不同殺菌劑對蓮藕腐敗病菌的室內毒力測定及田間防治效果

梁志懷，魏林，成燕清，陳玉榮，張屹，王獻慧

（1.湖南省西瓜甜瓜研究所，長沙，410125；2.湖南省植物保護研究所；3.中南大學研究生院隆平分院）

不同殺菌劑對蓮藕腐敗病菌的室內毒力測定及田間防治效果

梁志懷1，2，魏林2，成燕清2，陳玉榮2，張屹3，王獻慧3

（1.湖南省西瓜甜瓜研究所，長沙，410125；2.湖南省植物保護研究所；3.中南大學研究生院隆平分院）

人工室內接種篩選出F1和F2兩個蓮藕腐敗病菌強致病性菌株。應用菌絲體生長速率法，測定了生產中防治蓮藕腐敗病常用化學農藥對F1和F2的室內毒力。測定結果表明，供試藥劑對該病原菌菌絲生長的抑制作用存在較大的差異，其中以硫磺多菌靈的效果最好，對2個供試菌株的EC50分別為11.22 μg/mL和12.30 μg/mL；其次為甲基硫菌靈，對2個菌株的EC50分別為46.06 μg/mL和11.32 μg/mL；腐霉利的效果最差，對2個菌株的毒力分別為303.09 μg/mL和426.12 μg/mL。應用室內抑菌效果較好的硫磺多菌靈和甲基硫菌靈對腐敗病嚴重發生的藕田進行病害防治，結果顯示，2種藥劑對病情的發展具有一定的控制作用。

化學殺菌劑；蓮藕腐敗病菌；室內毒力；田間防效

蓮藕（Nelumbo nucifera）是優化農業結構、發展生態農業的主要水生蔬菜品種之一。但蓮藕在生長過程中，常受到腐敗病菌的侵染和為害，一般造成病田減產20%，嚴重的達60%～80%，甚至絕收。當前防治腐敗病菌的方法仍然主要是化學藥劑防治。雖然文獻推薦的防治藥劑種類較多，但均缺乏一定的數據支持，為此選擇了生產中常用的殺菌劑，包括百菌清、甲基硫菌靈、代森錳鋅、腐霉利、多菌靈、硫磺多菌靈等，對蓮藕腐敗病病原菌生長抑制作用進行了測定，并將篩選出的藥劑在腐敗病嚴重發生的藕田進行了應用試驗，調查了其防治效果。現將試驗結果總結如下。

1 材料與方法

1.1 供試的化學藥劑

選擇目前生產上防治腐敗病常用的藥劑，均購于本地的農藥銷售店（表1）。

表1 供試藥劑及其供試濃度

1.2 供試蓮藕腐敗病菌強致病性菌株的篩選

①蓮藕腐敗病菌的獲得 分別從長沙縣藕田和湘鄉市藕田采集了具有明顯蓮藕腐敗病病癥的病株以及超市病藕，對新鮮標樣及時進行致病菌的室內分離，對分離純化培養的菌株進行培養性狀（包括培養基上菌落形態、菌絲體的形態、分生孢子的形狀等）的檢測，對鑒定為尖孢鐮刀菌的菌株在新鮮、健康藕組織上進行回接，待接種藕塊上長出褐色至紫色典型病斑后，對發病部位進行病原菌的再分離、純化培養和鑒定，留取鐮刀菌菌株純化培養、待用。

②強致病性菌株的篩選 采用病原菌菌絲塊接種藕塊的篩選方法[2]，將在PDA培養基上培養7 d的①中的病原菌用7 mm無菌打孔器自菌落邊緣切取菌餅，用接種器將菌餅接種于藕塊中央，菌絲面朝下，每塊藕接種1個菌餅，接種后將藕塊置于 （25±1）℃的培養箱中保濕培養，5 d后測定發病病斑的大小和發病藕塊的數量。選擇發病率最高、所致病斑最大的病原菌作為供試菌株。

