p53、c-erbB-2、nm23在胃癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)

劉春忻 (齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

已有研究表明，在腫瘤的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的連續(xù)過(guò)程中涉及到多種癌基因。目前研究人員非常重視胃癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的相關(guān)蛋白和基因的調(diào)控研究〔1〕。研究顯示，胃癌的發(fā)生是多基因、多因素變異所致。本文檢測(cè)胃癌的腫瘤組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中p53、c-erbB-2、nm23蛋白的表達(dá)，探討三者在胃癌轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)中發(fā)揮的作用，以及是否具有協(xié)同作用。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 臨床對(duì)象 選擇2002年1月至2009年6月在我院住院診斷并手術(shù)切除的胃癌45例，其中男34例，女11例，年齡35～89〔平均(60.3±24.5)〕歲;早期15例，中期13例，晚期17例，所有患者均為浸潤(rùn)性胃癌，按世界衛(wèi)生組織制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織分型，根據(jù)腫瘤細(xì)胞分化程度分為低分化組(黏液腺癌6例，印戒細(xì)胞癌5例、低分化腺癌10例)和高分化組(乳頭狀腺癌8例，管狀腺癌16例);均伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。35例非胃癌患者，慢性胃炎伴重度不典型增生26例，胃息肉9例。所有患者包括胃癌組織、轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)以及非癌癥胃黏膜標(biāo)本均常規(guī)經(jīng)4%甲醛固定、包埋，5μm厚切片待用。

1.1.2 試劑和儀器 鼠抗人p53單克隆抗體、鼠抗人c-erbB-2單克隆抗體(Santa Cruz產(chǎn)品);鼠抗人nm23單克隆抗體，批號(hào):20101202(武漢博士德科技有限公司產(chǎn)品)。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)酶底物顯色試劑盒，批號(hào):20101201(武漢博士德科技有限公司產(chǎn)品)。恒溫水浴箱(上海方瑞儀器廠)，實(shí)驗(yàn)用醫(yī)用微波爐(上海華舟壓敏膠制品有限公司)等。

1.2 方法

1.2.1 檢測(cè)方法 采用免疫組化 (SABC)法，乙二胺四乙酸(EDTA)修復(fù)液抗原修復(fù)組織切片，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗。然后在標(biāo)本上滴加正常山羊血清封閉液，室溫20 min。滴加Ⅰ抗 (p53、c-erbB-2、nm23)，4℃過(guò)夜。PBS沖洗。滴加生物素化二抗 (羊抗兔ⅠgG)。PBS沖洗。滴加試劑SABC，PBS沖洗，DAB顯色，蒸餾水洗。蘇木素復(fù)染、鹽酸酒精分化。梯度酒精脫水、二甲苯透明、滴樹(shù)膠封片，光學(xué)顯微鏡檢查〔2〕。

1.2.2 結(jié)果判定 p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞核中，核內(nèi)可見(jiàn)明顯的棕黃色顆粒。c-erbB-2表達(dá)產(chǎn)物定位于細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜，表現(xiàn)為有明顯的棕黃色顆粒;nm23表達(dá)產(chǎn)物以細(xì)胞質(zhì)棕黃色著色為陽(yáng)性細(xì)胞顆粒。

1.2.3 圖像分析方法 采取p53、c-erbB-2、nm23光學(xué)顯微鏡圖像，通過(guò)Ⅰmage-Pro Plus7.0分析軟件圖像分析，每張切片均采用5個(gè)圖像測(cè)定血管組織陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物的積分光密度值(ⅠOD)，取平均值代表 p53、c-erbB-2、nm23 表達(dá)強(qiáng)度，ⅠOD 值越大表示陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)越強(qiáng)〔3〕。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料均以±s表示，各組數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 p53、c-erbB-2、nm23在癌癥組織和非癌癥組織胃黏膜的表達(dá)變化 p53、c-erbB-2、nm23均在胃癌組織內(nèi)表達(dá)，且ⅠOD高表達(dá)，與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異(P＜0.05)。見(jiàn)表1，圖1。

圖1 胃癌組織病理結(jié)果

表1 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和非癌癥組織胃黏膜的表達(dá)變化(IOD，±s)

表1 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和非癌癥組織胃黏膜的表達(dá)變化(IOD，±s)

與非癌癥組比較:1)P＜0.05

組別 n p53 c-erbB-2 nm23非癌癥組35 12.12±3.43 9.34±1.64 21.63±5.65癌癥組 45 55.32±14.471) 25.74±3.751) 59.37±12.481)

2.2 癌組織與轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組織p53、c-erbB-2、nm23的表達(dá)變化 患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中p53、c-erbB-2蛋白ⅠOD呈高表達(dá)，與原位癌組織ⅠOD比較有顯著差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中nm23ⅠOD呈低表達(dá)，與原位癌組織ⅠOD比較有顯著差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表2，圖2。

表2 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的表達(dá)(IOD，±s，n=45)

表2 p53、cerbB-2、nm23在癌癥組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的表達(dá)(IOD，±s，n=45)

與癌癥組織比較:1)P＜0.05

組別p53 c-erbB-2 nm23癌癥組織55.32±14.47 25.74±3.75 59.37±112.48轉(zhuǎn)移淋巴結(jié) 95.47±23.741) 63.37±14.75 32.64±10.431)

