氯胺酮對束縛加懸吊應激大鼠腦組織單胺類神經遞質的影響

陸艷娟 楊成君 李曉林 (吉林大學白求恩醫學院生物化學與分子生物學實驗中心，吉林 長春 130021)

單胺類神經遞質是一種功能復雜的神經活性物質，在應激狀態下其含量異常〔1～4〕，目前尚未有關于麻醉劑氯胺酮對應激大鼠不同腦區單胺類神經遞質含量變化影響的報道。

1 材料與方法

1.1 動物與分組 雄性SD大鼠，體重(250±10)g，吉林大學實驗動物中心提供。正常飲食，晝夜飼養48 h。實驗前12～24 h禁食，不限水。取雄性SD大鼠30只隨機分為:應激對照組(S組)，將大鼠四肢用繃帶分別固定于鼠板上，頭朝下尾朝上懸掛，經股靜脈注射5 ml生理鹽水，在1 h內注射完畢;麻醉劑氯胺酮對照組(k1組)，1 h內經股靜脈注入用5 ml生理鹽水稀釋的氯胺酮10 mg/kg;在束縛加懸吊后靜脈注入用5 ml生理鹽水稀釋的氯胺酮10 mg/kg(k2組)，束縛加懸吊共6 h〔5〕。

1.2 實驗試劑與儀器 注射用氯胺酮，北京紫竹藥業有限公司;5-羥色胺(5-TH)，去甲腎上腺素(NE)，多巴胺(DA)，美國SⅠGMA公司;鄰苯二甲醛，上海化學試劑公司，L-半胱氨酸，上海康達公司。熒光分光光度計RF-5301PC(日本島津公司)，電熱三用水箱DS-1型(北京醫用儀器廠)，冷凍離心機TGL-16G型(上海分析儀器廠)。

1.3 單胺類神經遞質測定與取材 各組動物實驗結束后處死。迅速取腦組織，分出不同腦區，-80℃保存。用時取出，稱重，于冰冷、酸性正丁醇中制成勻漿，離心分離水相及有機相。5-HT在堿性條件下與鄰苯二甲醛縮合，形成具有熒光的化合物，NE、DA與氧化劑反應生成具有熒光的化合物，上述熒光化合物強度與濃度成直線關系，即可測定其熒光強度〔6〕。

1.4 統計學處理 應用SPSS13.0統計軟件，數據結果以±s表示，組間比較用t檢驗。

2 結果

2.1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量比較 k2組腦干DA含量明顯高于S組(P＜0.01)，而NE明顯高于k1組(P＜0.01);5-HT含量沒有明顯變化。見表1。組別NE DA 5-HT

表1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

表1 各組大鼠腦干NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

與S組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與 k1組比較:3)P＜0.05，4)P＜0.01;下表同

S組1.01±0.07 1.53±0.21 6.01±2.58 k1組 0.49±0.082) 1.59±0.31 5.07±1.79 k2組 0.87±0.244) 2.12±0.192)4.34±1.45

2.2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量比較 k1組和k2組NE含量明顯高于S組(P＜0.01);k2組5-HT含量明顯低于S組和k1組(P＜0.01);DA含量沒有明顯變化。見表2。

表2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

表2 各組大鼠小腦NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

組別NE DA 5-HT S組0.24±0.04 1.16±0.17 3.45±0.25 k1組 1.08±0.322) 1.32±0.39 3.46±0.51 k2組 1.29±0.162) 1.18±0.21 1.38±0.192)4)

2.3 各組大鼠皮質NE、DA、5-HT含量比較 k1組及k2組皮質NE含量都低于S組(P＜0.05，P＜0.01)，DA含量高于S組(P＜0.05)。5-HT含量各組比較無明顯差異(P＞0.05)。見表3。

表3 各組大鼠皮質NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

表3 各組大鼠皮質NE、DA、5-HT含量(μg/g，±s，n=10)

組別NE DA 5-HT S組4.33±1.94 1.18±0.35 5.43±1.44 k1組 1.08±0.222) 1.31±0.221) 5.17±0.84 k2組 1.78±0.611) 1.88±0.381)3)4.37±2.46

3 討論

近年來，抑郁癥是全球范圍內最受關注的公共衛生難題之一，應激與抑郁癥的發病有著密不可分的相關性〔7〕。應激反應的重要特征之一是下丘腦-垂體-腎上腺軸激活，主要引起交感神經興奮。單胺類神經遞質包括NE、DA、5-HT等。應激狀態時檢測腦組織中單胺類神經遞質含量變化對研究這類遞質的生理、生化功能有重要意義。在正常情況下，單胺類神經遞質的分泌保持在一定水平，并且他們之間的比例協調，從而維持功能穩定。隨著應激情況出現，單胺類神經遞質也相應發生改變，從而引起一系列功能紊亂癥狀的發生。當個體暴露于應激中，腎上腺軸活性增強，導致腎上腺皮質激素分泌增加，糖皮質激素是主要的應激激素之一，除能升高血壓外，還能影響腎上腺素α受體的表達，增加兒茶酚胺類作用效果，同時還能通過對中樞神經的影響，抑制前列腺素、緩激肽、5-HT等的合成，繼而引起血管收縮效應。糖皮質激素分泌增加還可以促進腎小管的重吸收，增加血容量，從而升高血壓。5-HT在腦內分布廣泛，是調節人體感覺、思維和行為等各種活動的重要神經遞質，其水平變化與應激密切相關。本實驗顯示，不同腦區的單胺類神經遞質NE、DA、5-HT對氯胺酮作用的敏感性不同，氯胺酮組小腦的5-HT明顯低于對照組，而NE含量明顯升高;腦干、皮質DA含量升高，說明氯胺酮對腦中樞神經產生一定的影響，以改變其神經遞質的釋放，其作用機制有待進一步探討。

1 Zhu W，Xie W，Pan T，et al.Comparison of neuroprotective and neu-rorestorative capabilities of rasagiline and selegiline against lactacystin-induced nigrostriatal dopaminergic degeneration〔J〕.J Neurochem，2008;105(5):1970-8.

2 Gonzalez MM，Aston-Jones G.Light deprivation damages monoamine neurons and produces a depressive behavioral phenotype in rats〔J〕.Proc Natl Acad Sci U SA，2008;105(12):4898-903.

3 Jahng JW，Kim NY，Ryu V，et al.Dexamethasone reduces food intake，weight gain and the hypothalamic 5-HT concentration and increases plasma leptin in rats〔J〕.Eur JPharmacol，2008;581(1-2):64-70.

4 Park SS，Schulz EM，Lee D.Disruption of dopamine homeostasis underlines selective neurodegeneration mediated by alpha-synuclein〔J〕.Eur J Neurosci，2007;26(11):3104-12.

5 李曉林，陸艷娟，李曉梅，等.束縛加懸吊應激模型大鼠血清、腦組織單胺類神經遞質含量變化〔J〕.中國實驗診斷學雜志，2008;12(11):1349-51.

6 張 燕，王洪斌，楊海霞，等.熒光分光度法測定大鼠不同腦區單胺類神經遞質〔J〕.東北農業大學學報，2010;41(1):94-6.

7 馬 東，董文心.應激與抑郁癥發病的相關性及新藥研究進展〔J〕.世界臨床藥物，2009;30(9):557-61.