1.3 常用化學藥劑對腐敗病菌的室內毒力測定

采用生長速率（菌落生長直徑）法用藥劑對病原菌毒力的大小進行測定。根據預試驗結果將供試藥劑用無菌水配成適宜濃度的有效成分的母液，再配置成表1中所列的含有相應濃度藥劑的PDA平板。將1.2②中篩選出的兩個強致病性菌株在PDA培養基上培養5 d后，用滅菌的打孔器在菌落邊緣打直徑5.0 mm的菌片數片。

將菌絲片接種于含有相應濃度藥劑的PDA平板上，每個處理重復3次，設空白滅菌培養基為對照。25℃培養4 d后，對照菌餅直徑超過5.0 cm時，用十字交叉法測量菌落直徑。由菌落直徑平均值計算菌絲生長抑制率。然后以藥劑濃度的對數為X，藥劑抑制率換算的幾率值為Y，求得藥劑對蓮藕腐敗病菌的毒力回歸方程Y=a+bX，并由方程計算各供試藥劑的抑制中濃度（EC50值）。根據各藥劑的抑制中濃度比較其對腐敗病菌毒力的大小。

1.4 供試藥劑對腐敗病菌的田間防治效果

依據所得的EC50值篩選出對蓮藕腐敗病菌毒力較高的2種化學藥劑即50%硫磺多菌靈WP和70%甲基硫菌靈WP，進行防治該病害的田間試驗。

試驗于6月25日進行，選擇田間腐敗病發生較嚴重的植株，按推薦劑量對發病葉片進行藥劑噴霧防治，以噴清水為對照。噴霧時盡量將藥液噴灑到葉片正反兩面和莖稈上。噴霧前調查每處理小區總葉片數和發病葉片數，再在每小區選3片腐敗病發病初期、癥狀典型的葉片，量取每個病斑直徑（由葉緣指向葉心的病斑最長直線距離），計算平均病斑直徑。分別在施藥后5 d（6月30日）和10 d（7月5日）各調查1次。比較不同處理病斑擴展的速率，以及病葉發生的情況。用以下公式計算藥劑的防治效果：防效（%）=100×（施藥病葉增長率-對照病葉增長率）/對照病葉增長率。

2 結果與分析

2.1 不同殺菌劑對蓮藕腐敗病菌菌絲生長的影響

供試殺菌劑對腐敗病菌菌絲生長的抑制結果見表2。試驗結果表明，6種殺菌劑在設定的濃度范圍內，對病原菌菌絲的生長均具有一定的抑制作用。且在供試范圍內，抑制效果隨著藥劑濃度的增加而增加，但各藥劑對菌絲的抑制效果存在顯著差異。從菌落生長的直徑和抑制率可以看出，50%硫磺多菌靈WP的抑制效果最好，當藥劑試驗濃度僅為24.0 μg/mL時，F1和F2的菌落直徑分別為2.21 cm和1.79 cm，抑制率分別達到68.34%和74.17%；其次是70%甲基硫菌靈WP，當其濃度為120 μg/mL時，F1和F2菌落直徑僅為0.69 cm和0.88 cm，抑制率分別為90.0%和87.08%；抑制效果最差的是50%腐霉利WP，當濃度高達600 μg/mL時，2個供試菌株的菌落直徑分別為1.65 cm和2.51 cm，抑制率僅為76.36%和63.14%。試驗結果也表明，同一種化學藥劑對供試的2個蓮藕腐敗病菌強致病性菌株的抑制作用較為一致，即同時表現為強致病性，或同為弱致病性。