圖2 p53、c-erbB-2、nm23在胃癌組織與轉(zhuǎn)移淋巴組織的表達(dá)(×460)

3 討論

惡性腫瘤最基本的生物學(xué)特性通常是腫瘤細(xì)胞具備轉(zhuǎn)移和侵襲的能力，轉(zhuǎn)移和侵襲是惡性腫瘤威脅患者生命的主要原因。因此，探索腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲的發(fā)生機(jī)制及其活動(dòng)規(guī)律，對(duì)惡性腫瘤的預(yù)后具有明顯的指導(dǎo)意義。腫瘤轉(zhuǎn)移(tumor metastasis)是指腫瘤細(xì)胞從其原發(fā)部位侵入體腔、血管或淋巴管，甚至靶器官或靶組織。腫瘤侵襲(tumor invasion)是指腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位沿組織間隙向外周組織侵襲的過(guò)程，其確定標(biāo)準(zhǔn)是腫瘤細(xì)胞是否突破基底膜。腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲是既不同又有聯(lián)系的兩個(gè)階段。

胃癌的分子生物學(xué)表明，在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，一些癌基因、抑癌基因會(huì)發(fā)生缺失和突變。p53基因位于17號(hào)染色體上，蛋白產(chǎn)物分子量為53 kD。野生型p53具有調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡及增殖的雙重作用，能維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，但不易檢測(cè)，在細(xì)胞內(nèi)保存期非常短。p53基因突變、缺失導(dǎo)致表達(dá)異常稱為突變型p53，保存時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)〔4〕。多種腫瘤中p53均見(jiàn)過(guò)多表達(dá)，說(shuō)明p53基因出現(xiàn)突變。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中p53蛋白表達(dá)的ⅠOD與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異，提示胃癌患者的p53蛋白是高表達(dá)的。

c-erbB-2基因(又稱HER2/neu)一般定位于人17號(hào)染色體，糖蛋白產(chǎn)物為185 kD，即c-erbB-2蛋白(ERBB2)，c-erbB-2屬于受體酪氨酸激酶(RTK)Ⅰ家族，在正常條件下，c-erbB-2通過(guò)與其他RTKⅠ受體形成異二聚體激活，參與細(xì)胞調(diào)控，涉及到細(xì)胞凋亡、增殖、遷移。腫瘤組織中，c-erbB-2過(guò)表達(dá)，促進(jìn)RTK調(diào)控網(wǎng)絡(luò)失控，增加了腫瘤轉(zhuǎn)化活性〔5〕。本研究顯示胃癌組織中c-erbB-2蛋白表達(dá)的ⅠOD與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異，提示胃癌組織中c-erbB-2蛋白高表達(dá)。

人類nm23基因有兩個(gè)亞型，即nm23-H1和nm23-H2，定位于17號(hào)染色體。nm23基因是目前分離鑒定的一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，可定位于細(xì)胞質(zhì)和質(zhì)膜。在多種生物學(xué)過(guò)程均有此酶參與，包括細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間信號(hào)傳遞等。研究顯示nm23蛋白在胃癌中與腫瘤的浸潤(rùn)有關(guān)，血管內(nèi)癌栓的腫瘤組織有較強(qiáng)的免疫反應(yīng)也支持這一觀點(diǎn)〔6〕。本研究顯示胃癌組織中nm23蛋白表達(dá)的ⅠOD與非癌癥胃黏膜比較有顯著差異，提示胃癌組織中nm23蛋白水平高表達(dá)。

研究發(fā)現(xiàn)，患者轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中p53、c-erbB-2蛋白呈高表達(dá)，與原位癌組織比較有顯著差異。可見(jiàn)c-erbB-2和p53在胃癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中表達(dá)增加。轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)表達(dá)增強(qiáng)可能由于p53的突變失去了抑癌效果，損傷的DNA得不到修復(fù)，有利于其表達(dá)。通常p53突變及表達(dá)發(fā)生于早期胃癌，而c-erbB-2則發(fā)生于晚期胃癌。c-erbB-2蛋白在轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)也呈高表達(dá)，提示c-erbB-2與胃癌轉(zhuǎn)移關(guān)系更為密切，對(duì)胃癌的預(yù)后和鑒別診斷的評(píng)估有一定價(jià)值。nm23基因的突變和缺失與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)〔7〕。本研究顯示轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中nm23呈低表達(dá)，與原位癌組織比較有顯著差異，反映出nm23基因在胃癌轉(zhuǎn)移方面起重要作用。可能在轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中nm23中的核苷二磷酸激酶能夠與G蛋白作用，通過(guò)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化。如果nm23出現(xiàn)缺失，通過(guò)細(xì)胞去分化，可發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。可見(jiàn)腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移起到一定的抑制作用。

總之，p53、c-erbB-2、nm23在胃癌組織和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的檢測(cè)對(duì)胃癌鑒別診斷和預(yù)后具有一定臨床意義。通過(guò)幾種基因檢測(cè)與CT和超聲內(nèi)鏡相結(jié)合，有希望提高胃癌臨床分期的準(zhǔn)確性，為合理選擇治療方案提供依據(jù)。

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