益氣活血中藥對家兔心氣虛證NO、ET及血液流變學的影響

金 戈 明海霞 董曉麗 (甘肅中醫學院，甘肅 蘭州 730000)

心氣虛證類似于現代醫學的心血管疾病，可以具有不同程度的心功能不全，西醫強心、營養心肌治療效果欠佳。中藥治療心氣虛證雖有報道，但多屬臨床總結性質，缺乏系統深層次的研究。本課題組應用經驗中藥復方，由人參、黃芪、丹參、紅花、川芎組成，在傳統中醫益氣活血治療的基礎上，增加了通脈行氣藥，以祛瘀行血，調整心肌的供血狀態，改善心肌舒縮功能;從分子生物學的角度闡述中醫中藥治療心功能不全的新理論，也為益氣活血中藥應用于臨床治療提供理論依據。本文主要探討該中藥方劑對家兔心氣虛證一氧化氮(NO)、內皮素(ET)及血液流變學的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康雜種家兔，蘭州生物制品研究所提供，體重(2.5±0.2)kg，雄性。動物合格證號:醫動字第14-004。

1.1.2 試劑 膽固醇晶體(BR)，上海新興化學試劑有限公司提供(批號:960912);牛血清白蛋白晶體，杭州江濱生物技術有限公司提供(批號:20050302);25%氨基甲酸乙酯(25%烏拉坦)，上海化學試劑供應站提供(批號:9902032);20ⅠU肝素，先鋒醫藥股份有限公司(批號:H20040044)。蒸餾水、0.9%NaCl，甘肅中醫學院生命醫學實驗室提供。NO測定試劑盒，南京建成生物工程研究所(批號:20050919);ET放免藥盒，解放軍總醫院科技開發中心放免所(批號:20050919)。

1.1.3 儀器 LG-R-80血液黏度計(北京中勤世帝科學儀器有限公司，甘肅中醫學院科研實驗中心提供);旋渦混勻器，臺式離心機(XYJ80-2型)(金壇市恒豐儀器廠生產，甘肅中醫學院生命醫學實驗室提供);37℃恒溫水浴鍋(鄭州機甫儀器廠生產，甘肅中醫學院生命醫學實驗室提供);微量式移液器(芬蘭，甘肅中醫學院生命醫學實驗室提供)。

1.1.4 藥品 人參、黃芪、丹參、紅花、川芎購自甘肅中醫學院附屬醫院(每劑藥物含量依次為 10 g、30 g、30 g、10 g、10 g)。天王補心丸(濃縮丸)，蘭州佛慈制藥股份有限公司提供(批號:20040823，國藥準字:Z62020800)

1.2 方法

1.2.1 家兔心氣虛證模型的建立 家兔32只。(1)高脂飲食法:每日將BR拌入基礎飼料中，清晨喂服，每只1 g/d，持續2 w(以后喂基礎飼料)。(2)免疫定向損傷法:牛血清白蛋白結晶以生理鹽水溶解成10%溶液，經Seize漏斗過濾，于高脂飲食開始后第2周的第1天按250 mg/kg的劑量，一次性耳靜脈注射〔1〕。2個月后家兔體內變態反應產生，造模成功。

1.2.2 中藥的制備 每5劑藥加5倍蒸餾水煎煮1 h，紗布過濾，濾渣重復煎煮1次(人參單獨文火久煎1.5 h后兌入上述藥液中)，合并2次濾液濃縮。以上煎煮共分4次完成。總量為1 800 ml(相當于含生藥1 g/ml)。冰箱冷藏，用時復溫。

1.2.3 分組與給藥 造模成功32只家兔，平均分為4組:(1)造模組;(2)小劑量治療組:造模后當天以4.2 g/kg(換算系數為0.07/1.5 kg)的益氣活血中藥灌胃，1次/d，連續7 d;(3)大劑量治療組:造模后當天以8.4 g/kg的該中藥灌胃，用藥持續時間同小劑量組;(4)陽性對照組:造模后當日以0.63 g/kg(換算系數同上，相當于中劑量治療組的藥量)的天王補心丸(濃縮丸，每8丸相當于原藥材3 g)灌胃，用藥持續時間同上。生理鹽水組:家兔8只，不造模，當日以等容量生理鹽水代替中藥灌胃，用藥持續時間同上。