表2 供試殺菌劑對蓮藕腐敗病菌菌絲生長的抑制效果

2．2 不同殺菌劑對蓮藕腐敗病菌的室內毒力比較

根據表2的數值，計算6種殺菌劑對蓮藕腐敗病菌的毒力回歸方程、抑制中濃度（EC50）以及相關系數r，見表3。由表3可以看出，相關系數均達顯著（α=0.05）或極顯著水平（α=0.01）。比較各供試藥劑的EC50值發現，6種殺菌劑對蓮藕腐敗病菌都有一定毒力，但毒力大小差異很大。其中50%硫磺多菌靈WP的抑菌效果最好，其對2個菌株的EC50分別為11.22 μg/mL和12.30 μg/mL；其次為70%甲基硫菌靈WP，其對F1和F2的EC50分別為40.06 μg/mL和11.32 μg/mL；此外，百菌清抑制效果較好，對F1和F2的EC50值分別為80.02 μg/mL和102.71 μg/mL；代森錳鋅的效果較差，隊F1和F2的EC50分別為194.4 μg/mL和180.23 μg/mL；毒力最低的是50%腐霉利WP，其對2個供試菌株的EC50高達303.09 μg/mL和426.12 μg/mL。

表3 供試殺菌劑對蓮藕腐敗病菌的毒力

2.3 供試藥劑在重發病田防治效果

①對葉部病斑擴展的影響 通過室內抑菌試驗，篩選出的2種對蓮藕腐敗病菌毒力較高的藥劑為70%甲基硫菌靈WP和50%硫磺多菌靈WP，在腐敗病重發區進行噴霧施用后，對蓮藕葉片上病斑擴展的影響見表4。

表4 施藥后葉片病斑的擴展狀態

表4的結果顯示，2種藥劑施用后，盡管葉片上的病斑與施藥前比，均有所擴大，但是與噴灑清水的對照相比，病斑直徑擴展的速率均低于對照。其中施藥10 d后，噴施硫磺多菌靈的荷葉病斑直徑增長率比對照下降了16.34%，甲基硫菌靈比對照下降了3.9%。表明2種藥劑均能在一定程度上控制腐敗病菌的發展，其中以50%硫磺多菌靈WP的效果較好，持效期也較長。

②對發病葉片數量的影響 應用篩選出的70%甲基硫菌靈WP和50%硫磺多菌靈WP，在腐敗病重發區 （病葉率均在30%以上）進行噴霧。5，10 d后，調查病葉增長率，并根據病葉增長率，計算出2種供試藥劑對腐敗病菌的防效（表5）。

表5 施藥后田間發病葉片增加情況及供試藥劑的防效

由表5可看出，當腐敗病發生嚴重時，供試藥劑雖然不能完全遏制病害的再發生，但是卻能有效地降低田間病害的流行、蔓延。其中防治效果以50%硫磺多菌靈WP為好，其在田間發病葉率為31.0%的田塊施用，仍有68.99%的防效，70%甲基硫菌靈WP的防效次之，為51.31%。

3 小結與討論

通過采用菌絲體生長速率法，測定了生產中防治尖孢鐮刀菌所引起病害的常用化學農藥對2個蓮藕腐敗病菌強致病株的室內毒力。試驗結果表明，供試藥劑對該病原菌菌絲生長均具有一定的抑制作用，但它們之間的毒力存在較大的差異。其中以硫磺多菌靈的效果最好，其次為甲基硫菌靈，腐霉利的效果最差。試驗結果還表明，各藥劑對不同來源的腐敗病菌菌株抑制效果相差不大，即同一種藥劑的抑菌效果沒有因為菌種不同而呈現出較大的差異性。這也說明不同腐敗病菌菌株對同一種殺菌劑的敏感性相差不大，這為同一種殺菌劑可在不同種植區間防治蓮藕腐敗病提供了依據。

應用室內抑菌效果較好的50%硫磺多菌靈WP和70%甲基硫菌靈WP對腐敗病嚴重發生的藕田進行病害防治。結果顯示，2種藥劑對該病情的發展、蔓延具有一定的控制作用，且具有一定的持效期。其中50%硫磺多菌靈WP在施藥10 d后對腐敗病菌的防效為68.99%，70%甲基硫菌靈WP的防效略低，為51.31%。

