兩種檢測乙肝血清學標志物方法的臨床對比

秦望森 (河南省人民醫院檢驗科,河南 鄭州 450000)

乙型肝炎病毒(HBV)血清學標記物(HBV-M)檢查仍作為目前臨床診斷、治療和判斷HBV感染者病程及傳染性的重要指標之一。HBV-M的檢測方法有很多種,臨床常用的免疫檢測方法主要有放射免疫法(RIA)、ELISA。隨著科技的發展,一些新的檢測技術不斷被開發。時間分辨熒光免疫分析法(TRF IA)的研究在國內外廣為重視,其在臨床檢驗中的應用日益廣泛,特別在免疫分析方面更顯示優越性〔1〕。本文探討 ELISA與TRFIA檢測HBV-M的差異并對比分析其臨床價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2007年 2月至2009年 12月本院住院或門診疑為乙肝的患者,共 216例,其中男 148例,女 68例,年齡 18～58〔平均(30.1±12.1)〕歲。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器 上海新波生物技術有限公司 HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb和 HBcAb定量檢測試劑盒;上海榮盛有限公司 ELISA試劑盒。Anytest 2000型時間分辨熒光免疫分析儀,ELx-800酶標儀。

1.2.2 檢測方法 空腹抽取 5 ml靜脈血,當日分離血清,分別進行定性和定量檢測。TRFIA法測定前用試劑盒內配套乙型肝炎線性參比品制定標準曲線,并由Anytest 2003中文軟件得出其各標準曲線皆符合工作要求;ELISA法設立陰陽性對照。然后,應用 TRFIA和 ELISA法分別對 216例樣本進行HBV五項血清學標志物定量與定性檢測,其操作和結果判讀均嚴格按照說明書和作業指導書的規定進行。

1.3 結果判定 ELISA法:HBsAg、HBsAb、HBeAg均為樣本OD值/陰性對照,平均 OD值≥2.1判斷為陽性,否則為陰性。HBeAb為冠狀病毒(COV)=(陰性對照平均OD值 +陽性對照平均 OD值)/2,樣本 OD值≥COV為陽性,＜COV為陰性。HBcAb為 1∶30稀釋血清,COV=陽性對照平均 OD值 ×0.5,標本≥COV為陰性,＜COV為陽性。TRFIA定量 HBsAg正常值0～0.5 ng/ml,HBeAg正常值 0～0.03 NCU/ml,HBeAb正常值0～1.5 NCU/ml,HBcAb正常值 0～0.1 NCU/ml,超過正常值視為陽性。

1.4 統計學分析 應用 SPSS13.0統計軟件進行 χ2檢驗。

2 結 果

TRFIA法的HBeAb檢測結果與ELISA法比較差異有統計學意義(P＜0.05),而其他單個 HBV-M檢測項目比較差異均無統計學意義(P＞0.05)。見表 1、表 2。

表1 TRFIA法和 ELISA法檢測組合模式結果的比較(n)

表2 TRFIA法和 ELISA法檢測組合模式結果的比較(n)

3 討 論

乙肝是一種全球廣泛流行的傳染病,以 HBV感染數和HBsAg攜帶率估算,全世界HBsAg攜帶者有3.5億人,其中亞、非、拉地區有 2.8億,而中國根據流行病學調查,人群發生率較高,表面抗原攜帶率約為 15%〔2〕,占全世界 HBsAg攜帶者的1/3,占亞、非地區的 1/2。因此,篩查正常人群,對健康人群進行計劃免疫,需要一種快速、準確、靈敏、簡便的檢測方法,過篩無償獻血人員、從業人員及婚檢,并且臨床上用于病程進展的評估及療效評價等。傳統的 ELISA方法對乙肝“兩對半”血清標志物定性測定,只能判斷其陰陽性,無法得知其真正的濃度,而HBV-M定量檢測能較為準確地反映其血清中的含量,可以間接反映體內HBV復制活躍程度,對臨床藥物療效評價具有重要意義。“兩對半”定量檢測結果的有效性在檢測的過程中直接進行了標準量化質控,分高中低及三個定值質控品,“兩對半”定性檢測的室內質控;ELISA只能間接進行質控;分陰陽性質控品;免疫膠體金檢測則不能進行嚴格的室內質控,從而保證檢測結果的有效性和溯源性。

TRFIA技術是一種新型免疫標記技術〔3〕,其靈敏度高達10～18,線性范圍寬(10～18 mol/L),高穩定性(＜±1%)。TRFIA是一種特殊的熒光分析方法,以鑭系元素為標記物,又稱“解離-鑭系熒光免疫分析”。在傳統的異硫氰酸熒光素標記的熒光免疫分析中,其激發光波長和熒光光譜的 Stokes移位較小,僅 28 nm,由于激發光譜和發射光譜常有部分重疊,在測量時不可避免產生干擾。而用鑭系元素標記抗原抗體的熒光免疫分析則利用了波長和時間兩種分辨技術,因稀土離子本身激發光譜寬(300～500 nm)、熒光發射光譜窄(甚至不足 10nm),通過時間延遲,去除非特異熒光干擾,在固定時間檢測特異熒光,解決了自然背景干擾問題,明顯提高檢測靈敏度,并通過激發光與發射光之間較大的Stokes移位,很容易對激發光和發射光進行波長分辨,明顯排除了非特異熒光的干擾,提高了光譜的分辨率,使特異性明顯增強。ELISA法是目前檢驗科常用的免疫學檢測方法之一,雖操作簡單,無須特殊設備,但測定中影響因素較多,常可見到一些假陽性或假陰性結果。

對臨床來說,HBsAg、HBsAb和 HBeAb的定量更為重要。隨著儀器和試劑的國產化,檢驗費用的降低,TRFIA因其突出的高敏感性、特異性,無放射污染等特點,是取代放免的方法之一〔4〕,在乙肝“兩對半”定量檢測中有廣泛的應用前景。本文發現 TRFIA法的 HBeAb檢測結果與ELISA法比較差異有統計學意義,而其他單個HBV-M檢測項目比較差異均無統計學意義。另外,TRFIA法和 ELISA法兩種檢測方法在 HBsAg、HBe-Ab、HBcAb三種血清學標志物中,HBsAg、HBcAb兩種血清學標志物組合模式陽性率比較差異有統計學意義。TRFIA檢測HBV-M比 ELISA法敏感,可作為 HBV-M定量的一種常規方法,能為臨床檢測診斷與療效監測、預后判斷和科學試驗以及乙型肝炎疫苗免疫力的評價和高危人群預防提供及時準確的實驗信息。

1 郭淑英,潘利華,曲曉春,等 .固相時間分辨熒光免疫分析螯合劑(I)中間體 1-4,4'-二溴-6,6'-二甲基-2,2'-聯吡啶的合成〔J〕.中國衛生檢驗雜志,2006;16(3):264-6.

2 陳慧英,張錦鋒,岑小鵬,等 .ELISA檢測乙型肝炎 HBsAg室內質控血清的試劑和使用〔J〕.上海醫學檢驗雜志,2000;15(4):203-5.

3 黃憲章,石 文,莊俊華,等 .TRFIA與 ELISA法檢測乙肝病毒血清學標志物結果的比較〔J〕.現代檢驗醫學雜志,2008;23(1):59-60.

4 雷秀霞,陳小輝,徐邦牢,等 .TRFIA、MEIA、ELISA法三種方法檢測HBV-M結果分析〔J〕.中國醫師雜志,2004;6(9):1252-3.