1.2.4 觀察指標 各組家兔分別在造模、灌胃完成后第2天進行指標的測定。經右側頸總動脈插管做各組左室血流動力學檢測后，持配7號針頭的10 ml注射器，于胸壁心跳最明顯處，將針頭刺入心臟，取出5 ml血液，迅速拔出針頭。采用化學比色法檢測NO水平。按照同樣的方法心臟取血采用非平衡放免法檢測ET水平。于清晨用7號針頭在家兔頸靜脈取血后(采血前1 d禁高脂飲食)沿管壁緩慢注入抗凝管中，輕輕顛倒混勻，以避免產生泡沫和防止血液離體后凝固。進行血液流變學的檢測應在采血后靜置20 min再進行為宜;每組采血時間應保持一致。全血黏度和血漿黏度用LG-R-80血液黏度計測定。

1.3 統計學處理 采用Office Excel統計軟件進行分析，計量資料以±s表示。用t檢驗。

2 結果

2.1 各組家兔NO指標水平比較 造模組的NO含量〔(1.533± 0.29) μmol/L〕低 于 生 理 鹽 水 組 〔(4.330±0.21)μmol/L〕，且與各組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。經益氣活血中藥治療后NO含量有所上升。大劑量組〔(18.576± 1.18)μmol/L〕與 小 劑 量 組 〔(15.934 ±1.13)μmol/L〕比較差異顯著(P＜0.01)。大劑量治療組與陽性對照組〔(15.697±1.32)μmol/L〕比較差異顯著(P＜0.01)。小劑量治療組與陽性對照組比較亦無顯著性差異。

2.2 各組家兔ET指標的變化 造模組的ET含量〔(1 830.023±239.916)pg/ml〕高于生理鹽水組〔(983.1±106.054)pg/ml〕，且與各組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。經益氣活血中藥治療后其ET的含量有所下降。大劑量治療組〔(741.034±95.539)pg/ml〕與陽性對照組〔(956.847 ±103.273)pg/ml〕比較有顯著性差異(P＜0.01)。小劑量治療組〔(836.621±100.141)pg/ml〕與陽性對照組比較亦有顯著性差異(P＜0.05)，且大劑量治療組與小劑量組比較無顯著性差異。

2.3 各組家兔血液流變學指標的變化 造模組的血液流變學指標高于生理鹽水組，除血漿黏度外其余指標與各組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。經益氣活血中藥治療后其血液流變學指標有所下降。大劑量治療組與陽性對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)。小劑量治療組中的全血黏度(中切、高切)、紅細胞比容與陽性對照組比較差異顯著(P＜0.01)，且大劑量治療組與小劑量組比較差異顯著(P＜0.01)。見表1。

表1 各組家兔血液流變學的實驗數據(±s，n=8)

表1 各組家兔血液流變學的實驗數據(±s，n=8)

與生理鹽水組比較:1)P＜0.01;與大劑量組比較:2)P＜0.01;與小劑量組比較:3)P＜0.01;與陽性對照組比較:4)P＜0.01

組別 全血黏度低切(1 mPa/s) 中切(30 mPa/s) 高切(200 mPa/s ) 血漿黏度(100 mPa/s) 紅細胞比容(HCT)生理鹽水組 7.07±0.23 4.50±0.151)3.65±0.18 1.09±0.10 0.37±0.04大劑量治療組 7.26±0.35 5.03±0.211) 3.88±0.25 1.15±0.14 0.43±0.10小劑量治療組 8.67±0.111)2) 5.75±0.161)2) 5.43±0.091)2) 1.41±0.101)2) 0.50±0.031)2)陽性對照組 8.34±0.651)2) 5.36±0.181)2)3) 4.78±0.141)2)3) 1.32±0.121)2) 0.45±0.031)2)3)造模組 9.19±0.421)2)3)4) 6.57±0.211)2)3)4) 5.89±0.191)2)3)4) 1.45±0.141)2)4) 0.57±0.061)2)3)4)