試驗中的6種藥劑均為文獻報道的對尖孢鐮刀菌具有較好防治作用的殺菌劑，但對蓮藕腐敗病病原菌菌絲生長的抑菌作用存在較大的差異性。這也許是由于各種殺菌劑的作用機制不同而導致。如室內毒力測定中，毒力最大的藥劑——硫磺多菌靈和甲基硫菌靈，其作用機理均為干擾病原菌有絲分裂中紡錘體的形成，從而影響細胞分裂。甲基·代森錳鋅的主要殺菌機制是抑制病菌體內丙酮酸的氧化，施藥后在植物表面形成保護膜層，抑制病菌孢子發芽和侵入，進而抑制病菌蔓延；百菌清的作用機理是與真菌細胞中的三磷酸甘油醛脫氫酶發生作用，并與該酶中含有半胱氨酸的蛋白質相結合，從而破壞該酶活性，使真菌細胞的新陳代謝受破壞而失去生命力；而對腐敗病菌毒力較弱的腐霉利，其抑菌的機制主要是抑制了微生物體內甘油三酯的合成。

此外，目前雖然還沒有蓮藕腐敗病菌對殺菌劑產生抗藥性的報道，但為了延長高效殺菌劑的使用年限，避免該病原菌因產生嚴重抗藥性而降低藥效，應根據所用藥劑的持效期，盡量減少用藥次數，并且交替使用作用機理不同的殺菌劑。但不同殺菌劑之間有無協同增效、交互抗藥性，還有待進一步研究。

本試驗結果雖然證明了化學藥劑對蓮藕腐敗病具有一定的防效，田間施用化學農藥仍是控制蓮藕腐敗病的重要手段。但由于腐敗病發生的環境特殊性及葉片顯癥的滯后性，當田間腐敗病嚴重發生時（如本試驗中田間病葉率達到30%以上），化學藥劑的施用并不能起到很好的防治作用，只能緩解病情的蔓延。本試驗中所篩選出的強毒力殺菌劑對該病的防效也僅為68.99%，遠低于在旱地作物病害上的防治效果。因此，在實際生產中，不能依賴于后期的化學藥劑來防治蓮藕腐敗病，而應采用播種前的土壤消毒處理進行預防。

Toxicity Test of Different Fungicides on Pathogenic of Lotus Corruption and Control Effect in the Field

LIANG Zhihuai1,2,WEI Lin1,CHEN Yanqing1,CHEN Yurong1,ZHANG Yi3,WANG Xianhui3
(1.Hunan Plant Protection Institute,Changsha 410125,China; 2.Hunan Watermelon and Muskmelon Institute;3.Longping school,Zhongnan University)

The method of mycelium growth rate applied to measure the indoor virulence of chemical pesticides on F1and F2,strains ofFusarium oxysporum,the results showed that there wes obvious difference of effect inhibiting the growth of the pathogen mycelium between the tested chemical pesticides,which sulfur carbendazim was the best,the two tested strainsEC50were 11.22 μg/mL and 12.30 μg/mL,followed by thiophanate-methyl,the two strains of theEC5046.06 μg/mL and 11.32 μg/mL;Procymidone,the worst,were 303.09 μg/ml and 426.12 μg/mL.Application of sulfur bacteria and carbendazim thiophanate-methyl to prevent the lotus root corruption,the results showed that two agents had a certain control action to the disease's development.

Chemical fungicides;Lotus root corruption;Indoor virulence;Field control effect;Determination

10.3865/j.issn.1001-3547.2011.16.023

國家公益性行業（農業）科研專項經費項目 “水生蔬菜產業技術體系研究與示范”（200903017）

梁志懷（1968-）男，副研究員，博士，主要從事植物病害及其生物防治的研究，E-mail:liangzhihuainky@163.com

2011-07-11