中關于Ki67探討的焦點集中在該指標能否作為乳腺癌預測及預后判斷的指標，既往的多個研究表明Ki67與多種腫瘤的發展、轉移、及預后有關〔3～5〕。Klintman 等〔6〕在2010年研究報告表明Ki67是雌激素受體陽性及組織病理分級2級的淋巴結陰性乳腺癌患者的預后因素，并提出Ki67也許成為病理分級的補充指標。在本研究中，乳腺癌組織中Ki67的陽性率為75.5%，與其他學者的報道相近，Ki67在乳腺癌組織與乳腺良性病變組織中的表達差異顯著，并且本研究還顯示了Ki67的表達與腫瘤臨床分期呈正相關，隨著臨床分期的增高，Ki67的陽性率明顯增高，表明Ki67與乳腺癌的生長、浸潤相關。本研究還顯示了Ki67的表達與淋巴結轉移狀況無關，但因本研究樣本例數較少，還需擴大樣本量進一步探討。

VEGF是血管生成的主要調控因子，特異性的作用于血管內皮細胞，促進細胞的有絲分裂，是近年來活躍于腫瘤研究中的熱點，抗腫瘤血管生成的分子靶向藥物在不少實體瘤的治療中取得了較好的效果，這表明腫瘤中VEGF存在異常表達，本研究中乳腺癌組織中VEGF的陽性率為69.4%，VEGF的表達率與乳腺良性病變組織比較差異顯著，VEGF與臨床分期及淋巴結轉移狀況均有關。這符合惡性腫瘤發生、侵襲、轉移的生物學規律。更有學者〔7〕報道了在乳腺癌中Ki67和VEGF的表達存在正相關關系。

1 Papantoniou VJ，Souvatzoglou MA，Valotassiou VJ，et al.Relationship of cell proliferation(Ki67)to99mTc-(v)DMSA uptake in breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res，2004;6(2):56-62.

2 Beresford MJ，Wilson GD，Makris A.Measuring proliferation in breast cancer:practicalities and applications〔J〕.Breast Cancer Res，2006;8:216.

3 Mullerat J，Deroide F，Winslet MC，et al.Proliferation and p53 expression in anal cancer precursor lesions〔J〕.Anticancer Res，2003;23(3C):2995-9.

4 Liu M，Lawson G，Delos M，et al.Predictive value of the fraction of cancer cells immunolabeled for proliferating cell nuclear antigen or Ki67 in biopsies of head and neck carcinomas to identify lymph node metastasis:comparison with clinical and radiologic examinations〔J〕.Head Neck，2003;25(4):280-8.

5 Tut VM，Braithwaite kL，Angus B，et al.Cyclin D1 expression in transitional cell carcinoma of the bladder:correlation with p53，waf1，pRb and Ki67〔J〕.Br JCancer，2001;84(2):270-5.

6 Klintman M，Bendahl PO，Grabau D，et al.The prognostic value of Ki67 is dependent on estrogen receptor status and histological grade in premenopausal patients with node-negative breast cancer〔J〕.Mod Pathol，2010;23(2):251-9.

7 Nakopoulou L，Stefanaki K，Panayotopoulou E，et al.Expression of the vascular endothelial growth factor receptor-2/Flk-1 in breast carcinomas:correlation with proliferation〔J〕.Hum Pathol，2002;33(11):1061-3.