3 討論

心氣虛證是指心脈鼓動無力致心悸氣短、舌淡，動則加重，甚則脈微欲絕為主的一組證候群〔2〕。類似于現代醫學的心血管疾病，可以具有不同程度的慢性左心功能不全，但在內容上又不完全等同，西醫目前沒有安全有效的治療方法。中醫認為:“氣行則血行，氣滯則血瘀”。若心氣虛衰，帥血無力，其血非瘀即阻，故心氣虛導致血瘀，血瘀又可耗傷心氣，心氣虛與血瘀互為因果，影響著疾病的發生、發展。因此心氣虛的治療不僅要補益心氣以行血，同時也要活血化瘀以行血。本實驗取人參補氣，黃芪增加心肌收縮力，降低血液黏稠度，改善異常血液流變學指標。丹參擴張冠狀動脈，抗動脈粥樣硬化;改善心功能;降低血液黏度，改善微循環及抑制血小板聚集等作用。紅花活血祛瘀，通調血脈，以減輕心臟后負荷，還可擴張冠狀動脈，減慢心率。川芎活血行氣，有擴張冠狀動脈，降低心肌耗氧量〔3〕，降低外周阻力的作用;可抑制血小板聚集與激活，降低全血黏度及紅細胞比容，減少血漿纖維蛋白原的產生，對抗血小板活化因子，預防血栓形成〔4〕。

血液流變學是從細胞和分子水平上研究血液成分的流變特性。正常的血液流變性是保證組織器官血液灌注以維持其正常代謝活動的重要條件。血液流變性異常所引起的血流動力學異常及微循環障礙是很多疾病發病的病理基礎〔5〕。現代血液流變學的研究已從單純的血液黏度、血小板功能等檢測發展為血-血管內皮功能-血液流動的宏觀和微觀相結合的研究，且結合現代醫學理化檢查如內皮細胞分泌的生物活性因子如ET、NO等進行綜合判斷。血液宏觀流變特征主要包括全血液黏度，它是最基本的流變學指標。微觀流變特征主要包括紅細胞變形性、聚集性等。血液黏度為血液流動阻力的主要參數，它隨切變率的變化而變化，其高低主要取決于血中有形成分和大分子物質的多少，以及細胞的聚集性和變形性能力的大小。高剪切率下的血液黏度反映紅細胞變形時的血液黏度，它是血流較快時的血黏度，其主要由紅細胞變形性和血漿黏度決定〔6〕。中剪切率下的血液黏度則反映紅細胞解聚。低剪切率下的血液黏度反映紅細胞聚集的血液黏度，是血流較慢時的血黏度，主要由紅細胞聚集性和血漿黏度決定;血漿黏度主要取決于纖維蛋白原的多少。紅細胞比容升高主要受紅細胞變形能力下降的影響而改變血液流動性，造成微循環有效灌注量降低，發生血管阻塞。

血液流變學異常能引起組織缺血、缺氧及代謝紊亂和功能失調，使心臟負荷增加，心輸出量減少，微循環灌注減少。同時，它也會引起機體功能性或器質性障礙，引起腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)活化、去甲腎上腺素分泌增多，微循環收縮狹窄，阻力增高而引起血壓升高直至并發心、腦血管病的發生。目前血液流變學的改變及脂代謝紊亂是公認的兩大可控制的心腦血管疾病的重要因素〔7〕。但血液流變學指標對疾病缺乏特異性，它的改變提示體內存在誘發病灶，結合其他檢查方法能進一步確定疾病的誘因，起到輔助診斷的作用。從這個意義上講，血液流變學檢查是其他任何檢測方法不能替代的，尤其是心腦血管疾病〔8〕。因此，采取必要的措施降低血液黏滯性，可以起到早期預防、早期診斷和早期治療的效果，并可有效防止心腦血管疾病的發生。

NO是血管內皮細胞合成的一種酶催化的生物活性物質，有擴張血管、抑制血管平滑肌細胞增殖和血小板聚集〔9〕、防止血栓形成和改善微循環灌注等方面的作用，可使局部血管擴張。NO具有心肌保護作用。它在體參與神經系統、免疫系統和心血管系統的調節作用，但其對心血管系統的作用最為主要。各種心血管疾病均可顯著損害血管內皮細胞功能，導致內皮依賴性血管舒張功能障礙，NO合酶(NOS)表達異常。NOS的某種輔助因子異常及超氧離子對NO的破壞增加等因素可導致NO減少。如果其生成不足或過量，可以引起心血管系統疾病，故NO與心氣虛關系尤為密切〔10〕。它在血中的含量與心功能不全的嚴密程度密切相關〔11〕。本實驗研究結果顯示:造模組家兔血漿中的NO含量低于正常組，經益氣活血中藥治療后可使血漿中NO含量明顯增高。且益氣活血中藥大劑量升高血漿NO含量的療效明顯優于天王補心丸，并且隨著該藥物劑量的增加療效有所提高。

ET是血管內皮細胞分泌的一種強有力的血管收縮肽，通過激活鈣通道增加鈣離子內流，促進血管平滑肌收縮。在內皮損傷時，其合成或釋放增加，并與其在血管平滑肌細胞上的受體結合，調節血管緊張度而使血管收縮。

健全的血管內皮細胞是維持血管張力、調節血壓的基礎，基礎狀態下血管阻力由NO控制。NO合成不足引起高血壓、動脈粥樣硬化等心血管疾病。長期NO合成不足不僅不能有效擴張血管，還加劇了ET的縮血管作用，使血壓升高;NO相對缺乏導致抑制腎素作用下降，抑制平滑肌增生和血小板黏附與聚集能力降低，促進高血壓的維持與血栓的形成。ET和NO之間存在著相互促進或相互抑制的復雜關系，共同調節著心肌、血管的舒縮狀態和平滑肌細胞的增殖情況，直接或間接影響著心功能〔12〕。本實驗通過免疫定向損傷法造成心氣虛證家兔內皮細胞的損傷，結果顯示:正常組家兔血漿中的ET含量低于造模組，兩組比較有明顯差異。經益氣活血中藥治療后其血漿中ET含量明顯下降，且其大、小劑量治療組的下降程度高于天王補心丸。

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4 高學敏.中藥學〔M〕.第7版.北京:中國中醫藥出版社，2002:277-8，280，205，207，198.

5 錢自奮.我國血液流變學研究概況〔J〕.醫學研究通訊，1984;3:51.

6 林偉華，陳華英.高血壓患者血液流變學分析及臨床意義〔J〕.中國血液流變學雜志，2004;14(3):368-9.

7 陳少華，黃國英.高血壓和冠心病患者的血液流變性研究〔J〕.微循環技術雜志，1997;5(1):25-6.

8 熊 符，駱蘆娟，汪凡軍，等.血液流變學在常見幾種疾病檢測中的臨床意義〔J〕.中國血液流變學雜志，2002;12(1):62-4.

9 張念志，韓明向，周宜軒，等.人參注射液對冠心病心絞痛心氣虛證作用的臨床研究〔J〕.中國中醫急癥，2000;9(4):141.

10 陳達理，周立紅.中醫證型與自由基損傷的關系〔J〕.中醫研究，1999;5(2):1-3.

11 Gaballa MA，Goldman S.Overexpression of endothelium nitric oxide synthase reverses the diminished vasorelaxation in the hindlimb vasculature in ischemic heart failure in vivo〔J〕.J Mol Cell Cardiol，1999;31(6):1243-52.

12 謝夢洲，劉 強，李紹芝，等.參芪心復康對心氣虛細胞模型ET和NOS基因表達的影響〔J〕.中國中醫藥信息雜志，2004;11(10):870-1.